吡喹酮對雌性大鼠卵巢儲備功能的影響

邵銳鋒，皮潔

(長江大學第二臨床醫(yī)學院 荊州市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學中心，湖北 荊州 434020)

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吡喹酮對雌性大鼠卵巢儲備功能的影響

邵銳鋒，皮潔

(長江大學第二臨床醫(yī)學院 荊州市中心醫(yī)院生殖醫(yī)學中心，湖北 荊州 434020)

目的：通過研究吡喹酮對雌性大鼠卵巢儲備功能的影響，探討其臨床用藥的安全性。方法：成年雌性SD大鼠60只,隨機分為吡喹酮組(150mg/(kg·d))和對照組(生理鹽水組)，分別于用藥后1、4、8周采用股動脈放血處死受試動物，取血清，放射免疫方法測定雌二醇(E2)濃度、卵泡刺激素(FSH)濃度、酶聯(lián)免疫方法測定抗苗勒管激素(AMH)濃度。結果：吡喹酮組與對照組血清E2、FSH濃度無明顯差異，血清AMH濃度有下降的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結論：吡喹酮對SD雌性大鼠的卵巢儲備功能沒有影響。

吡喹酮；卵巢儲備功能；卵泡雌激素；抗苗勒管激素

現(xiàn)階段治療血吸蟲病的藥物中，吡喹酮因其療效高、療程短、不良反應少等優(yōu)點，應用最為廣泛。隨著吡喹酮在流行區(qū)的大量長期使用，其對育齡女性生育能力的影響逐漸受到人們的關注。本研究通過觀察雌性大鼠血清激素水平的變化，研究吡喹酮對卵巢儲備功能的影響，為臨床用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

成年Spragne-Dawley(SD)雌性大鼠60只，年齡60～70d，體質量(230±20)g，均來自華中科技大學同濟醫(yī)學院動物實驗中心。

吡喹酮(PZQ)上海第六制藥廠 、AMH ELISA試劑盒(Diagnostic Systems Laboratories 公司 美國)、 ELISA檢測儀(Molecular Devices 公司 美國)、 FSH試劑盒(上海生物工程公司)、E2試劑盒(上海羅氏公司)。

1.2 研究方法

1)實驗動物和分組 全價顆粒飼料喂養(yǎng)成年未孕SD大鼠，自由攝食，室溫25℃，濕度45%～55%，每日光照12h，定期消毒和通風，飼養(yǎng)一周熟悉環(huán)境。隨機分為吡喹酮組和空白對照組，每組30只。

2) 給藥方法 根據大鼠與人體間的等效劑量換算[1],稱取300mg吡喹酮加適量蒸餾水配置成10ml吡喹酮懸液，每日8至9時吡喹酮組給予1ml吡喹酮懸液灌胃,空白對照組給予生理鹽水1mL/d灌胃，分別于用藥后1、4、8周于動情期股動脈放血處死動物，分為1、4、8周三個組，每組均為10只，取血清置于0℃冰箱待測。

1.3 檢測指標

放射免疫分析法測定血E2、FSH，按試劑盒操作規(guī)程進行。用AMH ELISA試劑盒檢測大鼠血清中AMH濃度：取20μL標準品、對照品和血清加入96孔板中，孵育，洗板。將抗體加入板中，孵育，洗板。最后，TMB顯色，酶標儀測450nm和620nm處波長。

1.4 統(tǒng)計學分析

2 結果

2.1 血清E2、FSH水平測定結果

吡喹酮組1、4、8周后 E2濃度分別為(20.60±2.47)、(21.01±2.55)、(21.89±2.64)pg/mL，F(xiàn)SH濃度分別為(2.00±0.20)、(2.04±0.15)、(2.15±0.13)ng/mL；對照組1、4、8周后 E2濃度分別為(19.95±2.44)、(20.79±2.25)、(21.42±2.47)pg/mL，F(xiàn)SH濃度分別為(2.01±0.22)、(2.03±0.13)、(2.13±0.18)ng/mL，兩組間血清E2和FSH濃度比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2 血清AMH水平測定結果

