中藥顯微鑒別的實習帶教探討

廖 嫻，黃月純

（廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州 510405）

中藥顯微鑒別的實習帶教探討

廖 嫻，黃月純

（廣州中醫藥大學第一附屬醫院，廣東 廣州 510405）

中藥；顯微鑒別；實習帶教

中藥學或藥學專業學生在實習之前，經過幾年緊張的基礎理論、實驗教學的學習后進入醫院、藥廠等單位實習，通過實習既可將課堂上所學的理論、技能應用于實踐，又可鞏固所學的基礎知識，培養學生的操作技能，為畢業后獨立工作打下堅實的基礎。我院是一所綜合性的教學醫院，藥劑科在每年的實習生帶教工作中都肩負著重要任務，藥檢室是藥劑科的實習班組之一，對于畢業實習生，在藥檢室安排的實習時間大多為1～2周，時間較短，但涉及的專業知識面較廣[1]。近年來國家有關部門對醫院制劑的質量控制要求不斷提高，要求制劑用的中藥飲片必須檢驗合格，《中國藥典》收載的中藥飲片大多有顯微鑒別項目，藥監部門對醫院制劑質量標準也有了更明確的要求，制劑成品中有關顯微鑒別的項目也越來越多。因此，操作簡便、經濟實用的中藥顯微鑒定項目亦成了醫院制劑藥檢室的重要工作之一。本文根據學生的實習時間及以往帶教中遇到的問題，對顯微鑒別實習帶教模式進行探討。

1 崗前加強制度和安全教育

組織學生學習醫院和藥檢室相關的規章制度及實習期間的紀律要求。由于藥檢工作每天都涉及多種試劑、儀器的使用，顯微鑒別涉及一些易燃易爆的溶劑，如酒精燈的使用。因此要求實習學生必須有很好的安全意識，帶教教師必須給學生講解實驗室的一般安全知識及一般事故的處理方法，確保自身安全和實驗室的安全[2]。

2 顯微鑒別技術的介紹

顯微鑒別是利用顯微鏡對藥材或飲片的切片、粉末、解離組織或表面制片及含飲片粉末的制劑中飲片的組織、細胞或內含物等進行鑒別的一種方法。該方法使用的儀器、試劑較少，操作簡便、易行，判斷準確，在實驗室中應用較為廣泛。另外，在新版《中國藥典》中應用顯微鑒別方法的中藥材和中成藥也特別多。

根據對近年來中藥或藥學專業實習生的了解，他們大多數只是曾經在實驗室進行中藥材的顯微簡單操作，手工描繪顯微圖譜，較少涉及中藥復方制劑的顯微鑒別項目，亦缺乏采用專用攝像系統的顯微鑒別規范化操作。因此，在實驗前就顯微鑒別操作技術方面的一些共性問題對學生進行介紹非常有必要。

3 顯微鑒別實驗操作技術的掌握

3.1 試液的合理使用

要做好顯微檢定，制作良好的切片是關鍵，而各種試液的合理使用顯得尤為重要。為了能夠清楚地觀察藥材組織構造的細胞及其內含物的形狀，必須把切片或粉末標準片用適當的試液進行處理和封藏，試液的選擇必須具有合理性[3]。學生開始操作時，對觀察不同組織、細胞等所使用的試液比較模糊，所選擇的試液有時也不合適，在一定程度上影響了制片的效果。

制片常用的試液主要有：（1）水合氯醛，此液為常用封藏液，也是透化劑，可使干縮的細胞膨脹而透明，并能溶解淀粉粒、樹脂、蛋白質、葉綠素及揮發油等。此法加入試液后需適當加熱，使切片清凈、透明，適用于觀察組織構造和細胞形狀及葉片、花和花粉粒，尤其適于觀察草酸鈣結晶。（2）水或稀甘油，切片直接加水或稀甘油封藏，適用于觀察細胞壁顏色及淀粉粒、油滴、樹脂等。（3）甘油醋酸試液（斯氏液），此液為常用封藏液，專用于觀察淀粉粒形態，可使淀粉粒保持原形，便于測量其大小。（4）甘油乙醇試液，此液為封藏液，也是軟化劑，常用于保存植物性材料及臨時切片，有軟化組織的作用。中藥的顯微鑒定中除應用以上幾種透化試劑外，還有以下幾種常用的顯色試劑：間苯三酚試液與鹽酸合用可使木化細胞壁染成紅色或紫紅色；蘇丹Ⅲ試液可使木栓化、角質化細胞壁及脂肪油、揮發油、樹脂等染成棕色或黃棕色；碘試液使淀粉粒染成藍色或紫色。

3.2 藥材和飲片顯微制片

選好了所需要的試液后，就要將樣品制成適于鏡檢的標本，這個步驟是顯微鑒別的關鍵，學生只有掌握好制片的方法，才能更好地觀察到所需要的目標物。對于完整的藥材或飲片可制成各種切面的切片；對于粉末藥材或飲片（包括丸、散等成方制劑）可直接裝片或適當處理后制片。藥材或飲片切片標本的制作方法較多，在日常的檢驗中，經常用到的就是徒手切片或滑走切片法、表面制片、花粉粒與孢子制片、磨片法制片、粉末制片等，其中最常用到且制片較簡單的就是粉末制片。粉末制片主要用于粉末狀的藥材和飲片的觀察。學生在實習期間顯微鑒別主要用到的也是粉末制片。

在藥材或飲片粉末制備時，首先是取干燥藥材或飲片，用打粉機粉碎，粉末過四號或五號篩，裝瓶，貼上標簽。學生在制備粉末時，要注意取樣的代表性，因為取樣的代表性直接影響到結果的準確性。例如根類藥材要切取根頭、根中段及根尾等部位，要全部磨粉，不得丟棄渣子，過篩，混合均勻。如果藥材要干燥，一般溫度不能超過60℃，以免淀粉粒糊化。

