綠色熒光蛋白裸小鼠的培育及應用進展

方　天,　惲時鋒（南京軍區南京總醫院比較醫學科, 南京 210002）

綠色熒光蛋白裸小鼠的培育及應用進展

方天,惲時鋒
（南京軍區南京總醫院比較醫學科, 南京 210002）

綠色熒光蛋白（GFP）裸小鼠最初是為腫瘤研究而培育，是同時具有T淋巴細胞缺陷和系統表達GFP基因的裸小鼠。近20年來，學者們對其生物學特性進行了廣泛而深入的研究，為該小鼠模型的應用奠定了基礎。

綠色熒光蛋白（GFP）； 裸小鼠； 免疫學特性； 腫瘤模型

自1962年Shimomura 等［1］從水母（Aequorea victoria）中提取綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP）以來，GFP幾乎應用于各個科學領域；GFP廣泛作為報告基因用于檢測特殊細胞中啟動子的活性［2］。同時，GFP能與目的蛋白組成一個嵌合體用于檢測蛋白的功能、位置和表達情況［3］；也經常應用于基因治療［4］和GFP融合蛋白的定量檢測［5］。隨著GFP等熒光染料和影像技術的發展，體內成像取得了巨大進步，這使得研究宿主微環境內不同細胞在細胞水平和分子水平上的相互作用成為可能［6］。Ikawa等［7］第一次報道了系統性表達GFP的轉基因小鼠，GFP轉基因小鼠雖然可用于癌癥生物學特性的研究, 但容易對接種的癌細胞或者腫瘤組織出現免疫排斥。為了降低免疫排斥反應, 研究者致力于將GFP基因導入裸小鼠。近20年, 已有系統性表達GFP、紅色熒光蛋白（red fluorescent protein, RFP）和青色熒光蛋白（cyan fluorescent protein, CFP）裸小鼠的報道［8-10］。GFP裸小鼠應用廣泛, 特別是在癌癥研究領域； GFP裸小鼠模型幫助解釋間質細胞在癌細胞存活和轉移中的作用［11,12］。另外,由于GFP裸小鼠沒有毛發, 整體成像更具有優勢［13］。

本實驗室于2005年從美國Jackson實驗室引進表達GFP的C57BL/6-Tg（ACTB-EGFP）10sb/J小鼠，與普通BALB/c裸小鼠進行雜交繁育，經過篩選，選育出GFP裸小鼠，并對該小鼠進行了十多年精心培育和對生物學特性的研究探索。本文作者將對GFP裸小鼠的生物學特性及其應用進行綜述，為動物模型，特別是腫瘤模型的研究應用者，提供有價值的參考資料。

1　GFP裸小鼠的來源

普通裸小鼠是先天性胸腺缺陷的突變小鼠,目前已成為醫學生物學研究領域中不可缺少的實驗動物模型，特別是在腫瘤學、免疫學、藥品與生物制品的安全性評價及有效藥品的篩選等實驗方面，具有特殊應用價值［14］。目前已將裸基因（nu）導入不同近交系動物，成為系列動物模型，我國目前所應用的自發性免疫缺陷小鼠，主要是BALB/c遺傳背景的裸小鼠。

本實驗室培育的GFP裸小鼠是將GFP基因導入BALB/c-nu/nu小鼠而得。具體培育過程：通過（GFP）C57BL/6轉基因小鼠與BALB/c裸小鼠進行雜交，獲得子一代（F1）代，選取F1代小鼠進行自交，產生子二代（F2）代，從F2代中選擇帶綠色熒光的雄性裸小鼠與雌性熒光雜合子，進行全同胞交配，獲得的GFP裸小鼠再與BALB/c小鼠進行回交，回交后代再自交，產生子三代（F3）代，F3代回交后代再自交，產生子四代（F4）代，如此重復，直至第十五代（F15）代，便可成功選育出在體內能穩定表達GFP的裸小鼠。