吡喹酮組1、4、8周后AMH濃度分別為(2.09±0.16)、(1.99±0.10)、(1.88±0.12) ng/mL，對照組1、4、8周后AMH濃度分別為(2.16±0.14)、(2.04±0.09)、(1.93±0.10) ng/mL,血清AMH濃度有下降的趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討論

卵巢的主要功能表現(xiàn)為周期性的排卵和周期性變化的激素分泌，它決定著個體的生育能力。目前評價卵巢的儲備功能的重要指標包括基礎FSH，竇卵泡計數以及AMH的測定等。血清FSH、E2水平是臨床上衡量卵巢儲備功能最常用的指標，其主要是通過下丘腦—垂體—卵巢軸之間的激素的正負反饋機制調節(jié)，血清FSH水平的升高常提示卵巢儲備功能的衰退[2]。AMH僅表達于女性卵巢內卵泡的顆粒細胞，其水平與卵巢內竇卵泡的數量呈正相關[3,4]，與體內的其他激素FSH、E2無關，不受下丘腦—垂體—卵巢軸和藥物的影響，因此，測量血清中AMH的水平能夠比基礎FSH、E2更準確的反映卵巢的儲備能力。梁元晶等[5]基礎研究表明，隨著大鼠年齡的增長，卵巢中分泌AMH的卵泡數量減少，血清AMH水平下降，提示卵巢儲備功能的下降。

吡喹酮是治療血吸蟲病的首選藥物。在以往的研究中發(fā)現(xiàn)吡喹酮用藥后會對神經系統(tǒng)、消化系統(tǒng)產生不同程度的損害[6]，也有學者觀察到吡喹酮用藥后會對女性的月經周期產生影響[7]，但吡喹酮使用后對雌性動物的生殖功能影響的研究較少。本實驗通過SD雌性大鼠吡喹酮灌胃后觀察大鼠血清中AMH、FSH、E2等激素水平的變化，探討吡喹酮對SD雌性大鼠卵巢儲備功能的影響。

本研究發(fā)現(xiàn)，雌性大鼠在應用吡喹酮后1、4、8周后血清中FSH、E2的濃度與對照組相比均無明顯差異，說明大鼠的下丘腦—垂體—卵巢軸沒有受到藥物的影響，這可能與吡喹酮的作用機制有關。吡喹酮口服后吸收迅速，于1h左右達到峰值，經過肝臟時絕大部分被分解為羥基代謝物，靶向作用于血吸蟲細胞膜上電壓門控鈣通道(Voltage-gated calcium channels,VGCCs),使蟲體內Ca2+上調，引起蟲體攣縮和死亡，故對機體的傷害比較小[8,9]，而腦脊液中的藥物濃度顯著低于血藥濃度，其原因除血腦屏障外，還可能與腦脊液的的引流作用有關[10]。而吡喹酮組大鼠血清AMH呈現(xiàn)出降低的趨勢，表明大鼠卵巢內竇卵泡的數目減少，可能與藥物的持續(xù)時間有關，需要更大樣本量的研究。

通過本實驗，我們觀察到吡喹酮治療血吸蟲病效果好，對卵巢儲備功能無明顯影響，但長時間用藥時應注意監(jiān)測卵巢功能。

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[編輯] 劉陽

2016-05-16

邵銳鋒(1985-)，男，主治醫(yī)師，碩士，主要從事不孕不育與輔助生殖的臨床工作；通信作者：皮潔，hbpijie@163.com。

R532.21

A

1673-1409(2016)30-0079-02

[引著格式]邵銳鋒，皮潔. 吡喹酮對雌性大鼠卵巢儲備功能的影響[J]. 長江大學學報(自科版),2016,13(30):79～80.