人G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

楊澤妹，黃守國（海南省海口市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南海口570208）

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人G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1在宮頸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

楊澤妹，黃守國
（海南省海口市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科，海南海口570208）

摘要：目的探索人G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1（AGGF1）在宮頸癌中的表達(dá)及與宮頸癌患者預(yù)后的相關(guān)性。方法對(duì)60例宮頸癌組織及癌旁組織進(jìn)行AGGF1免疫組織化學(xué)法檢測，并對(duì)其表達(dá)及與患者預(yù)后的相關(guān)性進(jìn)行分析。結(jié)果AGGF1在宮頸癌組織中的表達(dá)比癌旁組織高（P＜0.05），Kaplan-meier曲線分析發(fā)現(xiàn)，AGGF1表達(dá)高的患者生存較差（P=0.004）。Cox回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，AGGF1可以作為獨(dú)立指標(biāo)預(yù)測宮頸癌患者術(shù)后生存。結(jié)論宮頸癌患者AGGF1高表達(dá)預(yù)示預(yù)后較差，并且其可以作為一個(gè)獨(dú)立因素來預(yù)測宮頸癌患者術(shù)后生存。

關(guān)鍵詞：AGGF1；免疫組織化學(xué)法；宮頸癌；預(yù)后

婦科三大惡性腫瘤中，宮頸癌的發(fā)病率僅次于乳腺癌，在發(fā)展中國家則居首位[1]。我國宮頸癌的發(fā)病率呈逐年上升和低齡化的趨勢，已嚴(yán)重威脅到婦女的健康和生命安全。其早期以手術(shù)治療為主，中、晚期大多采用放射治療，5年生存率僅40%左右[2]。多年來通過不斷提高手術(shù)技巧、改進(jìn)放療設(shè)備和技術(shù)來提高其生存率，但效果仍不理想；目前還沒有公認(rèn)的分子標(biāo)志物來預(yù)測宮頸癌的預(yù)后。因此，尋找新的預(yù)測指標(biāo)和宮頸癌分子靶點(diǎn)成為全球科學(xué)家研究的熱點(diǎn)，其被科學(xué)家們認(rèn)為是評(píng)估宮頸癌患者治療效果和生存率的關(guān)鍵途徑之一。

人G補(bǔ)綴FHA域血管生成因子1（angiogenic factor with G and FHA domains 1，AGGF1）基因是2004年Tian等在對(duì)1例染色體發(fā)生t（5；11）（q13.3；p15.1）平衡位點(diǎn)先天性靜脈畸形骨肥大綜合征患者進(jìn)行精細(xì)的分子遺傳學(xué)研究時(shí)，在染色體異位染色點(diǎn)克隆的一個(gè)新基因[3]。該基因在血管內(nèi)皮細(xì)胞高度表達(dá)，所編碼的蛋白在體外表現(xiàn)出強(qiáng)烈的血管生成能力，故被初步定性為一個(gè)新的血管生成因子。持續(xù)的腫瘤血管生成是宮頸癌的主要標(biāo)志和特征之一，與宮頸癌的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移及復(fù)發(fā)密切相關(guān)[4]，但是該分子是否影響宮頸癌患者術(shù)后生存尚未見相關(guān)報(bào)道。本研究的目的是探討AGGF1在宮頸癌的表達(dá)及其與宮頸癌術(shù)后患者預(yù)后的相關(guān)性。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2005年6月-2010年8月本院經(jīng)病理確診的60例宮頸癌患者為研究對(duì)象，均符合宮頸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]。入選標(biāo)準(zhǔn)：宮頸活檢或者陰道鏡下活檢病理確診為宮頸癌，臨床分期標(biāo)準(zhǔn)[國際婦產(chǎn)科協(xié)會(huì)（Federation International of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）]為Ⅰb2和Ⅱa期。入選患者年齡27～69歲，平均（44.28±7.63）歲，中位年齡40歲；FIGO分期Ⅰb2期39例，Ⅱa期21例；病理類型：鱗癌49例，腺癌7例，腺鱗癌4例。每例患者有癌組織及癌旁組織標(biāo)本，分別裝入凍存管中，置于液氮中保存。所有患者有完整詳細(xì)的臨床資料。

1.2免疫組織化學(xué)法染色

將收集的60例宮頸癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋。每例組織蠟塊4μm連續(xù)切片，低溫烤干后置入-20℃冰箱保存。采用辣根-過氧化酶連接（streptavidin-perosidase，SP）二步法對(duì)60例宮頸癌組織及癌旁組織進(jìn)行免疫組織化學(xué)法檢測，免疫熒光染色采用煙酸己可堿（上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司）和異硫氰酸熒光素（南京探求生物技術(shù)有限公司）混合染色，抗-AGGF1一抗購自美國Santa Cruz公司。

