關于豬源鏈球菌的分離與鑒定思考

許聲豪

（福建省寧德市古田縣鶴塘鎮農業服務中心，福建 古田 352265）

關于豬源鏈球菌的分離與鑒定思考

許聲豪

（福建省寧德市古田縣鶴塘鎮農業服務中心，福建 古田 352265）

豬鏈球菌病指的是有多種致病鏈球菌感染所引起的一種人畜共患病，其主要特征為敗血癥、腦膜炎和關節炎等，是造成養殖戶減產的主要原因之一，若沒有及時控制和治療，還會威脅人的生命安全，給家庭和社會造成難以挽回的損失。當前，受市場因素的影響，當前我國養豬業不斷發展和壯大，豬鏈球菌病的發病率隨之升高。本文從某養豬場內分離到的多豬鏈球菌為研究對象，對其進行了分離和鑒定，系統的分析了豬源鏈球菌的病原學特性，希望能夠為養豬業的穩定發展提供一些參考。

豬源鏈球菌；分離；鑒定；病原學特性

某養豬場飼養的40頭仔豬突發豬鏈球菌病，主要表現為體溫升高、呼吸不暢、食欲不振、嗜睡嚴重等癥狀，部分豬還出現了出血性紅斑、糞便過稀的情況。經解剖檢查可見，患者腹部皮下組織、腹股溝淋巴結、肺部出血明顯[1]，脾胃腫脹、顏色變深，腎臟有少量紅色出血點。為抑制病情進一步發展，該養豬場采用了抗菌藥物和抗生素對患豬進行治療，但收效甚微。本文從病原學入手，對收集到的患豬病樣進行了生態學、培養特性和血清血鑒定等試驗，具體情況如下。

1 材料和方法

1.1 材料

分離和鑒定所用的材料均取自于該豬場病豬，主要有脾胃、淋巴結和皮膚等組織，所選用的工具均購于市場，包括微量生化管、藥敏紙片、鏈球菌乳膠凝集標準診斷試劑盒等，豬鏈球菌2型陽性血清、小白鼠由某農業大學生物部提供。以上材料均符合試驗要求。

1.2 細菌學檢查

取少量樣本，將其分別涂抹于普通瓊脂平板和鮮血瓊脂平板上，放入溫箱內培養1 d，室內溫度維持在36～37 ℃，革蘭氏染色后鏡檢。將鏡檢中發現的革蘭氏陽性成雙或短鏈狀菌落接種到馬丁瓊脂平板和血清瓊脂平板上，繼續培養1 d，溫度36～37 ℃，完成上述步驟后，選取某些較為可疑的菌落進行染色處理，鏡檢觀察，然后接種到THB培養基中，進行增菌培養。THB培養基中應有葡萄糖（0.2%）、犢牛血清（1%）等輔助培養成分[2]，培養溫度37 ℃，培養時間1 d。

1.3 生化和生長試驗

將細菌學檢查中分離出來的純培養菌株取出，接種到血清瓊脂培養基中，培養溫度37 ℃，培養時間1 d，完成該步驟后，觀察培養基中出現溶血現象的菌落，按照步驟，將其中的典型部分分別接種到葡糖糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖等培養基中，進行常規生化試驗和鑒別生化試驗，記錄所得結果。最后，將不同培養基中生長出的菌株分別接種到NaCl、馬尿酸鈉、七葉苷、明膠液化等培養基中，進行生長試驗。

1.4 動物致病性實驗

選取8只體重為20～22 g左右的小白鼠，將THB培養皿培養朱的菌株，注射到4只小白鼠體內，注射劑量為0.2 mL/只，另外4只注射生理鹽水，劑量0.2 mL/只，對比以上8只小白鼠的生存狀況。

1.5 溶血試驗

溶血試驗分為兩種，及平板法和接觸法。平板法指的是將鏈球菌接種在鮮血平板上（5%），培養溫度37 ℃，培養時間1 d，觀察菌落的生長情況，若其周圍有明顯的溶血環，則判斷為陽性。接觸法指的是將菌株接種在THB培養皿中，培養溫度37 ℃，培養時間1 d，然后取50 μ L菌液，滴注在頂板上，將其與血紅細胞混合，觀察1 h后得出鑒定結果。

1.6 藥敏試驗

采用紙片擴散法，將選定的鏈球菌接種在THB培養基中，培養24 h后，將生理鹽水稀釋，放入振蕩器中震蕩，得出渾濁液，在無菌操作中，使用習慣吸取0.2 mL放于血清瓊脂平板上，注意涂抹均勻，加蓋靜置5 min后將藥敏試紙貼在平板上，輕輕按壓，使其貼附在培養基表面。每個平板均貼5張藥敏試紙，試紙與試紙之間的距離應在2 cm左右。完成以上操作后，將培養基放入溫箱，培養20～24 h，觀察實驗結果。若抑菌圈直徑達到了15 mm或以上，則判斷為高度敏感，若抑菌圈直徑在10～15 mm之間，則判斷為中度敏感，若未超過10 mm，則判斷為耐藥[3]。

2 結果與分析

2.1 細菌學檢查結果

細菌學檢查結果顯示，菌落中有大量的革蘭氏陽性、短鏈狀、散在的球菌。分離結果顯示，菌落在鮮血瓊脂培養基上生長情況良好，大部分菌落呈圓形，表面光滑，邊緣整齊，顏色為灰色或者灰白色，并帶有一些小的菌落有明顯的β型溶血。普通瓊脂培養基上菌落生長狀況一般。

2.2 生化和生長試驗結果

分離菌株受溫度影響較大，36～37 ℃時生長良好，10 ℃或40 ℃時生長不良或者不能生長。分離菌株能夠發酵葡糖糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖，NaCL、馬尿酸鈉、七葉苷、明膠液化的生化結果均為陰性。

2.3 動物致病試驗結果

接種病料的4四只白鼠均在20 h內死亡，剖檢發現，白鼠的肝脾、腎臟組織明顯變大，膀胱充盈，胸腔積液，心臟出血。對白鼠胸腔積液進行革蘭氏染色鏡檢后發現，有很多單個或承兌的短鏈革蘭氏陽性球菌。其余4只小白鼠存活情況良好，未出現不良反應，此結果表明，分離菌株有較強的致病性。

2.4 溶血試驗結果

兩種方法檢測結果均顯示為β型溶血。

2.5 藥敏試驗結果

分離菌株對頭孢噻呋、頭孢他啶、阿莫西林、氧氟沙星高敏，對阿米卡星、氯霉素、環丙沙星中敏，對青霉素、恩諾沙星、卡那霉素、紅霉素、慶大霉素、強力霉素、新霉素抗藥。

3 結論

根據以上檢驗結果，若出現豬鏈球菌病史，應先進行藥敏試驗，避免濫用抗生素，根據實際情況選擇適當的給藥途徑，保證連續用藥。同時，做好綜合性的防護措施，搞好衛生，定期消毒，加強管理，定期免疫接種，提高豬的抗病能力。

[1]江甜，胡智斌，谷長勤，等.7型豬鏈球菌的分離鑒定及特性[J].中國獸醫學報，2011，31（10）.

[2]趙海忠，王生奎，張以芳.豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗[J].湖北畜牧獸醫，2008，（5）：1453–1457.

[3]李肖梁，馬有智，方維煥，等.豬源鏈球菌的分離與鑒定[J].黑龍江畜牧獸醫，2003，（10）：8-9.

（編輯：張淑鳳）

S852.61

B

1006-799X(2016)18-0105-01

許聲豪（1960-），男，福建古田人，獸醫師，主要從事獸醫工作。