EGFR siRNA通過阻礙STAT3磷酸化抑制大鼠星形膠質細胞活化

錢　紅, 劉理靜, 李艷春，謝　明，武　衡，劉雙喜，武　斌

(1. 湖南醫藥學院臨床醫學院，湖南 懷化　418000；2. 湖南醫藥學院附屬第一醫院神經內科，湖南 懷化　418000；3. 南華大學附屬第一醫院神經內科，湖南 衡陽　421001；4. 懷化市第一人民醫院神經內科，湖南 懷化　418000)

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EGFR siRNA通過阻礙STAT3磷酸化抑制大鼠星形膠質細胞活化

錢紅1,2, 劉理靜1, 李艷春2，謝明3，武衡3，劉雙喜4，武斌4

(1. 湖南醫藥學院臨床醫學院，湖南 懷化418000；2. 湖南醫藥學院附屬第一醫院神經內科，湖南 懷化418000；3. 南華大學附屬第一醫院神經內科，湖南 衡陽421001；4. 懷化市第一人民醫院神經內科，湖南 懷化418000)

中國圖書分類號：R-332；R329.24；R392.11；R743.340.22；R977.6

摘要:目的探討表皮生長因子受體(EGFR)在腦出血后血腫周圍腦組織中的表達，及其對大鼠星形膠質細胞活化的影響與分子機制。方法收集臨床腦出血后實施血腫清除術的血腫周圍腦組織標本，根據腦出血距離標本取出時間，分為<1 d組、1~5 d組、6~10 d組及>10 d組，每組20例，同時取20例手術過程中血腫遠隔部位掉落的組織塊作為對照組，通過免疫組織化學染色及Western blot測定EGFR表達。分離培養大鼠皮層星形膠質細胞，分別給予培養液(對照組)、睫狀神經營養因子(CNTF，用于活化星形膠質細胞)、Scramble siRNA+CNTF、EGFR siRNA+CNTF處理24 h，熒光實時定量PCR檢測神經膠質原纖維酸性蛋白(GFAP)mRNA表達，并采用Western blot分析GFAP、信號傳導蛋白和轉錄激活物3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表達。結果隨著腦出血時間的延長，EGFR陽性信號指數及蛋白表達水平逐漸升高，6~10 d達到高峰，10 d后仍處于較高水平，兩兩比較差異均有顯著性(P<0.01)。CNTF單獨處理明顯增加GFAP mRNA與蛋白、p-STAT3表達水平，與對照組相比，差異有顯著性(P<0.01)，EGFR siRNA轉染幾乎完全逆轉CNTF誘導的上述變化(P<0.01)，但各組STAT3蛋白表達水平無區別(P>0.05)。結論 EGFR在腦出血后血腫周圍腦組織中表達升高，EGFR基因沉默有助于抑制大鼠星形膠質細胞活化，其機制可能與阻礙STAT3磷酸化有關。

