nm23-H1蛋白在急性髓細胞白血病患者中的表達及其療效

任　羽, 賀愛軍, 葛繁梅

(延安大學附屬醫院, 1. 血液科; 2. 普外科, 陜西 延安, 716000)

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nm23-H1蛋白在急性髓細胞白血病患者中的表達及其療效

任羽1, 賀愛軍2, 葛繁梅1

(延安大學附屬醫院, 1. 血液科; 2. 普外科, 陜西 延安, 716000)

摘要:目的探討nm23-H1蛋白在急性髓細胞白血病(AML)患者中的表達及其療效。方法86例急性髓性白血病患者設為觀察組，79例健康人群作為對照組。結果86例AML患者免疫分型陽性表達率由高到低依次為CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%); CD13+組患者血清nm23-H1蛋白表達情況顯著高于CD13-組(t=3.641, P<0.001)。CD33+組患者血清nm23-H1蛋白表達情況顯著高于CD33-組(t=2.699, P=0.008)。MPO+組患者血清nm23-H1蛋白表達情況顯著高于MPO-組(t=3.402, P=0.001)。初治組患者、CR組、復發組血清nm23-H1蛋白表達顯著高于對照組(P<0.05)。結論AML免疫抗原CD13、CD33、MPO表達陽性患者血中nm23-H1蛋白呈現表達上調。

關鍵詞:急性髓細胞白血病; 免疫分型; 酶聯免疫吸附試驗

急性髓性白血病(AML)是一種骨髓與外周血中原始和優質髓性細胞異常增生的惡性疾病，患者主要表現為貧血、出血、感染、臟器浸潤、肝、脾及淋巴結腫大等特點[1]。對于AML的分型，臨床有眾多的標準，其中細胞形態學和免疫學標準對于AML的診斷和治療意義重大，且能互相印證，分型符合率一致性較高。有研究[2]發現nm23-H1的表達能抑制人類造血干細胞的分化，與腫瘤的轉移和腫瘤細胞增殖、分化密切相關，是一種腫瘤轉移抑制基因。本研究主要分析nm23-H1在AML患者不同免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中的表達情況與不同療效下患者血中nm23-H1定量含量的變化，為AML患者的診斷和治療提供參考與依據。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2013年1月—2014年12月在本院接受治療的86例急性髓性白血病患者為觀察組，其中男54例，女32例，平均年齡(67.6±9.4)歲；按FAB分型可分為原粒細胞微分化型(M0) 1例，原粒細胞白血病未分化型(M1)6例，原粒細胞白血病部分分化型(M2)25例，顆粒增多的早幼粒細胞白血病(M3) 20例，粒-單核細胞白血病(M4) 9例，單核細胞白血病(M5) 22例，紅白血病(M6) 2例，巨核細胞白血病(M7) 1例。同時選取 79例在本院進行體檢的健康人群作為對照組，其中男42例，女37例，平均年齡(65.8±7.5)歲。2組研究對象一般臨床資料比較，差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2檢測與治療方法

入院后取觀察組患者髂骨處0.2 mL骨髓做涂片(6張)，按照FAB標準形態學分類。再取患者骨髓5 mL, 置于枸櫞酸抗凝管中盡快送檢。選用美國BD流式細胞儀，單克隆抗體選擇髓系相關抗體CD13、CD33、MPO進行測量[3]，單克隆試劑由美國BD公司出品。免疫分型以CD45/SCC設計，檢測10 000個細胞，判斷標準如下[4]: 以白血病細胞表面抗原表達≥20%和胞內抗原≥10%為陽性。各抗原積分根據白血病免疫學分型研究組積分系統確定免疫類型。取觀察組患者清晨靜脈血5 mL, 離心后用0.22 μm超微濾紙進行過濾后，置于-80 ℃環境下進行測定。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法測定患者血清中nm23-H1蛋白的含量，試劑盒由深圳依諾金生物科技有限公司提供，操作方法詳見產品說明書。

M3型AML采用全反式維甲酸聯合柔紅霉素進行治療，其余類型的AML患者采用柔紅霉素+阿糖胞苷(DA)、高三尖杉酯堿+阿糖胞苷(HA)或去甲氧柔紅霉素+阿糖胞苷(IA)進行化療[5]。

按照國內2004年AML療效判斷標準: ① 完全緩解(CR): 中性粒細胞≥1.5×109/L, 血小板>100×109/L, 骨髓細胞面積>20%, 骨髓幼稚細胞<5%，無Auer小體。② 復發: CR患者外周血中出現幼稚細胞或骨髓中幼稚細胞的數量超過5%。