2　GFP基因表達特點

近年來，無胸腺裸小鼠作為動物模型，為實驗免疫學、實驗腫瘤學提供了新的工具［15,16］。而GFP，無需作用底物或共同作用物，在熒光激發下可以直接發光, 性質穩定，已成為細胞生物學以及分子生物學中應用最廣泛的分子標記之一［1,17］。1980年, Gordon等［18］用顯微注射方法獲得了2只轉基因小鼠。1995年, Ikawa等［7］采用GFP報告基因，成功建立了GFP轉基因小鼠。熒光成像具有操作簡單、所得結果直觀、靈敏度高等特點，在活體動物體內成像中得到廣泛應用［19-21］。而表達GFP的裸小鼠因自身含有標記蛋白與普通裸小鼠相比而具有明顯優勢，在生物醫學領域有其特殊應用價值。

在熒光顯微鏡下, 本實驗室培育的GFP裸小鼠大部分器官都表達綠色熒光，包括心臟、肺臟、脾臟、胰腺、食管、胃和十二指腸，其中皮膚、血細胞、肌肉均表達綠色熒光［22］。初步研究結果顯示，該GFP轉基因裸小鼠既保留了裸小鼠的生物學特性，在全身組織器官中又能穩定表達GFP。

本科室尤金煒等［23］進一步利用逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）分子技術檢測GFP基因在不同日齡的GFP裸小鼠體內的表達情況，得出結論：胰腺、心臟、皮膚等主要器官中均檢測到表達，其中在胰腺中相對表達量最高，其次是心臟、皮膚、全腦和睪丸，而在腸道、肺臟、腎臟、脾臟和肝臟中的相對表達量較少。GFP在各種組織中表達量的差異，為科學研究中選擇疾病模型及移植供體提供了依據。

3　GFP裸小鼠生物學特性

3.1生理生化特點

實驗動物作為現代科學技術中“活的試劑”、“活的精密儀器”，血液學、生理生化常數是鑒定其遺傳品質的重要依據［24］。尤金煒等［25］報道，GFP裸小鼠與對照組BALB/c裸小鼠比較, 雖然它是在BALB/c裸小鼠的基礎上構建成功的，但在生理、生化等指標上確實存在差異，9項生理指標有5項差異顯著，其中白細胞總數（WBC）、平均血紅蛋濃度（MCHC）差異極顯著；WBC也通常被稱為免疫細胞，是監測機體的免疫防御功能，現已成為免疫力低下動物模型的重要參考指標之一，檢測結果顯示兩者雖然差異極顯著, 但是均遠低于正常小鼠的WBC，這與本文作者方天等［26］報道結果一致。12項生化指標中除了尿酸（UA）差異顯著，尿素（URE）、葡萄糖（GLU）差異極顯著之外，整體差異性不大。該實驗選擇的GFP裸小鼠與賀曉玉等［27］報道的GFP小鼠在生理生化數值上有一定的差異性，但是在與同樣條件對照組的差異性結果基本一致。GFP裸小鼠在免疫指標WBC、腎功能指標URE和UA以及血糖指標GLU上與對照組的差異性十分明顯, 但是影響此結果的因素是否為外源基因GFP的導入及其發生機制尚需進一步研究。該實驗檢測結果還表明, GFP裸小鼠的血液生理、生化指標在雌雄性別間均存在差異, 對照組BALB/c裸小鼠雌雄性別間也存在差異。這種雌雄間的差異性與田小蕓等［28］報道的轉基因小鼠及王冬平等［29］報道的近交系與遠交群小鼠所得出結果一致。但是GFP裸小鼠在雌雄間差異較對照組更為明顯, 統計結果顯示, GFP裸小鼠在白蛋白（ALB）、球蛋白（G）、紅細胞分布寬度（RDW）、平均血紅蛋白含量（MCH）、平均血紅蛋濃度（MCHC）、血小板計數（PLT）等指標在雌雄間存在差異。可見品種、性別因素對血液學指標有一定影響, 因此GFP裸小鼠在實際應用中要考慮雌雄間差異。