關鍵詞:星形膠質細胞；腦出血；表皮生長因子受體；小干擾RNA；神經膠質原纖維酸性蛋白；信號傳導蛋白和轉錄激活物3

星形膠質細胞活化是中樞神經系統損傷后最重要的表型之一，這些活化的細胞雖然能通過釋放神經營養因子，有利于神經損傷的修復，但同時促進膠質瘢痕的形成。膠質瘢痕是軸突再生的主要物理屏障，并分泌大量細胞毒因子、炎癥因子、補體蛋白而損害神經元[1]。因此，采取有效的方式抑制腦損傷后星形膠質細胞過度活化，對于促進腦損傷后恢復有重要意義。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)是一種跨膜蛋白，在中樞神經系統損傷(外傷、中風、腫瘤)或神經系統變性(阿爾茨海默病、帕金森病)等情況下，EGFR表達迅速上調，經免疫組織化學染色分析，EGFR陽性細胞大多是反應性星形膠質細胞，并長時間持續存在[2]。此外，我們的前期研究表明， EGFR抑制劑染料木黃酮可阻滯大鼠星形膠質細胞活化[3]。這些研究提示，EGFR可能在觸發星形膠質細胞由靜息狀態轉變為活化狀態中起關鍵作用。然而，EGFR調控星形膠質細胞活化的分子機制仍不清楚。為此，本研究首先分析EGFR在腦出血后不同時期血腫周圍腦組織中的表達特征，然后以EGFR siRNA轉染大鼠星形膠質細胞，探討EGFR基因沉默對細胞神經膠質原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)、信號傳導蛋白和轉錄激活物3(signal transducers and activators of transcription 3, STAT3)、磷酸化STAT3(phosphorylated STAT3, p-STAT3)表達的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物與試劑出生后24 h以內的新生Wistar大鼠[SPF級，合格證號：SYKK(湘)2010-0006]購于南華大學實驗動物學部。免疫組化SABC試劑盒(批號：SA1020)系武漢博士德公司產品。新生胎牛血清和DMEM培養基(批號：8114057)購于Gibco公司。睫狀神經營養因子(ciliary neurotrophic factor, CNTF)購于北京盛科博源生物公司(批號：22582)。TRIzol試劑(批號：10606ES60)、PVDF膜(批號：21457)由美國Invitrogen公司提供。逆轉錄試劑盒(批號：TB099)、PCR擴增試劑盒(批號：SK2491-50)分別購于美國Promega公司、上海生工生物工程公司。兔抗人EGFR(批號：sc-3784)、β-actin(批號：sc-1618)單克隆抗體以及兔抗大鼠GFAP(批號：sc-21364)、STAT3(批號：sc-9132)、p-STAT3(批號：sc-8059)、EGFR(批號：sc-3782)、β-actin(批號：sc-1616)單克隆抗體和山羊抗兔 IgG(批號：sc-33106)購自美國Santa Cruz 公司。

1.2臨床標本收集選擇南華大學附屬第一醫院神經外科2011年1月至2014年12月行開顱經顳葉入路血腫清除手術治療的80例基底節腦出血患者為研究對象，均經CT或者MRI確診，根據標本取出距離腦出血時間分為4組：<1 d組、1~5 d組、6~10 d組及>10 d組，每組20例。在<1 d組中，男12例，女8例，年齡49~72歲，平均(62.17±10.65)歲，出血量40~81 mL，平均(59.37±11.85) mL；1~5 d組中，男11例，女9例，年齡53~76歲，平均(64.55±11.38)歲，出血量45~80 mL，平均(61.49±12.36) mL；6~10 d組中，男9例，女11例，年齡52~75歲，平均(63.18±12.54)歲，出血量42~83 mL，平均(60.59±10.33) mL；>10 d組，男13例，女7例，年齡54~78歲，平均(64.26±13.88)歲，出血量44~79 mL，平均(62.11±11.54) mL。每個病例于手術過程中取少量距血腫包膜1cm左右腦組織作為實驗標本。同時，手術中將部分患者皮層“造瘺”起始處(血腫遠隔部位)掉落的組織塊作為對照組標本，共20例，其中男12例，女性8例，年齡52~78歲，平均(63.75±13.04)歲，出血量43~80 mL，平均(61.75±11.87) mL。各組性別、年齡及出血量等方面比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。本實驗經南華大學附屬第一醫院倫理委員會批準，而且家屬均簽署知情同意書。

1.3免疫組織化學染色取腦組織標本，10%中性甲醛固定后，石蠟包理，5 μm連續切片，采用免疫組化SABC法檢測各組腦組織中EGFR表達，嚴格按照試劑盒說明書由專人進行統一操作，用PBS代替一抗作為空白對照。在PIPS-2020圖像分析儀(重慶天海公司)上，每個切片隨機取5個高倍視野, 測定一定面積內陽性信號面積和陽性信號平均灰度值，計算陽性信號指數，作為EGFR表達水平。陽性信號指數/%=陽性信號面積×陽性信號平均灰度值/測定面積×100%。

1.4大鼠皮層星形膠質細胞的體外培養取出生后24 h以內的新生Wistar大鼠10只，消毒固定，用斷頭法取其頭部，取出大腦，剝去軟腦膜后，分離出大腦皮層組織。將大腦皮層剪碎，用 0.125%的胰酶消化30 min，加入新生胎牛血清終止消化，1 000 r·min-1離心5 min，將上層含酶液小心吸出，加入DMEM培養液，100目不銹鋼篩網過濾，再加入適量新生胎牛血清，調整細胞懸液的密度至(3~5)×108·L-1，種植于培養瓶內，在37℃、5% CO2條件下培養，每隔3~4 d換培養液1次，當細胞生長成致密單層后，進行傳代培養，即得到純化的星形膠質細胞。

