正交試驗法優選飛機草地上部分總黃酮提取工藝研究

黃吉生，孫君鑫，郭藝，王勇，楊衛麗

(海南醫學院藥學院，海南 ?？?571199)

正交試驗法優選飛機草地上部分總黃酮提取工藝研究

黃吉生，孫君鑫，郭藝，王勇，楊衛麗

(海南醫學院藥學院，海南 ?？?571199)

目的 優選飛機草地上部分總黃酮的提取工藝。方法以飛機草地上部分總黃酮含量為考察指標，采用正交試驗，以乙醇濃度、提取時間、料液比和提取次數為考察因素，優化飛機草中總黃酮的提取工藝。結果蘆丁對照品的濃度與吸光度在8.8～30.8μg/ml范圍內線性良好(r=1)。提取工藝為70%乙醇溶液提取，料液比1:70，超聲提取2次，每次50 min。結論該提取工藝合理，方法簡便，可為飛機草中總黃酮提取工藝的確定提供實驗依據。

飛機草；總黃酮；提取工藝

飛機草(Chromolaena odorata L.)為菊科澤蘭屬植物，主產華南、西南等地，是我國民間中草藥，性溫，味微酸，具有散瘀消腫，解毒和止血功效，主要用于跌打腫痛、瘡瘍腫毒、皮炎和外傷出血[1]。藥理學研究表明飛機草葉的提取物具有抗糖尿病、抗白內障以及促進傷口愈合的作用[2-3]。黃酮類化合物對多種腫瘤具有預防、治療或化療增敏作用[4-5]；還具有降血糖、降血脂、降壓、鎮痛和抗炎[6]。故本文采用正交試驗法，以總黃酮為考察指標，研究飛機草中總黃酮的提取工藝，為該藥材的開發提供科學依據和參考。

1 材料與儀器

1.1 材料 飛機草地上部分采于海南省?？谑行阌^，經鑒定為菊科澤蘭屬植物飛機草的干燥地上部分；蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707，純度：92.5%)；三氯化鋁、無水乙醇均為分析純。

1.2 儀器 UV-1800PC紫外可見分光光度計(上海鳳凰光學科儀有限公司)；SHB-Ⅲ循環水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公司)；AL104電子天平(梅特勒-托利多(上海)儀器公司)；XS Dualrange分析天平(梅特勒-托利多儀器公司)；SY-180型超聲波清洗器(上海寧商超聲波儀器有限公司)；HC-150TZ型高速多功能粉碎機(永康市綠可食品機械有限公司)； GZX-9240ME型數顯鼓風干燥箱(上海博訊實業有限公司醫療設備廠)。

2 方法與結果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱得蘆丁對照品11.00 mg，置50 ml容量瓶中，70%乙醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，得0.220 mg/ml的對照品溶液。

2.2 標準曲線的制作 精密吸取蘆丁對照品溶液0.0 ml、1.0 ml、1.5 ml、2.0 ml、2.5 ml、3.0 ml、3.5 ml于25 ml容量瓶中，各加入5%AlCl3乙醇溶液1.5 ml，混勻，70%乙醇溶液定容，放置10 min，在波長405 nm處測定吸光度值。以吸光度A為縱坐標，蘆丁濃度C(μg/ml)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y=0.0254X+ 0.0399，R2=1(n=6)，線性范圍為8.8～30.8μg/ml。

2.3 提取方法預實驗 進行正交試驗之前，采用單因素試驗對提取方法、乙醇濃度、超聲提取時間等因素進行了初步考察，見表1、圖1及圖2。由結果可知超聲波提取優于浸提，所以初步確定了超聲波提取為方法，以乙醇濃度(50%、60%、70%)，超聲提取時間(30 min、40 min、50 min)等進行正交試驗。

表1 飛機草中總黃酮提取方法考察

圖1 乙醇濃度的單因素結果

圖2 提取時間的單因素結果

2.4 正交試驗優選 在預實驗基礎上，取飛機草藥材粉末1.0 g，精密稱定，以總黃酮含量為指標，對乙醇濃度、提取時間、料液比和提取次數進行正交試驗，每個因素選擇3個水平，按L934正交設計進行試驗。因素水平見表2，L934正交試驗設計見表3。由表3的極差分析結果可以看出，RA＞RC＞RD＞RB，4個因素對飛機草中總黃酮提取率的影響大小依次為：乙醇濃度(A)＞提取時間(C)＞提取次數(D)＞料液比(B)。四因素中，乙醇濃度的提取作用最為顯著，料液比提取作用較不顯著。在試驗設計范圍內，優化飛機草中總黃酮的最佳條件為A3B3C3D2即乙醇體積分數70%、料液比1:70、提取時間50 min、提取2次。

表2 飛機草中總黃酮提取工藝因素水平表

2.5 結果 為確定該工藝的穩定性與優劣，在上述正交試驗的基礎上，按照飛機草中總黃酮的最佳提取工藝，進行重復驗證實驗。精密稱取適量的飛機草，按正交試驗優化的最佳工藝條件提取，即乙醇體積分數70%、料液比1:70、提取時間50 min、提取2次，測定含量，見表4。由A3B3C3D2工藝條件提取的飛機草總黃酮含量平均為1.13%，高于其他條件提取所得的總黃酮含量，故證明正交試驗優選的A3B3C3D2為最佳提取工藝。

表3 飛機草中總黃酮提取工藝正交表L934試驗安排和結果

表4 驗證實驗結果

3 討論

從直觀分析結果可知，序號7的結果與最佳提取工藝A3B3C3D2所測得的結果相近，如進行工業生產或大規模提取，從節約成本的角度考慮可采用A3B1C3D2的工藝條件組合，即為乙醇濃度70%、料液比1:50、提取時間50 min、提取2次。

隨著科學技術的發展，超聲技術已應用于提取植物中生物堿、黃酮類、多糖類、皂苷類等成分[7]，成為天然產物提取研究的一個常用方法[8]。本試驗首先采用單因素試驗考察了提取方法，結果超聲波提取操作簡便、提取率較高，故選擇超聲波方法進行提取。

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Optimal extraction process of total flavonoids in the aerial parts of Chromolaena odorata L.by orthogonal experiment.

HUANG Ji-sheng,SUN Jun-xin,GUO Yi,WANG Yong,YANG Wei-li.School of Pharmacy,Hainan Medical University,Haikou 571199,Hainan,CHINA

ObjectiveTo optimize the extraction process of total flavonoids in the aerial parts of Chromolaena odorata L..MethodsThe content of total flavonoids was observed to evaluate the extraction technology.Parameters affecting the extraction percentage of total flavonoids were ethanol concentration,the extraction times,the solid-liquid ratio,time of ultrasonic extraction by orthogonal experiment.ResultsThe standard curve was linear in the concentration ranges of 8.8～30.8μg/ml(r=1).The best extraction condition of total flavonoids was extracting 2 times,50 min each time,with 70%ethanol as the solvent and solid to liquid ratio of 1:70.ConclusionIt is proved that the method is reasonable and simple,which can provide a reference for the extraction of Chromolaena odorata L..

Chromolaena odorata L.;Total flavonoids;Extraction process

R93

A

1003—6350（2016）04—0524—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2016.04.003

2015-10-23)

海南省教育廳高等學校科學研究資助項目(編號：Hjkj2013-35)；海南省級大學生創新創業訓練計劃項目(編號：20140105)；海南醫學院藥學院創新實驗計劃項目(編號：hyydc2013007)

楊衛麗。 E-mail:weili-yang@126.com