3.2免疫學特性

GFP裸小鼠是在裸小鼠的基礎上培育，故其T細胞活性大致與裸小鼠相似，一定程度上保持了裸小鼠的免疫學特性，但外源基因GFP的導入或導致免疫特性改變。脾臟是機體內最大的外周免疫器官［30,31］, 脾臟淋巴細胞數量多少可在一定程度上反映機體免疫功能的高低［32,33］。本文作者方天等［27］實驗表明，28日齡GFP裸小鼠脾臟指數明顯高于14日齡、49日齡和70日齡的GFP裸小鼠（P＜0.05），可能是脾臟在14日齡到28日齡生長發育速度快，而28日齡后則基本停止脾臟個體發育。與普通裸小鼠相比，同一日齡GFP裸小鼠脾臟淋巴細胞數較少、淋巴細胞密度稀疏（P＜0.05）； GFP裸小鼠不同日齡組之間比較結果，28日齡之后，隨日齡增長，淋巴細胞數呈減小趨勢（P＜0.05）。這從一定程度上說明，GFP裸小鼠與同一日齡普通裸小鼠相比較，免疫功能更為低下； 并且GFP裸小鼠隨日齡增長，免疫功能有下降趨勢。該實驗結果反映外源基因（GFP基因）會對脾臟形態及其功能產生一定的影響。關于外源導入基因影響GFP裸小鼠脾臟形態及其功能的機制尚需進一步研究。

另外，本科室已有研究人員就GFP裸小鼠的體液免疫以及細胞免疫例如T細胞活性及數量、B細胞活性以及NK細胞活性正在進行進一步的研究與探討。

4　GFP裸小鼠在生物學研究中應用

4.1腫瘤學中應用

GFP裸小鼠在國外的應用廣泛，遍布于腫瘤學、基因學等多個生物科學領域，如RFP標記腫瘤細胞接種到綠色熒光裸小鼠體內后, 在熒光顯微鏡或熒光成像系統下可以很清楚區分動物正常組織細胞及腫瘤細胞，能方便地在動物活體內觀察腫瘤的生長、代謝、轉移、凋亡情況［34］, 也能觀察腫瘤動物模型在各種治療（藥物、化療、放療、生物治療等）后的恢復情況［35］。在研究人類腫瘤的發病機制、侵襲與轉移過程和治療措施中占據重要地位，而帶熒光標記的裸小鼠能更好模擬及觀察腫瘤侵襲與轉移的微環境［8］。GFP裸小鼠因無毛發遮掩，成像更為簡單，有望取代手術解剖或切割皮膚的方法來觀察腫瘤組織［36］。另外，GFP裸小鼠模型有助于鑒定腫瘤組織中細胞生物學特性，也提供了研究腫瘤血管生成中細胞間融合作用的簡易工具,以GFP/RFP在同一個多核巨細胞中出現的示蹤證據直接證實：腫瘤細胞和正常宿主細胞融合后的細胞更加具有轉移能力、侵襲性、耐藥性、異倍體性以及惡性基因水平轉移等［37］。

近年GFP裸小鼠在國內腫瘤學方面的應用研究也逐漸增多。綠色熒光裸小鼠的建立和應用中，將RFP-A549細胞皮下接種于GFP轉基因小鼠體內，結合分子影像技術手段，利用雙色熒光成像系統區分癌細胞和宿主動物［38］。GFP裸小鼠為進一步研究癌細胞和宿主動物之間的關系提供了有力的工具動物，是活體熒光影像研究的重要實驗動物，符合實驗動物學“3R”原則。同樣, 代興亮等［39］將轉染RFP基因的SU3、U87-MG細胞和用親脂性的碳青染料染色的c6膠質瘤細胞，接種于GFP近交系裸小鼠腦內，建立RFP/GFP雙色熒光示蹤的腫瘤模型，結果表明，移植瘤組織重構是在侵襲于腦實質、腦室、腦血管的腫瘤細胞誘導或宿主細胞融合后發生的。