制片時，先用解剖針挑取樣品粉末少許，置載玻片的中央，加適宜的試液1～2滴，用針攪勻（如為酸或堿時應用細玻棒代替針），待液體滲入粉末后，用左手食指與拇指夾持蓋玻片的邊緣，使其左側與藥液層左側接觸，再用右手持小鑷子或解剖針托住蓋玻片的右側，緩緩放下，使液體逐漸充滿蓋玻片下方。如果液體未充滿蓋玻片，應該從邊緣滴加液體，以防產生氣泡；若液體過多，用濾紙片吸去溢出的液體。學生在開始制片時，往往加入的粉末太多，如取量多，顯微特征重疊輪廓不清，反而費時，不易找到所需要的目標物。

為了便于觀察某些組織等，經常需要透化。如需透化，可在載玻片上放有粉末處滴加水合氯醛試液1～2滴，將載玻片于酒精燈火焰上方約1～2 cm處往返擺動加熱，至邊緣起小泡即停止加熱，補充試液后再加熱，直至切片透化完全為止。加熱溫度不宜過高，以防水合氯醛試液沸騰，使組織內帶入氣泡。加熱時應將載玻片不斷移動，以免受熱不均而炸裂。透化后放冷，加甘油乙醇溶液1～2滴，蓋上蓋玻片。

3.3 顯微鏡的使用

學生在中學的時候就已經開始接觸顯微鏡，對顯微鏡的操作比較熟悉，但是在操作過程中還是有幾點需要注意。（1）下降鏡筒時，一定要用雙眼從側邊注視目鏡，使之接近裝片，但又要防止鏡頭觸及裝片，否則會壓碎裝片和損壞物鏡。（2）有必要使用高倍物鏡時，必須先在低倍物鏡下將目標移到視野的中心，然后換用高倍物鏡。因為在低倍物鏡下看到的物像放大倍數小，但看到的標本實際面積大，容易找到目標，而與低倍物鏡相比，高倍物鏡下看到的物像大，同樣的視野面積看到的標本的實際面積小，在裝片不動的情況下，高倍物鏡看到的只是低倍物鏡視野的中心部分。（3）換高倍物鏡時，千萬不可將鏡筒升高，正確的做法是直接轉動轉換器，換上高倍物鏡即可。（4）使用高倍物鏡之后，透鏡與裝片之間的距離很近，使用粗準焦螺旋容易壓碎玻片和損壞透鏡，或者由于物像一閃而過，找不到要觀察的目標，因此，必須用細準焦螺旋調焦，細準焦螺旋只在調節圖像清晰度時使用。

3.4 圖像處理

顯微鏡的放大倍數是物鏡的放大倍數與目鏡的放大倍數的乘積，如物鏡為10×，目鏡為10×，其放大倍數就為10×10= 100。放大的是物體的直線長度和寬度而不是面積。現在的顯微鏡大部分都安裝了拍照軟件，便于圖片的真實保存。本藥檢室所應用的是明美圖像軟件，首先應先把玻片移至空白處，做白平衡。采集圖像時，首先將圖像調節清晰，然后可以點擊更多參數進一步調節圖像，如亮度、對比度、色調、飽和度、銳度和曝光度等。保存好的圖片可以通過靜態測量軟件標記所需要的長度、面積等參數，但學生在使用靜態測量軟件的過程中，有時會忘記在對話框中選擇所拍攝圖像物鏡的倍數。

4 選擇有代表性的中藥讓學生參與檢驗全過程

大黃是常用中藥，《中國藥典》大黃的顯微鑒別方法[4]涉及顯微鑒別的多個方面，可作為學生帶教的典型實例。大黃草酸鈣簇晶直徑大小范圍為20～160 μm，部分較大，直徑能達190 μm，是大黃的主要顯微特點。而中藥復方制劑特別是散劑、膏劑，由多味中藥組成，如本院制劑中的療筋膏含有大黃、赤芍等兩味中藥，且兩味中藥均具有草酸鈣簇晶，在擬訂標準時，只有直徑能達50 μm，才是大黃的顯微特征。因此，在帶教過程中要讓學生了解制劑顯微標準制訂的依據以及與中藥（飲片）的區別。

在粉末制片中，取大黃粉末分別制透化片和水裝片。透化片的制作方法：取大黃粉末少許放于載玻片上，滴加1～2滴水合氯醛，攪勻，在酒精燈上加熱透化，避免蒸干，反復透化2～3次，稍冷卻后滴加1滴稀甘油，蓋上蓋玻片，鏡檢，觀察草酸鈣簇晶。水裝片的制作方法：取大黃粉末滴加純化水1～2滴攪拌均勻，蓋上蓋玻片，鏡檢淀粉粒。另取療筋膏透化片，觀察草酸鈣簇晶。按照顯微鏡的操作規程使用顯微鏡，雙擊打開明美圖像軟件采集圖像，保存好的圖片再利用靜態測量軟件標記即完成。

[1]黃月純.中藥薄層色譜鑒別的實習帶教探討[J].中國中醫藥現代遠程教育，2012，10（18）：65-66.

[2]許銳鑫.淺談化學實驗的安全教學[J].衛生職業教育，2003，21（9）：129.

[3]袁汀.在中藥檢驗中應用顯微鑒定的幾點體會[J].實用藥物與臨床，2002（S1）：87.

[4]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫藥科技出版社，2015．

G424.4

B

1671-1246（2016）24-0069-02