牛赤羽病的獸醫臨診方法

趙福忠

（黑龍江省農墾科學院畜牧獸醫研究所，黑龍江哈爾濱 150038）

牛赤羽病的獸醫臨診方法

趙福忠

（黑龍江省農墾科學院畜牧獸醫研究所，黑龍江哈爾濱 150038）

赤習毛病（AKA）又稱阿卡斑病。該病以妊娠牛流產、早產、死產、異常產的犢牛，常發生四肢關節彎曲或屈曲，脊柱呈S狀彎曲，不能站立、哺乳困難為特征。引起本病的病毒為布尼安病毒科布尼安病毒屬的辛波病毒群的赤羽病毒。1997年，上海等地區的一些奶牛場暴發流產，流產率10～15%，流產胎兒以死胎、畸形、關節彎曲為多。1998年從當地捕獲的蚊、蝶中分離到12株病毒，其中3株與赤羽病病毒相似，證明我國也有本病存在。

赤羽病；診斷；血清學診斷

1 臨床、流行病學診斷

1.1 流行病學

本病毒主要感染牛、綿羊和山羊，可影響妊娠動物胎兒的正常發育，并能垂直傳染。本病為蟲媒病，主要傳染媒介是蚊和蠓。其流行特點是季節性明顯，流產和早產從8月份逐漸增多，10月份達到高峰，以后逐漸減少。死產到次年1月份達到高峰，流行至5月底停止。異常產多以9月開始至翌年3月為高峰。本病呈地方性流行，但一般同一地區不連續發生。

1.2 臨床癥狀

自然感染或人工感染牛一般臨床上幾乎不呈癥狀。主要危害孕牛，而且多發生在胎齡7個月齡以上或接近分娩的時期。流行初期，孕牛主要是流產和早產；流行中期，產出的犢牛主要表現四肢關節和脊柱彎曲、歪脖等異常體態，站立吃乳困難，也可見各種中樞神經缺損的犢牛；流行后期，多見死產或無生存能力的犢牛。該病對流產牛子宮損害不大，因此對母牛下次妊娠無大影響。綿羊和山羊的癥狀同牛相似，妊娠綿羊發生異常產或死產，異常產的羔羊可出現四肢關節呈球狀和脊柱彎曲。

2 病理學診斷

本病毒感染的妊娠母牛，一般不出現癥狀，主要通過胎盤感染胎兒。異常產的胎兒眼況變化為四肢關節彎曲、脊柱彎曲、歪脖等異常體態；流行中期，除多發關節彎曲癥外還多見伴有各種中樞神經缺損癥。

3 病原學診斷

3.1 病料的采集和處理

采集流產和早產胎兒的腦、腦室液、脊髓、肌肉、胎盤以及肝、肺、脾等混合病料研磨后，制成乳劑，取上清液接種細胞和動物。

3.2 病原分離

（1）細胞培養：赤羽病毒可在許多種類的細胞生長，并產生細胞病變，如BHK-21、Hmlu-1、Vero、ESK等傳代細胞，也可在牛、豬、豚鼠等原代腎細胞生長，其中倉鼠肺Hmlu-1細胞敏感性最高，并易產生蝕斑。

（2）雞胚接種：將病料乳劑上清液接種于7～9日齡SPF雞胚卵黃囊，如有病毒存在能引起雞胚發生積水頭癥、大腦缺損、發育不全和關節彎曲等異常，并從雞胚中分離到病毒。

（3）乳鼠接種：將病料乳劑上清液接種乳鼠是分離病毒最可靠的方法。每只1～2日齡乳鼠，腦內接種0.02ml，每組病料至少用同窩乳鼠6只。丟棄24h內死亡的乳鼠，每天觀察神經癥狀，觀察10d。當乳鼠出現神經癥狀時收獲鼠腦。鼠腦毒傳第二代時一般3～5d即可出現癥狀。可作為病毒初步鑒定。

3.3 病毒鑒定

將有病理變化的雞胚或發病乳鼠的腦組織制成的乳劑接種細胞BHK21或Hmlu-1，當培養細胞產生病變后，凍融兩次離心取上清液與等量的標準赤羽病陽性血清中和1h后，再接種上述細胞，當細胞不再出現細胞病變時，證明該病毒為赤羽病病毒。

4 血清學診斷

赤羽病血清學診斷方法有多種。各國根據各自的情況選用不同的診斷方法，國際上最常用的血清學方法有微量血清中和試驗，瓊脂免疫擴散試驗，紅細胞凝集試驗和酶聯免疫吸附試驗等。紅細胞凝集試驗由于抗原和每份被檢血清均需用丙酮多次處理，離心洗滌，操作比較費事，不利推廣。酶標雖然敏感、快速、操作簡單，但在現有條件下不容易控制非特異性的產生。微量血清中和試驗因其特異性強、敏感性好、操作比較簡單，為各國首選檢查方法。瓊脂免疫擴散試驗因其方法簡便，特異性好，不需要特殊儀器而被廣泛用于本病檢疫。

下面介紹瓊脂免疫擴散試驗的操作方法及結果判定。

4.1 材料準備

器材與試劑：打孔器孔徑5mm，直徑9cm的平皿、顯微鏡、照明燈、50μl微量加樣器及塑料滴頭；瓊脂糖、氫氧化鈉、硼酸、疊氮鈉、抗原、標準陽性血清、被檢血清（按常規方法采血分離血清，在4℃保存15d檢查有效，-20℃可較長時間保存）和瓊脂糖平板。

4.2 操作程序

（1）孔型圖案的準備：根據需要可選用7孔型或63孔型圖案。孔徑5nm，孔距3.5mm。（2）把孔型圖案放在平皿下，用打孔器按圖形準確位置打孔。孔內瓊脂用眼科鑷子小心夾出，勿破壞周圍瓊脂。（3）滴加抗原和血清：7孔型，中央孔加抗原，1、3、5孔加標準陽性血清，2、4、6孔分別加三份被檢血清。63孔型，按圖“G”孔加抗原，“+”孔加標準陽性血清，數字孔加被檢血清（注意每加一份被檢血清需要換1次滴頭）。各孔1次加滿，不得溢出。平皿加蓋后放于室溫（20℃），如室溫較高可將平皿放在濕盒中，24h和48h各檢查1次，檢查時用斜射強光，背景要暗。

4.3 結果判定

（1）強陽性：抗原孔與被檢血清孔之間出現一條清晰而且致密沉淀線，并與標準陽性血清的沉淀線完全融合，被檢血清判為強陽性，根據沉淀線的長短，其記錄符號為“+++～++”。（2）陽性：抗原孔和被檢血清孔之間雖無明顯沉淀線，但能使兩側的標準陽性血清形成的沉淀線末端向毗鄰的被檢血清孔內側彎曲，被檢血清判為陽性，記錄符號為“+”。（3）疑似：標準陽性血清形成的沉淀線末端向毗鄰的被檢血清孔處彎曲不明顯，而不易判定時，判為疑似，其記錄符號為“±”。可用7孔型重檢，也可將被檢血清濃縮2～4倍重檢，重檢仍為疑似時，判為陽性。（4）陰性：抗原孔與被檢血清孔之間無沉淀線，標準陽性血清形成的沉淀線直伸到被檢血清孔的邊緣，被檢血清判為陰性，其記錄符號為“-”。

［1］ 馮學平. 赤羽病的病性流行及其診斷［J］.貴州畜牧獸醫，1987，（3）：117.

趙福忠（1971—），男，碩士，大專，主要從事畜牧方面工作。