與普通裸小鼠相比，GFP裸小鼠除了有明顯的活體觀察和體內示蹤方便的優勢之外，在成瘤率和腫瘤組織特性方面也有一定優勢。胡文娟等［40］比較GFP裸小鼠結直腸癌腫瘤模型和普通裸小鼠模型的腫瘤形態學、生物學特性以及病理學之間的差異，結果表明，GFP裸小鼠結直腸癌腫瘤模型的成瘤時間較短（3～5 d），腫瘤瘤體積較大，且在顯微鏡下，病理切片上觀察到腫瘤細胞生長活躍，大小較為均勻，部分區域可見腺腔形成。

4.2其他應用

Hu等［41］從GFP裸小鼠體內分離培養內皮細胞（endothelial cell, EC）。在體外研究中，檢測紅細胞生成素（EPO）對EC擴增和凋亡的影響；在體內研究中，誘導普通小鼠制作急性肺損傷模型，隨機分為兩組，一組靜脈注射從GFP裸小鼠體內分離的EC進行處理，另一組不進行處理作為對照組，檢測各組肺臟內皮修復、肺臟毛細血管通透性、急性肺炎和肺臟血管新生狀況，結果顯示EPO對內皮祖細胞（EPC）有明顯的抗凋亡和擴增作用，EPC可降低急性肺損傷程度，且與EPO聯合給藥對EPC會有保護效應，EPO對EPC的作用可能是由磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（PKB, 也稱Akt）（PI3K/Akt） 信號通路介導的。

張俊華等［42］在研究間充質干細胞治療實驗性自身免疫性腦脊髓的療效和免疫調節機制的過程中，用髓鞘少突膠質細胞糖蛋白和弗氏完全佐劑誘導建立小鼠自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型，隨機分為骨髓間充質（MSC）細胞治療組和EAE組。MSC組尾靜脈注射分離純化GFP裸小鼠MSC細胞，EAE組尾靜脈注射PBS，采用臨床評分和脊髓組織切片評估小鼠的發病情況，結果表明，MSC移植對小鼠EAE療效顯著。

Zhao 等［43］應用GFP裸小鼠進行細菌靶向治療腫瘤的體內研究。RFP標記前列腺癌細胞PC-3，并于體外將鼠傷寒沙門氏菌感染PC-3細胞； 再將細胞接種于GFP裸小鼠，活體成像，研究結果顯示，腫瘤接種15 d，肝臟、肺臟、脾臟和腎臟中沒有檢測到鼠傷寒沙門氏菌，但PC-3腫瘤停止生長，并在腫瘤中檢測到鼠傷寒沙門氏菌，為腫瘤治療提供了另一條有效途徑。Hose等［44］將腎母細胞瘤基因WT1導入GFP裸小鼠， 揭示WT1在正常造血和患有白血病個體造血過程中動態調控規律，指出白血病造血干細胞中表達WT1，而正常造血干細胞中不表達WT1，這將會白血病的一個特異性靶向治療方向。

5　展望

從GFP裸小鼠的培育到應用，已有20年，科研工作者對其免疫學特點及其生理生化特征都做了一定的研究。但是，就目前相關文獻報道而言，對該小鼠體液免疫特性研究較少，對細胞免疫研究也不完善，例如T細胞數量及功能、B細胞功能和NK細胞功能均未有明確報道，有待進一步探討。深入了解GFP裸小鼠的免疫學特性，有助于擴大其應用范圍，從而為生物科學研究提供新的動物模型。另外，GFP/RFP雙色熒光示蹤的腫瘤模型因其在腫瘤發生發展過程中分別獨特地示蹤腫瘤細胞與宿主組織細胞的雙重關系，對研究腫瘤微生態環境［45］、腫瘤細胞社會成員關系［46］等目前熱點問題具有重要意義。

