流式細胞術在急性白血病微量殘留測定中的應用分析

郭芳 王升 張琰 陳院朝

(河南省安陽地區醫院 血液科 河南 濮陽 455000)

流式細胞術在急性白血病微量殘留測定中的應用分析

郭芳 王升 張琰 陳院朝

(河南省安陽地區醫院 血液科 河南 濮陽 455000)

目的 流分析式細胞術在急性白血病微量殘留(MRD)檢測中的應用價值。方法 選取2012年1月至2014年7月河南省安陽地區醫院收治的86例急性白血病患者，其中急性髓細胞白血病54例、急性淋巴細胞白血病32例，自誘導緩解后每次化療前行骨髓穿刺檢查，標本經流式細胞儀分析，根據初次免疫分型結果行MRD測定，MRD≥0.1%為MRD陽性標準。結果 MRD陽性患者復發率高于MRD陰性者，差異有統計學意義(P<0.05)。自發現急性白血病MRD陽性至疾病復發的時間為1～12個月，多數病例在發現急性白血病MRD陽性4個月左右出現細胞形態學復發。結論 流式細胞術測定MRD能夠預測疾病預后。

急性白血病；微量殘留；流式細胞術

急性白血病是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病，在治療過程中容易復發，復發后無論選擇化療還是骨髓移植的治愈率均明顯下降，因此需要一些檢測手段來預測疾病的預后，指導治療方案的選擇，提高治愈率[1]。白血病微量殘留(minimal residual disease，MRD)檢測是通過各種方法檢測體內剩余白血病細胞數量。目前MRD檢測主要有兩種方法，一種是白血病基因檢測，另一種是流式細胞術檢測。白血病基因檢測是檢測引起白血病的特殊基因從而了解白血病細胞數量多少。目前因已知引起白血病的基因較少，這種檢測手段受到限制。流式細胞術檢測是通過檢測細胞表面分子識別白血病細胞，從而了解體內白血病細胞數量多少的一種方法，這種方法幾乎適合90%以上的白血病患者。本文就流式細胞術在急性白血病MRD檢測中的應用價值進行分析，具體如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月至2014年7月河南省安陽地區醫院收治的86例急性白血病患者(排除失訪者及多次誘導化療不緩解者)，其中急性髓細胞白血病54例，包括FAB分型的M0～M6各型，急性淋巴細胞白血病32例，包括T和B淋巴細胞白血病。患者年齡為3～73歲，中位年齡46歲。所有病例均符合FAB和WHO關于急性白血病的診斷和分類標準。

1.2 檢測方法 所有患者在急性白血病診斷時均已行白血病免疫分型檢查。自誘導緩解治療1個療程開始，每次化療前于髂后上棘行骨髓穿刺，骨髓液經EDTA或肝素抗凝，溶血素溶解紅細胞后在顯微鏡下計數有核細胞數。加入熒光素標記的抗體，充分混勻后室溫避光孵育30 min，洗滌后應用五色流式細胞儀(Beckman公司)行白血病MRD檢測，MRD≥0.1%為陽性，<0.1%為陰性。所有患者均觀察至2016年7月或患者疾病細胞形態學復發(原幼細胞>5%)為止。

1.3 統計學方法 采用SPSS 19.0軟件進行統計學分析及處理，定性資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

誘導緩解治療達到完全緩解后，流式細胞術監測到MRD陽性病例共21例，其中11例白血病復發，復發率為52.38%；MRD陰性病例共59例，其中復發10例，復發率為16.95%。MRD陽性患者復發率高于MRD陰性者，差異有統計學意義(P<0.05)。自發現急性白血病MRD陽性至疾病復發的時間為1～12個月，多數病例在發現急性白血病MRD陽性4個月左右出現細胞形態學復發。

