Tp7/Treg相關細胞因子在腸白塞病發病機制中的作用

羅　丹　申　艷　鄒　峻　管劍龍

(復旦大學附屬華東醫院免疫風濕科　上海　200040)

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Tp7/Treg相關細胞因子在腸白塞病發病機制中的作用

羅丹申艷鄒峻管劍龍△

(復旦大學附屬華東醫院免疫風濕科上海200040)

【摘要】目的通過檢測血清Tp7/Treg相關細胞因子水平,探討Tp7/Treg在腸白塞病(Behcet′s disease,BD)發病機制中的作用。方法參照1987年日本學者制定的BD診斷標準和2009年韓國學者提出的腸BD診斷標準,共入選腸BD 32例,同時選擇21例性別、年齡匹配的健康志愿者作為對照。疾病活動度采用2011年韓國學者制定的腸BD活動性評分系統(DAIBD)。采用ELISA法檢測血清IL-17、IL-23、IL-35和IL-10。應用SPSS 17.0軟件統計分析。結果與健康人比較,腸BD組Tp7細胞相關的IL-17[(581.77±260.37)pg/mL vs.(172.72±33.44)pg/mL,P=0.000]和IL-23[(588.31±192.14)pg/mL vs. (340.84±112.26)pg/mL,P=0.000]水平升高,Treg細胞相關的IL-35[(875.86±436.12)pg/mL vs.(183.19±60.84)pg/mL,P=0.000]和IL-10[(463.85±299.96)pg/mL vs.(84.47±51.06)pg/mL,P=0.000]水平升高。IL-17和IL-23水平與患者外周血白細胞計數及DAIBD評分呈正相關。結論Tp7/Treg細胞可能在腸BD的發生和發展過程中發揮一定作用。

【關鍵詞】腸白塞病；臨床特征；Th7/Treg細胞；細胞因子

*This work was supported by Shanghai Municipality Health System Key Joint Research Project on Important Diseases of the Second Batch (2014ZYJB0010).

白塞病(Behcet′s disease,BD)又稱絲綢之路病,以復發性口腔潰瘍、生殖器潰瘍和皮膚紅斑為常見癥狀,可累及眼睛、胃腸道、中樞神經、心臟、全身大小血管、關節和血液等多個系統。腸BD是比較常見的一種重癥類型[1-2],臨床表現多種多樣,且缺乏特異的實驗室指標,致病機制至今未明。既往研究發現,腸BD常發生在東亞人群,歐美罕見[2-3],以回盲部單發、直徑>1 cm的類圓形潰瘍為主,也可同時累及結腸或十二指腸[4-5]。腸BD早期可出現輕微腹部癥狀,腹痛、腹瀉常見,也可無先兆癥狀,突發腸出血、腸穿孔或類似闌尾炎急腹癥。本研究總結腸BD患者臨床資料、檢測血清中Tp7/Treg相關細胞因子表達水平的變化,同時分析Tp7/Treg相關細胞因子與疾病活動度和實驗室指標的相關性,初探Tp7/Treg細胞在腸BD發病機制中的作用。

資 料 和 方 法

病例來源收集復旦大學附屬華東醫院免疫風濕科2012年10月至2014年12月住院的430例典型BD患者臨床資料、血清標本,從中選擇腸BD 32例,另設健康志愿者21人作為對照,性別與年齡相匹配。本研究得到復旦大學附屬華東醫院倫理委員會批準,入選者均簽署知情同意書。

診斷標準BD診斷參照1987年日本學者制定的BD診斷標準[6]。腸BD病例均行消化道內窺鏡檢查,診斷參照Cheon等[7]于2009年提出的標準,回腸末端有典型的橢圓形大潰瘍或在小腸或結直腸有潰瘍或炎癥,且臨床表現達到BD診斷標準。疾病活動度評分標準采用2011年Cheon等[8]提出的腸BD活動性評分系統(disease activity index for intestinal BD,DAIBD),評價標準包括患者一般狀況、發熱、腸外癥狀(包括口腔潰瘍、生殖器潰瘍、眼炎、皮膚受損和關節炎)、腹痛、腹部包塊、腹部柔韌度、消化系統并發癥(包括瘺、穿孔、膿腫和梗阻)和稀便次數。

排除標準排除系統性紅斑狼瘡、其他系統性血管炎等結締組織病和以其他內臟損害為主要表現的BD亞型患者。同時排除克羅恩病、潰瘍性結腸炎、腸結核、應激性潰瘍、藥源性潰瘍(糖皮質激素或非甾體類抗炎藥)和淋巴瘤等其他疾病。