本文作者嘗試將GFP裸小鼠應用于腫瘤模型雙色示蹤研究，但需要克服諸多難點，如在建立（RFP）標記的肺腺癌A549皮下接種GFP裸小鼠的腫瘤模型和花菁染料活體示蹤GFP裸小鼠腫瘤模型的建立和研究中，活體雙色熒光成像時，需要光譜范圍廣，穿透力強的熒光顯微鏡。利用GFP裸小鼠的組織以及血管都能表達強烈GFP熒光的優勢，在研究腫瘤組織血管新生的過程中具有重要價值，但需結合制作冰凍切片、免疫熒光以及共聚焦成像等一系列等分子研究方法。

［1］ Shimomura O, Johnson FH, Saiga Y. Extraction, purification and properties of aequorin, a bioluminescent protein from the luminous hydromedusan, Aequorea［J］. Cell Comp Physiol, 1962, 59：223-239.

［2］ Santerre Henriksen AL, Even S, et al. Study of the glucoamylase promoter in Aspergillus niger using green fluorescent protein［J］. Microbiology, 1999, 145（3）：729-734.

［3］ Soboleski MR, Oaks J, Halford WP. Green fluorescent protein is a quantitative reporter of gene expression in individual eukaryotic cells［J］. FASEB J,2005, 19（3）：440-442.

［4］ Davis AR, Meyers K, Wilson JM. High throughput method for creating and screening recombinant adenoviruses［J］. Gene Ther, 1998, 5（8）：1148-1152.

［5］ Dundr M, McNally JG, Cohen J, et al. Quantitation of GFP fusion proteins in single livingcells［J］. Struct Biol, 2002, 140（1-3）：92-99.

［6］ Iyer S, Arindkar S, Mishra A, et al. Development and evaluation of transgenic nude mice expressing ubiquitous green fluorescent protein［J］. Mol Imaging Biol, 2015, 17（4）： 471-478.

［7］ Ikawa M, Kominami K, Yoshimura Y, et al. Green fluorescent protein as a marker in transgenic mice［J］. Dev Growth Differ, 1995, 37：455-459.

［8］ Yang M, Reynoso J, Jiang P, et al. Transgenic nude mouse with ubiquitous green fluorescent protein expression as a host for human tumors［J］. Cancer Res, 2004, 64（23）：8651-8656.

［9］ Yang M, Reynoso J, Bouvet M, et al. A transgenic red fluorescent protein-expressing nude mouse for color-coded imaging of the tumor microenvironment［J］. Cell Biochem, 2009, 106（2）：279-284.

［10］ Tran Cao HS, Reynoso J, Yang M, et al. Development of the transgenic cyan fluorescent protein （CFP）-expressing nude mouse for“Technicolor” cancer imaging［J］. Cell Biochem, 2009, 107（2）：328-334.

［11］ Bouvet M, Tsuji K, Yang M, et al. In vivo color-coded imaging of the interaction of colon cancer cells and splenocytes in the formation of liver metastases［J］. Cancer Res, 2006, 66（23）：11293-11297.

［12］ Suetsugu A, Osawa Y, Nagaki M, et al. Imaging the recruitment of cancer-associated fibroblasts by liver-metastatic colon cancer［J］. Cell Biochem , 2011, 112（3）：949-953.

［13］ Hoffman RM. Orthotopic metastatic （MetaMouse） models for discovery and development of novel chemotherapy［J］. Methods Mol Med, 2005, 111：297-322.

［14］ 施新猷, 王四旺, 顧為望, 等. 比較醫學總論［M］. 西安： 陜西科學技術出版社, 2003：104-105.