1.3結(jié)果判斷

采用雙盲法閱片，細(xì)胞中出現(xiàn)明顯的綠色熒光為陽性細(xì)胞，著色點(diǎn)位于細(xì)胞核。細(xì)胞染色強(qiáng)度評(píng)分：0分無染色，1分弱染色，2分中染色，3分強(qiáng)染色。腫瘤細(xì)胞陽性率評(píng)分：1分0～9%，2分10%～25%，3分26%～50%，4分51%～100%。將染色強(qiáng)度評(píng)分和陽性細(xì)胞率評(píng)分的乘積作為該切片的評(píng)分值。設(shè)定評(píng)分0～4分為陰性，＞4分為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，對(duì)AGGF1在宮頸癌組織及癌旁組織的表達(dá)進(jìn)行t檢驗(yàn)。AGGF1在宮頸癌組織中的表達(dá)與臨床各病理指標(biāo)的相關(guān)性用χ2檢驗(yàn)，用Kaplanmeier生存曲線和Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型進(jìn)行生存分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1AGGF1在宮頸癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

60例宮頸癌組織中33例AGGF1表達(dá)陽性，占55.0%。對(duì)宮頸癌組織及癌旁組織的免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果進(jìn)行t檢驗(yàn)，分析發(fā)現(xiàn)AGGF1在癌組織中的表達(dá)高于癌旁組織（P=0.035）。見圖1、2。

2.2AGGF1表達(dá)與宮頸癌患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性

AGGF1表達(dá)與腫瘤大小、臨床分期及血清癌抗原125（cancer antigen 125，CA125）相關(guān)。與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)。見表1。

圖1　AGGF1在宮頸組織中表達(dá)的免疫熒光圖（×200）

圖2　AGGF1在正常宮頸組織和宮頸癌組織中的表達(dá)比較

表1　臨床病理參數(shù)與AGGF1表達(dá)的相關(guān)性

圖3　宮頸癌患者術(shù)后生存期與AGGF1表達(dá)的Kaplan-meier曲線

2.3AGGF1表達(dá)與患者預(yù)后的相關(guān)性

Kaplan-meier生存曲線顯示，AGGF1陽性患者術(shù)后生存期比AGGF1陰性者短（P=0.004）（見圖3）。單因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型分析發(fā)現(xiàn)，腫瘤大小、血清CA125、臨床分期和AGGF1表達(dá)為宮頸癌患者預(yù)后相關(guān)因素。應(yīng)用多因素Cox比例風(fēng)險(xiǎn)回歸分析對(duì)臨床病理參數(shù)進(jìn)行校正后，AGGF1表達(dá)可作為宮頸癌患者術(shù)后生存的獨(dú)立預(yù)測指標(biāo)（見表2）。

表2　影響宮頸癌患者生存指標(biāo)的單因素和多因素分析

3　討論

持續(xù)性血管生成是原發(fā)性宮頸癌的主要特征之一，宮頸癌細(xì)胞的生長、侵襲及轉(zhuǎn)移依賴于宮頸癌內(nèi)血管的生成。腫瘤血管生成的主要原因和過程非常復(fù)雜，其中腫瘤細(xì)胞過量表達(dá)血管生成因子并以旁分泌的形勢作用于內(nèi)皮細(xì)胞是一條直接途徑[5]。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，AGGF1）基因被克隆后發(fā)現(xiàn)，VEGF可由腫瘤細(xì)胞表達(dá)和分泌，從而誘發(fā)腫瘤血管生成[6-7]。之后全球掀起腫瘤血管生成因子的研究熱潮。

2004年Tian等發(fā)現(xiàn)AGGF1基因以來，AGGF1在心血管系統(tǒng)的生理功能進(jìn)一步被揭示。Chen等[8]利用模式生物斑馬魚對(duì)AGGF1在血管形成中的功能進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)AGGF1在斑馬魚中可調(diào)控血管的形成和靜脈的分化；Lu等[9]嘗試?yán)肁GGF1基因?qū)π∈蠛笾毖Ｐ瓦M(jìn)行血管生成治療，發(fā)現(xiàn)其能較好地改善缺血部位的血流供應(yīng)；Hu等[10]發(fā)現(xiàn)AGGF1可抑制血管炎癥反應(yīng)，改善血管內(nèi)皮功能；Lei等[11]發(fā)現(xiàn)AGGF1可監(jiān)控斑馬魚血液細(xì)胞形成。本研究表明，AGGF1能夠促進(jìn)血管的生成，并改善局部缺血功能，而這恰好為腫瘤的進(jìn)一步生長、侵襲和轉(zhuǎn)移提供條件，因此筆者可以大膽的猜測AGGF1在促進(jìn)宮頸癌的生長、轉(zhuǎn)移和侵襲的過程中起重要作用。目前，本研究發(fā)現(xiàn)AGGF1在宮頸癌組織的表達(dá)比癌旁組織高，與預(yù)期結(jié)果相符合。與此同時(shí)，本研究還發(fā)現(xiàn)AGGF1表達(dá)高的宮頸癌患者預(yù)后較差。