1.3觀察指標

比較2組研究對象一般臨床資料；不同FAB分類免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表達情況；比較nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中表達情況; nm23-H1蛋白在AML患者和健康人群中表達情況。

1.4統計學方法

采用SPSS 19.0軟件對收集的數據進行統計分析。計量資料以均數±標準差表示，進行t檢驗。計數資料使用卡方(χ2)檢驗。P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1一般資料

本研究共納入研究對象165例，其中觀察組86例，對照組79例。2組患者一般資料見表1。2組研究對象性別比例、年齡、體質指數(BMI)、吸煙及飲酒史比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表1　2組研究對象一般資料比較

2.2不同FAB分類免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表達情況

86例不同FAB分型AML患者免疫分型抗原CD13、CD33、MPO表達情況見表2。86例AML患者免疫分型陽性表達率由高到低依次為CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%)。其中CD33表達陽性率為94.17%(81/86), M0～M7的CD33表達陽性率為1.23%(1/81)，7.41%(6/81)、29.63%(24/81)、23.46%(16/81)、9.88%(7/81)、27.16%(22/81)、1.23%(1/81)、0。

2.3nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、MPO中表達情況比較

CD13+組患者血清nm23-H1蛋白表達情況明顯高于CD13-組，差異有統計學意義(t=3.641,P<0.001)。CD33+組患者血清nm23-H1蛋白表達情況明顯高于CD33-組，差異具有統計學意義(t=2.699,P=0.008)。MPO+組患者血清nm23-H1蛋白表達情況明顯高于MPO-組，差異具有統計學意義(t=3.402,P=0.001)。見表3。

表2　不同FAb分類免疫分型抗原CD13、CD33、

表3　nm23-H1蛋白在免疫分型抗原CD13、CD33、

與CD13-比較, **P<0.01; 與CD33-比較, ##P<0.01;

與MPO-比較, △△P<0.01。

2.4nm23-H1蛋白在AML患者和健康人群中表達情況

經過治療后發現，初治組患者、CR組、復發組血清nm23-H1蛋白表達水平依次為(47.05±8.61)、(11.34±0.92)、(65.19±10.87) ng/mL, 顯著高于對照組的(5.62±0.94) ng/mL(P<0.05)。初治組、復發組患者血清nm23-H1蛋白表達顯著高于CR組(P<0.05)。

3討論

以往醫學界對于AML的診斷分型主要依靠形態學FAB分型標準進行診斷。隨著免疫學、遺傳和分子生物學技術的發展，FAB分型的局限性逐漸顯露出來。遺傳和分子生物學檢測手段由于操作復雜，成本較高，作為AML的常規診斷尚需時日[6-7]。有學者[8]發現，免疫學分型具有較強的抗原特異性和異質性，交叉表達出現的概率較小，可根據白血病患者不同分化階段的特異性抗原的表達情況對白血病進一步分型，分型準確性可高達90%以上。有學者[9]發現，AML患者最常見的表達抗原為CD13和CD33，可作為AML特異性免疫抗原標記。本研究發現, 86例AML患者免疫分型陽性表達率由高到低依次為CD33(94.17%)、MPO(86.05%)、CD13(77.91%)，與上述文獻的觀點一致。有研究發現，CD33是髓系細胞分化抗原，主要分布在髓系血細胞，主要存在于分化的早期階段。90%以上的AML患者存在CD33表達上調，可以作為髓系白血病治療的良好靶點。

腫瘤轉移抑制基因(nm23)家族是一組抑制腫瘤細胞的轉移表型，有研究[10]發現在人體內nm23基因主要包括nm23-H1、nm23-H2。nm23-H1、nm23-H2是RNA的2個完全不同的基因，受兩個獨立的調控系統調節，其中nm23-H1的mRNA的水平表達降低與癌細胞轉移呈反相關。對于nm23-H1基因在惡性腫瘤中的表達研究較少，但是近年來有學者[11]發現nm23-H1具有二磷酸核苷激酶相同的結構，能夠將蛋白質上的二磷酸核苷轉化成三磷酸腺苷，當體內nm23-H1表達下調時可減低三磷酸核苷的生成，從而影響微管聚合和細胞素信號傳導功能，促進腫瘤細胞發生浸潤。本研究發現，CD13、CD33、MPO免疫抗原表達陽性的患者血中nm23-H1的表達強度高于CD13、CD33、MPO免疫抗原表達陰性的患者，說明nm23-H1基因在AML患者血中呈現高表達，可能與nm23-H1參與AML患者血中原始和幼稚細胞異常增生有關[12-13]。作者還發現，通過化療治療后, AML完全緩解的患者血中nm23-H1出現低表達，而在復發患者中出現異常的高表達的情況，說明nm23-H1高表達預示AML患者預后多為不良，可作為評價治療效果和預后的特異性指標。

綜上所述, AML免疫抗原CD13、CD33、MPO表達陽性患者血中nm23-H1蛋白呈現表達上調，而在完全緩解的患者中表達降低，臨床上可作為AML患者診斷和預后觀察的指標。

參考文獻

[1]Ballen K K. Is there a best graft source of transplantation in acute myeloid leukemia[J]. Best Pract Res Clin Haematol, 2015, 28(2/3): 147.