1.5EGFR基因沉默取處于對數生長期的星形膠質細胞，接種于涂有多聚賴氨酸蓋玻片的24孔板，加入DMEM培養液后，進行EGFR siRNA轉染實驗。將4 μL的LipofectamineTMRNAiMAX 與5 μL 20 μmol·L-1siRNA分別加入100 μL Opti-MEM中，靜置5 min后，將上述兩種溶液混合，再靜置20 min，隨后把混合液加入培養的星形膠質細胞中，混勻，孵育48 h，采用Western blot檢測EGFR siRNA的干擾效率。EGFR siRNA及Scramble siRNA核苷酸序列均由上海吉瑪公司合成，其中EGFR siRNA正義鏈為：5′-CCUUAGCAGUCUUAUCUAATDT-3′，反義鏈為：5′-dTdTGGAAUCGUCAGAAUAGAUU-3′；Scramble siRNA正義鏈為：5′-UUCUCCGAACGUGUC ACGU-3′，反義鏈為：5′-ACGUGACACGUUCGGAG AA-3′。

1.6實驗分組與處理將處于對數生長期的星形膠質細胞隨機分為4組：對照組、CNTF組、 Scramble siRNA+CNTF組及EGFR siRNA+CNTF組，對照組僅給予DMEM培養液處理24 h，CNTF組用加入20 μg·L-1CNTF的DMEM培養液培育24 h，后2組分別給予Scramble siRNA、EGFR siRNA轉染細胞后，用含20 μg·L-1CNTF的DMEM培養液處理24 h。每組實驗重復5次，結果取平均值。

1.7熒光實時定量PCR細胞處理完成后，收集足夠的細胞，利用TRIzol試劑提取各組細胞總RNA，并溶解于無RNase的水中，通過紫外分光光度計測定每個樣本總RNA 的OD260/OD280，其比值均在1.8~2.0之間，符合實驗要求。取2 μg總RNA，依據逆轉錄試劑盒提供的方法合成cDNA。參照文獻[3]由上海生工生物工程公司合成GFAP與磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde phosphate dehydrogenase, GAPDH)引物。GFAP引物序列：5′-TAATGACTATCGCCGCCAACTG-3′，5′-TTCGCCCTCCGCAATTT C-3′，擴增產物長度274 bp；GAPDH引物序列：5′-GGAGCCAAACGGGTCATCATCTC-3′，5′-ATGCCTGC TTCACCACCACCTTG -3′，擴增產物長度454 bp。然后取10 μL逆轉錄產物，在Roach480實時定量PCR儀上進行PCR反應，反應條件：94℃預變性3 min，94℃變性1 min，61℃復性30 s，72℃延伸30 s，總共35個循環，最后72℃延伸7 min。用ΔΔCt值法，以GAPDH表達水平作為內參照定量GFAP mRNA表達。

1.8Western blot常規制備SDS-PAGE膠，采用三去污裂解液將腦組織及處理后的細胞(細胞數量充足)勻漿，吸出上清液，將20 μg蛋白質樣品上樣，在70 V電壓下電泳1.5 h，轉移至PVDF膜，以50 g·L-1脫脂牛奶室溫封閉后，分別加入1 ∶500稀釋的兔抗人EGFR、β-actin或兔抗大鼠EGFR、GFAP、STAT3、p-STAT3、β-actin一抗，在低溫條件下(4℃)孵育過夜，添加1 ∶2 500稀釋的辣根過氧化物酶標記的山羊抗兔IgG(二抗)室溫孵育，ECL顯色，暗室曝光。利用Labwork凝膠圖像分析系統對膠片掃描，分析各產物積分光密度值，計算EGFR、GFAP、STAT3、p-STAT3相對量。目標蛋白表達水平=目標蛋白積分光密度值/β-actin積分光密度值.

2結果

2.1EGFR在腦出血后血腫周圍腦組織中的表達免疫組織化學染色顯示(Fig1)，EGFR陽性顆粒呈棕黃色，以胞質多見，大量分布于腦出血后血腫周圍腦組織中，主要位于膠質細胞，少數為神經細胞。灰度掃描與半定量分析結果表明(Fig2)，5組腦組織EGFR陽性信號指數比較，差異有顯著性(F=20.15,P<0.01)，其中腦出血后不同時期血腫周圍腦組織EGFR陽性信號指數均高于對照組(P<0.01)；與<1d組比較，1~5d組、6~10d組及>10 d組EGFR陽性信號指數明顯升高(P<0.01)；與1~5 d 組比較，6~10 d組、>10 d組EGFR陽性信號指數增加(P<0.01)；6~10 d組EGFR陽性信號指數亦高于>10 d組(P<0.01)。此外，Western blot檢測發現，5組腦組織EGFR蛋白表達水平的差異有顯著性(F=23.68,P<0.01)，其變化趨勢與陽性信號指數相似，見Fig 3。