3 討論

在急性白血病的治療過程中迫切需要發現一種或幾種能有效預測白血病轉歸的方法，指導臨床治療方法的選擇。流式細胞術檢測MRD病灶是上世紀90年代前后發展起來的，最初用于體外實驗和動物實驗，實驗目的主要為了解藥物等各種治療方法的效果及疾病本身的性質[1-3]，隨著實驗的成功，逐漸應用于人類，用途也有所改變，開始應用其測量白血病微量殘留病灶。

本文就流式細胞儀在急性白血病MRD檢測中的應用價值進行研究。從研究對象上來說，本研究具有普遍性，主要表現在研究對象年齡分布從3歲至73歲，按照FAB分類有急性髓細胞白血病(M0～M6型)、急性淋巴細胞白血病T細胞系及B細胞系，實驗結論基本適用于各類人群。既往關于流式細胞術測定MRD預測患者疾病轉歸的研究中往往選擇幾個測量點，如白血病完全緩解后、化療第8、15、33天等時間點進行MRD測定[2]。本文是對患者進行全程MRD監測，可以看到，誘導緩解治療達到完全緩解后，無論何時出現MRD陽性，均有可能出現疾病復發，而不僅限于選取的測量點，從研究數據上看，很多病例MRD值逐漸上升，如果能早期發現MRD值陽性，通過改變治療方法可能避免疾病復發，而選點測量法可能漏掉最佳測量點。曾有文獻報道誘導緩解治療1個療程后MRD即轉為陰性的患者預后明顯好于MRD陽性患者[3]。本研究經誘導緩解治療1個療程后，疾病的轉歸與MRD陰性與否無關，分析原因可能因本文病例數偏少所致，也可能誘導緩解治療緩解深度確實與疾病最終轉歸無關，這仍需要進一步研究證實。本研究還觀測到MRD陽性至白血病細胞形態學復發(原幼細胞數大于5%)間隔時間為1～12個月，多數復發在MRD陽性4個月左右，與既往報道的觀測結果[4]基本一致，這個時間差就給一部分患者通過檢測MRD值及時改變治療策略爭取了機會。

雖然流式細胞術在檢測急性白血病微量殘留，判斷疾病預后中有一定作用，但是研究過程中我們也發現一些問題。理論上，流式細胞術檢測MRD精確度可以達到0.01%，但各個實驗室實際精確度卻有所不同[5]，還需要統一的實驗室規范，以利于交流及更好地進行數據分析。經過統計學分析發現，MRD陽性與白血病復發有相關性，理論上能夠預測疾病的轉歸，研究中發現部分患者MRD陽性至觀察終點，疾病仍處于細胞形態學完全緩解中，而另有一少部分患者MRD陰性疾病復發，這就可能出現一部分患者過度治療而另一部分患者因未能及時調整治療方案而影響治療效果。研究表明MRD陽性至疾病復發多數在4～5個月，但間隔時間為1～23個月不等，少數患者即使頻繁監測MRD持續陰性，但仍存在疾病突然復發等一系列問題，這些都需要進一步研究，使流式細胞術測定急性白血病MRD預測疾病轉歸更具有實用性。

[1] 吳韶清,廖燦,謝閨娥,等.多參數流式細胞術在兒童急性B淋巴細胞白血病微量殘留病檢測中的應用[J].實用醫學雜志,2012,28(7):1184-1186.

[2] 陳軍浩.流式細胞術在臨床及科研中的應用[J].臨床檢驗雜志,2012,30(10):861-864.

[3] 王亞哲,劉艷榮,主鴻鵠,等.多參數流式細胞術檢測急性髓系白血病微量殘留病的預后意義[J].中國實驗血液學雜志,2009,17(3):551-556.

[4] 陳樹輝,黎紹仕.流式細胞術在臨床醫學中的應用進展[J].中國實用醫藥,2008,3(24):187-189.

[5] 劉鑫,龐鐵光.流式細胞術在白血病和淋巴瘤診斷中的應用[J].內蒙古民族大學學報(自然科學版),2010,25(3):347-350.

733.71

10.3969/j.issn.1004-437X.2016.12.113

2016-03-26)