［15］ Amoh Y, Yang M, Li L, et al. Nestin-linked green fluorescent protein transgenic nude mouse for imaging human tumor angiogenesis［J］. Cancer Res, 2005, 65（12）：5352-7.

［16］ Miretti S, Roato I, Taulli R, et al. A mouse model of pulmonary metastasis from spontaneous osteosarcoma monitored in vivo by luciferase imaging［J］. PLoS One, 2008, 3（3）：e1828.

［17］ Chalfie M, Tu Y, Euskirchen G, et al. Green fluorescent protein as a marker for gene expression［J］. Science, 1994, 263：802-805.

［18］ Gordon JW, Scangos GA, Plotkin DJ, et al. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA［J］. Proc Natl Acad Sci USA, 1980, 77（12）：7380-7384.

［19］ Yang M, Baranov E, Moossa AR, et al. Visualizing gene expression by whole-body fluorescence imaging［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2000, 97（22）：12278-12282.

［20］ Takada T, Iida K, Awaji T, et al. Selective production of transgenic mice using green fluorescence protein as a maker［J］. Nat Biotechnol, 1997, 15：458-461.

［21］ Sangmi C, Therese A, Kai CS, et al. Analysis of different promoter systems for efficient transgene expression in mouse embryonic stem cell lines［J］. Stem Cell, 2002, 20（2）：139-145.

［22］ 張立波, 劉彪, 田小蕓, 等. 熒光裸小鼠的選育初報［J］. 實驗動物與比較醫學, 2013, 33（4）：306-309.

［23］ 尤金煒, 董敏, 劉彪, 等. GFP在綠色熒光裸鼠不同組織中的表達及分析［J］. 中國實驗動物學報, 2014, 22（5）：67-70.

［24］ 惲時鋒, 朱虹. 在生命科學中影響動物實驗結果的多因素分析［J］. 醫學研究生學報, 2003, 16（5）：372-375,378.

［25］ 尤金煒, 張立波, 方天, 等. 綠色熒光裸鼠血液生理生化指標檢測分析［J］. 中國比較醫學雜志, 2013, 23（9）：62-69.

［26］ 方天, 尤金煒, 張立波, 等. BALB/c熒光裸鼠脾臟組織學的觀察［J］. 中國比較醫學雜志, 2012, 22（12）：6-9.

［27］ 賀曉玉, 何君, 徐艷峰, 等. 綠色熒光蛋白轉基因小鼠的生理生化常數［J］. 中國實驗動物學報, 2011, 19（2）：146-149.

［28］ 田小蕓, 惲時鋒, 胡玉紅, 等. 轉基因EGFP小鼠血液生理生化指標的測定［J］. 實驗動物科學, 2008, 25（10）：56-58.

［29］ 王冬平, 李善如, 張敏, 等. 三種小鼠血液生理生化正常值的測定［J］. 實驗動物科學與管理, 2000, 17（2）：24-28.

［30］ 馮仁田, 潘宏志, 何維, 等. BalB/C小鼠免疫系統結構與功能的增齡性變化［J］. 中華老年醫學雜志, 2000, 3：174-178.

［31］ 劉中祿, 呂鐵鋼, 張永亮, 等. 松子殼多糖對小鼠主要免疫細胞功能的影響［J］. 中國比較醫學雜志, 2010, 20（10）：33-37.

［32］ 苗明三, 苗艷艷, 方曉艷, 等. 大棗多糖對大鼠氣血雙虛模型胸腺、脾臟中組織形態及骨髓象的影響［J］. 中藥藥理與臨床, 2010, 26：42-44.

［33］ 苗明三, 孫艷紅, 史晶晶, 等. 熟地黃粗多糖對血虛模型小鼠胸腺和脾臟組織形態的影響［J］. 中華中醫藥雜志, 2007, 22：318-320.

［34］ Yang M, Li L, Jiang P, et al. Dual-color fluorescence imaging distinguishes tumor cells from induced host angiogenic vessels and stromal cells［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2003, 100（24）：14259-14262.

