小檗堿對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響*

仇　燚

(四川省瀘州市中醫醫院，四川 瀘州　646000)

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小檗堿對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響*

仇燚

(四川省瀘州市中醫醫院，四川 瀘州646000)

摘要目的：研究小檗堿對卵白蛋白致敏的離體回腸平滑肌的影響。方法：采用體外離體器官實驗法，觀察小檗堿(20~100 μg·ml(-1))對卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌的影響，以及對磷酸組織胺(His)和氯化乙酰膽堿(Ach)所致豚鼠離體回腸收縮的影響。結果：小檗堿(20~100 μg·ml(-1))能明顯抑制卵白蛋白致敏豚鼠離體回腸平滑肌收縮，對His和Ach所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮也有一定的抑制作用。結論：小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌有明顯的解痙作用。

關鍵詞：小檗堿；豚鼠回腸平滑肌

小檗堿(Berberine)又名黃連素，是從黃連根莖中提取的生物堿。小檗堿在臨床上主要利用其顯著的抑菌作用來治療細菌性痢疾和腸胃炎等疾病。有時臨床上也外用于治療一些皮膚過敏性疾病，如過敏性皮炎、嬰兒濕疹等。現代藥理學研究顯示小檗堿的其藥理作用廣泛，具有抗菌、抗血小板聚集、抗心律失常、降血壓、免疫抑制等作用[1]。已有的研究文獻顯示小檗堿對胃腸道平滑肌有一定的解痙藥理活性，小檗堿對大鼠離體胃平滑肌有明顯的舒張作用，可明顯抑制5羥色胺所致的胃平滑肌收縮[2]，能劑量依賴的抑制His和Ach所致的家兔離體回腸平滑肌收縮，其作用機制與其鈣拮抗有一定關系[3]。為進一步研究，我們采用卵白蛋白所致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮模型，及組胺和乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮模型，探討小檗堿對豚鼠離體回腸平滑肌的影響，現報告如下。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1試驗藥物

鹽酸小檗堿，批號110713-200910，規格30 mg/瓶，中國藥品生物制品檢定所，含量97.9%。

1.1.2動物

豚鼠，英國種，一級，60只，雌雄兼用，生產許可證號：SCXK(川)2008-14，由四川省實驗動物養殖場提供。

1.1.3試劑

組胺磷酸鹽，規格：5 g/瓶，批號：F20100319，國藥集團化學試劑公司，BR級；氯化乙酰膽堿，規格1 g/支，批號：20061130，上海三愛思試劑有限公司，CP級；卵白蛋白，含量≥98%，批號：040M7001V，Sigma公司。

1.1.4儀器

Powerlab/8sp生理記錄儀，澳大利亞AD 儀器公司。

1.2方法

1.2.1卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮

按文獻方法[4]，取體重150~200 g的健康豚鼠，于每只豚鼠兩后肢各注射5%卵白蛋白生理鹽水溶液0.4 ml，同時腹腔注射卵白蛋白生理鹽水溶液1 ml。第5周取致敏的豚鼠，用鐵棒猛擊枕部致昏迷，立即剖開腹腔，從回盲交界處向上2 cm開始，取出回腸一段，制備成約2 cm長的腸段若干。置于盛有10 ml克氏液的浴槽中，通氧，負荷1 g，37℃平衡30 min。然后分別依次加入空白溶媒，小檗堿不同濃度進行預處理，孵育約5 min后，加卵白蛋白0.2 mg(1 mg·ml-1卵白蛋白克氏液，0.2 ml)激發離體回腸收縮。用Powerlab生理信號儀記錄預處理前3 min和加入卵白蛋白后3 min的豚鼠回腸平滑肌肌條的活動曲線，計算其平均收縮幅度，并以他們之間的差值作為效應值。受試藥物的藥效亦可用回腸收縮幅度抑制率表示，抑制率=(1-受試藥物的效應值/空白對照組的效應值)×100%。

1.2.2組胺、乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮

取禁食不禁水24 h健康豚鼠，用鐵棒猛擊枕部致其昏迷，立即剖開腹腔，制備離體回腸平滑肌條(方法同前)，置于盛有10 ml克氏液的浴槽中。充氧，負荷1 g，37℃保溫，平衡30 min，待基線穩定后加入終濃度為2 μg·ml-1的激動劑His或10 μg·ml-1的Ach，用克氏液洗3次。待回腸恢復正常狀態后，分別依次加入空白溶媒，鹽酸小檗堿不同濃度進行預處理，孵育約5 min后，加入與前等劑量的His或Ach。記錄預處理前3 min和加入激動劑后3 min的豚鼠回腸平滑肌肌條的活動曲線，并計算其平均收縮幅度和抑制率，方法同上。

1.3統計學處理

2結果

2.1對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動的影響

加入小檗堿不同劑量進行預處理，其回腸平滑肌條收縮幅度效應值均明顯低于空白對照組(P<0.01)，提示小檗堿(20~100 μg·ml-1)對卵白蛋白所致離體回腸平滑肌收縮有明顯的拮抗作用，在80 μg·ml-1濃度下即可完全抑制卵白蛋白所致的離體回腸平滑肌收縮，見表1。

表1　小檗堿對卵白蛋白致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD，n=6)

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2對組胺所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動的影響

加入不同劑量的小檗堿進行預處理，其加入激動劑磷酸組胺后的回腸平滑肌條收縮幅度均低于空白對照組(P<0.05或P<0.01)，提示鹽酸小檗堿在20~320 μg·ml-1濃度范圍內對組胺所致離體回腸平滑肌收縮有拮抗作用。但其抑制作用不強，當終濃度達到160 μg·ml-1時，其抑制率才達到60.2%，見表2。