Fig 1　EGFR immunohistostaining of cerebral tissues around

A: Control group; B:<1 d group; C: 1~5 d group; D: 6~10 d group; E: >10 d group

Fig 2　Comparison of EGFR positive signal index in cerebral

***P<0.01vscontrol;##P<0.01vs<1 d;△△P<0.01vs1~5 d;▲▲P<0.01vs>10 d

Fig 3　Expression of EGFR protein in cerebral tissues

A: Control group; B: <1 d group; C: 1~5 d group; D: 6~10 d group; E: >10 d group.**P<0.01vscontrol;##P<0.01vs<1 d;△△P<0.01vs1~5 d;▲▲P<0.01vs>10 d

2.2RNA干擾沉默EGFR基因后其蛋白的表達將處于對數生長期的星形膠質細胞接種于涂有多聚賴氨酸蓋玻片的24孔板，并加入 DMEM 培養液進行siRNA轉染實驗。Western blot檢測顯示，EGFR siRNA抑制星形膠質細胞EGFR蛋白表達水平達80%(Fig 4)，表明EGFR siRNA對EGFR基因的沉默效果較好，符合本實驗要求。

Fig 4　Expression of EGFR protein in astrocytes among groups

A: Control group; B: Scramble siRNA group; C: EGFR siRNA group

2.3EGFR siRNA對星形膠質細胞GFAP表達的影響GFAP是星形膠質細胞活化的標記物，為了探討EGFR對星形膠質細胞活化的影響，給予CNTF和(或)siRNA處理細胞后，通過熒光實時定量PCR、Western blot分別檢測各組細胞GFAP mRNA、蛋白表達，結果顯示(Fig 5、6)，4組GFAP mRNA與蛋白表達水平比較，差異有顯著性(F=24.37、28.69，P<0.01)，其中對照組GFAP mRNA與蛋白呈低水平表達，CNTF組、Scramble siRNA+CNTF組GFAP mRNA與蛋白表達水平較對照組明顯增加(P<0.01)；與CNTF組、Scramble siRNA+CNTF組比較，EGFR siRNA轉染細胞后，GFAP mRNA與蛋白表達水平下調(P<0.01)，但EGFR siRNA+CNTF組GFAP mRNA與蛋白表達水平與對照組相比，無明顯改變(P>0.05)。此外，Scramble siRNA+CNTF組上述指標與CNTF組無區別(P>0.05)，這些結果表明EGFR基因沉默可抑制星形膠質細胞活化。

Fig 5　Expression of GFAP mRNA in astrocytes

A: Control group; B: CNTF group; C: Scramble siRNA+CNTF group; D: EGFR siRNA+CNTF group.**P<0.01vscontrol group；##P<0.01vsCNTF group and scramble siRNA+CNTF group

Fig 6　Expression of GFAP protein in astrocytes

A: Control group; B: CNTF group; C: Scramble siRNA+CNTF group; D: EGFR siRNA+CNTF group.**P<0.01vscontrol group；##P<0.01vsCNTF group and scramble siRNA+CNTF group

2.4EGFR siRNA對星形膠質細胞STAT3磷酸化的影響STAT3磷酸化(即活化形式)可以誘導GFAP基因轉錄，為了初步明確EGFR siRNA抑制星形膠質細胞活化的機制，利用Western blot檢測各組細胞p-STAT3、STAT3蛋白表達(Fig 7)，發現各組細胞p-STAT3表達水平的差異有顯著性(F=25.39,P<0.01)，其中CNTF組、Scramble siRNA+CNTF組p-STAT3表達水平較對照組升高(P<0.01)，給予EGFR siRNA轉染細胞后，p-STAT3表達水平明顯降低，與CNTF組、Scramble siRNA+CNTF組比較，差異有顯著性(P<0.01)，但與對照組相比，變化不明顯(P>0.05)；Scramble siRNA+CNTF組p-STAT3表達水平與CNTF組比較，差異無顯著性(P>0.05)；此外，各組STAT3蛋白表達水平無區別(F=3.24,P>0.05)，提示EGFR基因沉默對星形膠質細胞活化的抑制作用可能與其阻滯STAT3磷酸化有關。