[2]Lilly A J, Khanim F L, Bunce C M. The case for extracellular Nm23-H1 as a driver of acute myeloid leukaemia (AML) progression[J]. Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol, 2015, 388(2): 225.

[3]孔令環, 韓梅, 鮑彥娜, 等. 流式細胞術對急性白血病免疫分型的臨床意義[J]. 中國實驗診斷學, 2010 (10): 1570.

[4]楊崢, 莫武寧, 李山, 等. 505例白血病應用流式細胞術免疫分型與FAB分型的結果分析[J]. 中國實驗診斷學, 2010(8): 1238.

[5]孟予城, 崔元, 雷蕊, 等. 高白細胞性急性粒-單核細胞白血病的臨床特征及免疫表型研究[J]. 中國實驗診斷學, 2013(3): 566.

[6]楊璐璐, 劉欣, 李慶, 等. 急性髓系白血病免疫分型特點及與療效相關性分析[J]. 中國實驗血液學雜志, 2014(1): 1.

[7]楊芝紅, 洪燕燕. 流式細胞術診斷急性混合細胞白血病臨床意義研究[J]. 中國現代醫學雜志, 2013(5): 67.

[8]周國忠, 傅佳萍, 俞淑麗. 急性髓系白血病177例免疫分型特點及預后分析[J]. 放射免疫學雜志, 2013(5): 620.

[9]Appelbaum F R. Hematopoietic cell transplantation for adults with acute myeloid leukemia with minimal residual disease[J]. Best Pract Res Clin Haematol, 2015, 28(2/3): 133.

[10]Lilly A J, Khanim F L, Hayden R E, et al. Nm23-H1 indirectly promotes the survival of acute myeloid leukemia blast cells by binding to more mature components of the leukemic clone[J]. Cancer Res, 2011, 71(3): 1177.

[11]寧芳, 才紹江, 張同娟, 等. 兒童急性淋巴細胞白血病nm23-H1基因表達及其與免疫分型的關系[J]. 中國當代兒科雜志, 2009(11): 881.

[12]周倩蘭, 唐曉文, 孫愛寧, 等. 異基因造血干細胞移植治療進展期難治性急性髓系白血病17例分析[J]. 中國實用內科雜志, 2012, 32 (4): 297.

[13]王荷花, 歐陽涓, 許多榮, 等. 急性早幼粒細胞白血病分化綜合征臨床特征及對預后的影響研究[J]. 中國實用內科雜志, 2012, 32(2): 132.

Expression of nm23-H1 protein in patients with acute myelocytic leukemia and its efficacy

REN Yu1, HE Aijun2, GE Fanmei1

(1.DepartmentofHematology; 2.DepartmentofGeneralSurgery,TheAffiliatedHospitalofYan′anUniversity,Yan′an,Shaanxi, 716000)

ABSTRACT:ObjectiveTo explore expression of nm23-H1 protein in patients with acute myelocytic leukemia (AML) and its efficacy. MethodsEighty six patients with AML were selected as observation group, while 79 normal people were selected as control group. ResultsPositive expression rates of immune classification from high to low in 86 patients with AML were 94.17% of CD33, 86.05% of MPO and 77.91% of CD13. Expression of nm23-H1 protein in CD13+ group was significantly higher than that in CD13- group (t=3.641, P<0.001). Expression of nm23-H1 protein in CD33+ group was significantly higher than that in CD33- group (t=2.699, P=0.008). Expression of nm23-H1 protein in MPO+ group was significantly higher than that in MPO- group (t=3.402, P=0.001). Expressions of serum nm23-H1 protein in initial treatment group, CR group and recurrence group were significantly higher than control group (P<0.05). ConclusionIn AML patients with positive expressions of immune antigen CD13, CD33and MPO, expression of serum nm23-H1 protein is up-regulated.

KEYWORDS:acute myelocytic leukemia; immune typing; enzyme linked immunosorbent assay

中圖分類號:R 733.7

文獻標志碼:A

文章編號:1672-2353(2016)05-043-03

DOI:10.7619/jcmp.201605013

基金項目:陜西省延安市科技局項目(2014KW-03)

收稿日期:2015-11-19