表2　小檗堿對組胺致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD，n=10)

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.2對乙酰膽堿所致的豚鼠離體回腸平滑肌收縮活動的影響

由表3可見，加入不同劑量的鹽酸小檗堿進行預處理，在終濃度為80~320 μg·ml-1之間的劑量，對激動劑氯化乙酰膽堿所致的離體回腸平滑肌收縮有抑制作用(P<0.05或P<0.01)，但其抑制作用也不強，當終濃度達到160 μg·ml-1時，其抑制率僅41.5%。

3討論

本實驗采用的試驗模型屬于IgE介導的Ⅰ型變態反應。試驗模型采用卵白蛋白致敏豚鼠，致敏完成后處死豚鼠，并分離出已致敏的離體回腸平滑肌，當已致敏的豚鼠離體回腸在抗原卵白蛋白的攻擊下，肥大細胞脫顆粒釋放出過敏介質(主要是組胺)，使致敏的離體回腸平滑肌收縮，這稱為Schultz-Dale反應。一般而言，本研究模型通常可作為抗過敏藥物的初篩模型，但解痙藥、局麻藥及擬交感神經藥物在本模型也可以得到陽性結果，有時會干擾試驗結果的判斷。因此在設計試驗方案時，我們也同時考察了小檗堿對組胺和乙酰膽堿所致的離體回腸收縮模型的影響。從我們的試驗結果來看，20 μg·ml-1的小檗堿即可產生明顯的抑制作用(65.9%)，在80 μg·ml-1濃度下則可全部抑制卵白蛋白所致的致敏離體回腸平滑肌收縮。但是在組胺和乙酰膽堿所致的離體回腸收縮模型試驗中，小檗堿的終濃度在80 μg·ml-1濃度時抑制作用很弱(40.9%和43.1%)，終濃度需達到320 μg·ml-1時才會產生比較明顯的抑制作用(78.5%和81.5%)。試驗結果提示小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體平滑肌有明顯的解痙作用，可能具有抗Ⅰ型變態反應的藥理活性，值得進一步深入研究。

表3　小檗堿對乙酰膽堿致豚鼠離體回腸平滑肌收縮的影響±SD，n=8)

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

小檗堿在臨床上可以用于治療一些皮膚過敏性疾病[5-7]，但其機理不清。根據一些已報道的臨床前藥理研究文獻，小檗堿治療皮膚過敏性疾病的機理可能與其抗ⅳ型變態反應藥理活性相關，如有文獻報道小檗堿能抑制二硝基氟苯(DNFB)所致的遲發型變態反應(DTH){8-10}，其機制涉及到抑制IFN-γ、IL-1、TNF-α、IL-2 等細胞因子的產生和分泌[9]，降低T淋巴細胞和細胞外基質的黏附能力[10]。我們的研究結果顯示，小檗堿對卵白蛋白致敏的豚鼠離體回腸平滑肌有較好的解痙作用，提示其治療皮膚過敏性疾病的機理也可能涉及到抗Ⅰ型變態反應的藥理作用。

參考文獻

1黃才國,儲鐘祿,楊志銘. 黃連素藥理的研究進展[J]. 藥學情報通訊, 1991, 9(4): 10-12.

2譚正懷,李杭翼. 小檗堿、巴馬亭及黃連總生物堿對大鼠胃條的作用比較研究[J]. 中藥藥理與臨床, 2006, 22(3-4): 48-50.

3李樂,莊斐爾,趙東科,等. 小檗胺松弛家兔離體回腸的作用[J]. 西安醫科大學學報(中文版), 1994, 15(3): 264-266.

4徐叔云 主編. 藥理實驗方法學(第三版)[M]. 北京: 人民衛生出版社, 2005, 1411-1411.

5王淑忠,馬穎,李明麗,等. 黃連素溶液聯合丁酸氫化可的松軟膏治療嬰兒急性濕疹[J]. 中國藥師, 2013,16(11): 1721-1722.

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7楊秀芳,季姍姍,王雪燕. 黃連素濕敷治療面部濕疹皮炎156例療效觀察[J]. 中國麻風皮膚病雜志, 2007, 23(5): 456-456.

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9呂燕寧,邱全瑛. 小檗堿對小鼠DTH及其體內幾種細胞因子的影響[J]. 中國免疫學雜志, 2000, 16(3): 139-141.

10杜麗蕊,何賢輝,徐麗慧,等. 小檗堿對DNFB誘導的小鼠遲發型超敏反應的影響[J]. 細胞與分子免疫學雜志, 2005, 21(4): 418-421.

Effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig*

Qiu Yi

(LuZhou TCM Hospital of Sichuan Province, Sichuan Luzhou 646000)

AbstractObjective：To study the effects of berberine on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig. Methods: The effects of berberine (20~100 μg·ml-1) on the contraction of ovalabumin sensitized ileum smooth muscle strips were observed by ex vivo evaluation methods, and the effects of berberine (20~320 μg·ml-1) on the contraction of ileum smooth muscle strips induced by His/Ach were also observed. Results: Berberine (20~100 μg·ml-1) could significantly inhibited the contractility of sensitized ileum smooth muscle, and partly inhibited the contraction induced by His/Ach. Conclusion: Berberine has significant antispasmodic activity on ovalbumin sensitized ileum smooth muscle strips of guinea pig.

Key Words:Berberine; Isolated ileum smooth muscle strips

(收稿日期：2015-12-14)

作者簡介：仇燚，男，副主任醫師，主要從事中西醫結合內科臨床工作，Email：qiuyihaoren@163.com。

*基金項目：瀘州市衛生科技項目(編號：2005-05)