3討論

腦出血具有高發病率、致死率、致殘率，目前已成為威脅人類健康與生活質量的重大疾病之一。星形膠質細胞是中樞神經系統中數量最多的細胞，當中樞神經系統發生損傷時，星形膠質細胞活化，活化的星形膠質細胞具有雙重作用。在損傷早期，星形膠質細胞通過分泌多種細胞因子，增強神經元對缺血、缺氧的耐受性，對神經元產生保護作用，促進其存活；但另一方面，星形膠質細胞可釋放多種損傷因子，對神經元產生毒性作用，并且過度增生的星形膠質細胞是膠質瘢痕中的主要成分，可阻礙神經再生及軸突的形成[4]。大量研究已經發現，星形膠質細胞活化的毒性作用超過其對神經元的保護作用，被認為是導致腦出血后繼發性損傷的重要原因[5-6]。然而，通過白藜蘆醇、孕酮抑制星形膠質細胞的異常活化，可明顯減少神經元損傷[7-8]。腦損傷后，星形膠質細胞活化呈現出動態變化的規律，與神經元的受損程度基本同步，一般在腦損傷后數h~1d即可在損傷周圍出現胞體肥大、突起增粗的活化星形膠質細胞，隨著時間延長，死亡神經元數目增多，活化的星形膠質細胞數目也逐漸增多，在7~15 d達到高峰[9]。EGFR廣泛表達于上皮、間質及神經組織，在調控細胞增殖和分化中起重要作用。本研究結果表明，隨著腦出血時間的延長，EGFR陽性信號指數及蛋白表達水平逐漸升高，6~10 d處于最高值，與星形膠質細胞活化過程基本同步。另有研究表明，腦卒中后，EGFR陽性細胞主要為反應性的星形膠質細胞[10]。這些結果提示，EGFR在腦出血后血腫周圍腦組織中表達持續升高，可能與星形膠質細胞活化密切相關。

Fig 7　Expression of STAT3 and p-STAT3 in

A:Control group; B: CNTF group; C: Scramble siRNA+CNTF group; D: EGFR siRNA+CNTF group.**P<0.01vscontrol group；##P<0.01vsCNTF group and scramble siRNA+CNTF group

GFAP 系星形膠質細胞的中間絲細胞骨架蛋白，為星形膠質細胞的特異性標記物。眾多研究顯示，腦出血后 GFAP 表達明顯上調，星形膠質細胞呈活化狀態[11-12]。CNTF是目前公認的星形膠質細胞的活化劑，當與其受體結合后導致STAT3磷酸化，磷酸化的STAT3隨后與 GFAP 基因的啟動子結合，GFAP 基因大量轉錄，刺激星形膠質細胞進入細胞周期增殖，胞體變大，突起增多、變長，細胞活化[13-14]。EGFR屬于受體型酪氨酸蛋白激酶，由細胞外結構域、跨膜結構域和細胞內結構域3部分組成，EGFR細胞外結構域與配體表皮生長因子或轉化生長因子α結合后，經跨膜結構域激活胞內結構域的酪氨酸激酶，形成磷酸化EGFR，從而激活下游多條信號轉導通路，包括STAT3通路[15-16]。于曉棠等[17]報道，EGFR通過STAT3磷酸化，促進大鼠肝癌的發生發展。siRNA是一類包含21~25個核苷酸的小RNA片段，與細胞內同源性靶基因的mRNA特異性結合，使mRNA發生降解而導致基因沉默。因siRNA具有穩定性好、特異性強、細胞毒性低以及作用持久、強大等優點，目前已成為基因功能研究的強大工具[18]。本研究將EGFR siRNA轉染星形膠質細胞后，發現其可抑制80%的EGFR蛋白表達，說明EGFR siRNA能夠強烈干擾EGFR表達。本研究隨后以CNTF和(或)EGFR siRNA處理星形膠質細胞，結果顯示，CNTF單獨處理可明顯上調星形膠質細胞GFAP 表達，EGFR siRNA轉染則完全逆轉了CNTF對GFAP表達的誘導作用，與EGFR抑制劑的作用相似[3]，表明EGFR基因沉默可抑制星形膠質細胞活化。為了進一步探討其分子機制，我們采用Western blot檢測各組細胞STAT3、p-STAT3表達，發現EGFR siRNA對STAT3整體蛋白水平無影響，但能明顯抑制CNTF介導的p-STAT3水平上調，提示阻礙STAT3磷酸化可能是EGFR基因沉默抑制星形膠質細胞活化的重要機制。