［35］ Yang M, Jiang P, Hoffman RM, et al. Whole-body subcellular multicolor imaging of tumor-host interaction and drug response in real time［J］. Cancer Res, 2007, 67（11）：5195-5200.

［36］ Jain RK, Munn LL, Fukumura D. Dissecting tumour pathophysiology using intravital microscopy［J］. Nat Rev Cancer, 2002, 2（4）：266-276.

［37］ Berndt B, Zanker KS, Dittmar T. Cell fusion is a potent inducer of aneuploidy and drug resistance in tumor cell/normal cell hybrids［J］. Crit Rev Oncog, 2013, 18（1-2）：97-113.

［38］ 閆寒, 賀小玉, 秦超, 等. 綠色熒光裸鼠的建立和驗證［J］. 中國比較醫學雜志, 2012, 22（6）：62-65.

［39］ 代興亮, 陸朝暉, 王愛東, 等. 雙色熒光示蹤裸小鼠模型用于腦膠質瘤組織重構的研究［J］. 中華實驗外科雜志, 2014, 31（4）：774-776.

［40］ 胡文娟, 梁磊, 尤金煒, 等. 人結直腸癌細胞綠色熒光蛋白裸鼠移植瘤模型的建立與觀察［J］. 中國比較醫學雜志, 2014, 24（11）：56-60.

［41］ HU R , CHENG Y, JING H, et al. Erythropoietin promotes the protective properties of transplanted endothelial progenitor cells against acute lung injury via PI3K/Akt pathway［J］. Shock, 2014, 42（4）：327-336.

［42］ 張俊華, 鄭配國, 馬雪涵, 等. 間充質干細胞治療實驗性自身免疫性腦脊髓的療效和免疫調節機制［J］. 第二軍醫大學學報, 2015, 36（1）：34-38.

［43］ Zhao M, Yang M, Li XM, et al. Tumor-targeting bacterial therapy with amino acid auxotrophs of salmonella typhimurium［J］. Anticancer, 2005, 102：755-760.

［44］ Hosen N, Shirakata T, Nishida S, et al. The Wilms’ tumor gene WT1-GFP knock-in mouse reveals the dynamic regulation of WT1 expression in normal and leukemic hematopoiesis［J］. Leukemia, 2007, 21（8）：1783-1791.

［45］ Spano D, Zollo M. Tumor microenvironment： a main actor in the metastasis process［J］. Clin Exp Metastasis, 2012, 29（4）：381-395.

［46］ Briest F, Berudt A, Clement J, et a1. Tumor stroma interactions in tumorigenesis： lessons from stem cell biology［J］. Front Biosci（Elite Ed）, 2012, 29（4）：1871-1887.

Progress on Development and Application of BALB/c Nude Mouse with GFP

FANG Tian, YUN Shi-feng
（Department of Comparative Medicine， Nanjing General Hospital of Nanjing Military Command， Nanjing 21002， China）

It reported here that the development and application of the transgenic green fluorescent protein （GFP） nude mouse with ubiquitous GFP expression. BALB/c nude mouse with GFP were bred for cancer research initially, in which were deficient in T lymphocytes. In the last decades, researchers had studied vastly and deeply the biological characteristics and application of BALB/c nude mouse with GFP. The application of GFP nude mouse model should greatly expandedour knowledge inscience research.

Green fluorescent protein （GFP）； Nude mouse； Immunologic characteristics； Tumor models

Q95-33

A

1674-5817（2016）02-0152-05

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.016

2015-10-09

南京軍區南京總醫院院課題（2013001）

方天（1984-）, 女, 碩士, 技師。E-mail： Fangtianlove@126.com

惲時鋒（1965-）, 男, 博士, 主任技師, 教授, 碩士研究生導師, 從事醫學實驗動物學工作。E-mail： yunshifeng1@163.com