綜上所述，AGGF1蛋白在宮頸癌組織中表達(dá)比癌旁組織高，并且AGGF1可以作為一個(gè)獨(dú)立指標(biāo)評(píng)估和預(yù)測宮頸癌患者術(shù)后生存期。AGGF1是潛在的抑制宮頸癌血管生成的分子靶點(diǎn)，能夠?yàn)閷m頸癌治療提供新途徑。

參考文獻(xiàn)：

[1] Vici P, Mariani L, Pizzuti L, et al. Emerging biological treatments for uterine cervical carcinoma [J]. J Cancer, 2014, 5(2): 86-97.

[2]應(yīng)倩,夏慶民,鄭榮壽,等.中國2009年宮頸癌發(fā)病與死亡分析[J].中國腫瘤, 2013, 22(8): 612-616.

[3] Tian XL, Kadaba R, You SA, et al. Identification of an angiogenic factor that when mutated causes susceptibility to klippeltrenaunay syndrome[J]. Nature, 2004, 427(6975): 640-645.

[4]伊日貴,徐曉艷,李時(shí)榮.腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制研究進(jìn)展[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志, 2014, 6(10): 937-939.

[5]李玉梅,陳永強(qiáng).缺氧誘導(dǎo)因子-1與腫瘤細(xì)胞凋亡及血管生成關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中華腫瘤防治雜志, 2008, 15(12): 324-329.

[6] Chatterjee SI, Heukamp LC, Siobal M, et al. Tumor VEGF: VEGFR2 autocrine feed-forward loop triggers angiogenesis in lung cancer[J]. J Clin Invest, 2013, 123(4): 1732-1740.

[7] Gaengel K, Betsholtz C. Endocytosis regulates VEGF signalling during angiogenesis[J]. Nat Cell Biol, 2013, 15(3): 233-235.

[8] Chen D, Li L, Tu X, et al. Functional characterization of klippel-trenaunay syndrome gene AGGF1 identifies a novel angiogenic signaling pathway for specification of vein differentiation and angiogenesis during embryogenesis[J]. Hum Mol Genet, 2013, 22(5): 963-976.

[9] Lu QL, Yao YH, Yao YF, et al. Angiogenic factor AGGF1 promotes therapeutic angiogenesis in a mouse limb ischemia model[J]. PLoS One, 2012, 7(10): DOI: 10.1371/journal.pone.0046998.

[10] Hu F, Wu C, Li Y, et al. AGGF1 is a novel anti-inflammatory factor associated with TNF-α-induced endothelial activation[J]. Cellular Signalling, 2013, 25: 1645-1653.

[11] Lei L, Di C, Jia L, et al. Aggf1 acts at the top of the genetic regulatory hierarchy in specification of hemangioblasts in zebrafish[J]. Blood, 2013, 123(4): 501-508.

（童穎丹編輯）

AGGF1 expression in cervical carcinoma and its association with clinicopathological variables

Ze-mei Yang, Shou-guo Huang
(Department of Obstetrics and Gynecology, Haikou Peopleˊs Hospital, Haikou, Hainan 570208, China)

Abstract:Objective To determinethe expression of human angiogenic factor with G patch and FHA domains 1 (AGGF1) in cervical carcinoma, and to investigate its relationship with the prognosis of cervical carcinoma. Methods Immunohistochemistry was performed to detect AGGF1 level in the cervical cancer tissues and pericancerous tissues of 60 cases, and the relationship between the expression of AGGF1 and prognosis of the patients was analyzed. Results The expression of AGGF1 in the cervical carcinoma tissues was significantly higher than that in the pericancerous tissues (P＜0.05). The survival rate of the patients with high AGGF1-expression was significantly lower than that of the patients with low AGGF1-expression (P = 0.004). The Cox model analysis revealed that AGGF1 expression was an independent biomarker for prediction of the survival of cervical carcinoma patients. Conclusions High expression of AGGF1 predicts poor prognosis in cervical carcinoma patients. AGGF1 can be used as an independent factor to predict postoperative survival of patients with cervical cancer.

Keywords:angiogenic factor with G patch and FHA domains 1; IHC; cervical carcinoma; prognosis

收稿日期：2015-05-04

文章編號(hào)：1005-8982（2016）03-0055-04

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.03.011

中圖分類號(hào)：R737.33

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A