綜上所述，本研究結果表明，EGFR在腦出血后血腫周圍腦組織中呈高表達，EGFR基因沉默對星形膠質細胞活化有良好的抑制作用，其機制可能與阻礙STAT3磷酸化有關。因此，EGFR可能成為抑制星形膠質細胞活化的一個潛在的、有價值的靶點，采用siRNA或抑制劑下調EGFR表達，對于腦出血等腦損傷疾病后的神經再生和功能恢復具有重要的意義。

( 致謝： 本實驗在侗醫藥研究湖南省重點實驗室和南華大學附屬第一醫院臨床醫學研究所完成，感謝謝明教授和武衡博士以及各位老師的指導和幫助。)

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EGFR siRNA inhibits activation of astrocytes derived from rats through blockade of STAT3 phosphorylation

QIAN Hong1,2, LIU Li-jing1, LI Yan-chun2, XIE Ming3, WU Heng3, LIU Shuang-xi4, WU Bin4

(1.SchoolofClinicalMedicine,HunanUniversityofMedicine,HuaihuaHunan418000,China；2.DeptofNeurology,theFirstAffiliatedHospital,HunanUniversityofMedicine,HuaihuaHunan418000,China；3.DeptofNeurology,theFirstAffiliatedHospital,UniversityofSouthChina,HengyangHunan421001,China;4.DeptofNeurology,HuaihuaFirstPeople’sHospital,HuaihuaHunan418000,China)

Abstract:AimTo observe the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) in cerebral tissues around hematomas after intracerebral hemorrhage, and explore the effects of EGFR on activation of astrocytes derived from rats and the involved mechanisms. MethodsThe specimens of cerebral tissues around hemotomas after intracerebral hemorrhage undergoing hemotomas removal operation were collected and then divided into 4 groups according to the time of intracerebral hemorrhage: <1 d, 1~5 d, 6~10 d and >10 d groups. Each group included 20 cases. At the same time, 20 dropped brain tissues distant to hemorrhage in the operative process were collected as control group. Immunohistostaining and Western blot were used to measure the expression of EGFR. After isolation and culturing, the astrocytes of rat cortex were treated with culture solution (control group), CNTF that was used to activate astrocytes, scramble siRNA+CNTF and EGFR siRNA+CNTF for 24h, respectively. The expression of glial fibrillary acidic protein (GFAP) mRNA was detected through fluorescence real-time quantitative PCR. In addition, the protein levels of GFAP, signal transducers and activators of transcription 3 (STAT3) and phosphorylated STAT3 (p-STAT3) were examined using Western blot. ResultsWith the extension of intracerebral hemorrhage time, positive signal index and protein expression levels of EGFR gradually elevated, reached the peak on 6~10d, and then decreased after 10 d. There was statistical difference (P<0.01). The expression levels of GFAP mRNA and protein as well as p-STAT3 were significantly increased in cells treated with CNTF alone as compared to control group (P<0.01), whereas these effects were almost completely reversed by EGFR siRNA transfection (P<0.01). Additionally, there was no statistical difference in STAT3 protein levels among groups (P>0.05). ConclusionsEGFR expression is upregulated in the cerebral tissues around hemotomas after intracerebral hemorrhage. Gene silence of EGFR contributes to suppressing the activation of astrocytes derived from rats, which may be involved in the blockade of STAT3 phosphorylation.

Key words:astrocytes; intracerebral hemorrhage; epidermal growth factor receptor; siRNA; glial fibrillary acidic protein; signal transducers and activators of transcription 3

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1978(2016)02-0216-07

doi:10.3969/j.issn.1001-1978.2016.02.014

作者簡介：錢紅(1977-)，女，碩士，主治醫師，講師，研究方向：腦血管疾病的防治，E-mail：tyne000@sina.com;劉理靜(1976-)，男，碩士，副主任醫師，研究方向：腦血管疾病及肺纖維化的防治，通訊作者，Tel：0745-2381949,E-mail：wsfyz-000@163.com

基金項目：湖南省教育廳科研項目(No 14C0906)

收稿日期：2015-09-16，修回日期：2015-10-20

網絡出版時間：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160125.1557.028.html網絡出版地址：2016-1-25 15:57