血清收集與細胞因子檢測本研究收集腸BD臨床資料的同時留取血清2 mL,分裝于凍存管,-80 ℃保存備用。IL-17、IL-23、IL-35和IL-10的檢測采用酶聯免疫吸附法(ELISA),試劑盒均購自Bio-Swamp公司,嚴格按照說明書流程操作。

結果

臨床資料本研究共納入腸BD32例,男性17例,女性15例,平均年齡(33.8±13.7)歲,平均病程(7.1±6.1)年,32例腸BD均有回盲部潰瘍,其中回盲部單發潰瘍16例(11例直徑大于1cm),回盲部多發潰瘍7例,回盲部伴橫結腸潰瘍6例,回盲部伴全結腸潰瘍3例(圖1～2)。多數腸BD患者消化道癥狀輕微,可表現為右下腹麥氏點壓痛,少數患者有腹瀉或者糞便常規潛血陽性,2例以腸穿孔、腸出血為首發癥狀。

32例腸BD患者中,口腔潰瘍32例(100.0%),生殖器潰瘍26例(81.3%),食管潰瘍1例(3.1%),胃十二指腸潰瘍2例(6.3%),結節性紅斑7例(21.88%),多形性紅斑1例(3.13%),假性毛囊炎9例(28.13%),針刺反應陽性4例(12.5%),神經系統受累2例(6.3%),關節炎/關節痛10例(31.3%),靜脈血栓1例(3.1%)。所有納入腸BD患者均無葡萄膜炎、視網膜炎,無動脈狹窄、動脈瘤及心臟瓣膜累及。

實驗室檢查示(表1)：腸BD組與健康對照組在性別、年齡上的差異均無統計學意義(P>0.05)。兩組間外周血WBC、Hb、ESR 和CRP的差異均有統計學意義(P<0.05),而PLT、免疫球蛋白和補體C3的差異均無統計學意義(P>0.05)。

Tp7/Treg相關細胞因子檢測與健康人比較,腸BD組患者IL-17、IL-23、IL-35和IL-10表達均顯著升高(P<0.001,表2)。

相關性分析將患者外周血WBC、Hb、PLT、ESR和CRP水平以及DAIBD評分與IL-17、IL-23、IL-35和IL-10水平進行相關性分析(表3)。

表1　腸BD組與健康對照組一般資料和實驗室指標比較Tab 1　Demographic features and laboratory findings in±s)

表2　腸BD和健康對照Tp7/Treg相關細胞因子比較

表3　Tp7/Treg相關細胞因子與化驗指標和DAIBD評分相關性分析

(1)Pearson′s correlation analysis.

討論

腸BD是以消化道損害為主要表現的BD臨床亞型,常發生回盲部潰瘍,嚴重患者可出現橫結腸潰瘍甚至全結腸的潰瘍[4]。少數患者以腸穿孔為首發癥狀,手術治療后刀口長期不愈合甚至形成吻合口瘺。但腸BD早期臨床表現不典型,容易與炎癥性腸病等混淆。目前有關腸BD的研究較少,日本曾報告BD患者腸道累及可達50%[9-10]。BD發病可能與HLA-B51、感染及環境因素相關[11],但具體機制尚待進一步研究。

Tp7/Treg細胞在多種自身免疫病中發揮調節作用[12-13],但在BD患者中研究較少[14]。Tp7細胞產生的IL-17可以使中性粒細胞聚集,導致炎性反應和組織損傷。IL-23則在Tp7細胞的穩定和增殖過程中發揮著重要作用[15]。Treg細胞具有免疫負向調節作用,Treg細胞分泌的IL-35、IL-10和TGF-β等可抑制其他T細胞活性,介導免疫耐受和免疫自穩。Geri等[16]研究發現,BD患者Tp7細胞明顯增加,而不是既往認為的Tp細胞,提示Tp7/Treg細胞失衡在BD發病過程中可能發揮作用。有研究顯示,環孢素主要通過抑制IL-17表達來治療BD,臨床佐證了IL-17在BD發病過程中的作用[17-18]。Ferrante等[19]發現,腸BD患者的腸潰瘍部位Tp7/Tp細胞比例降低,推測Tp和Tp7細胞可能與腸BD有關。本研究發現,腸BD患者血清IL-17和IL-23水平均高于健康人,腸BD患者IL-17、IL-23水平與外周血WBC、DAIBD評分呈正相關,提示腸BD患者Tp7細胞顯著活躍,處于炎性反應激活狀態。目前生物制劑(如TNF-α拮抗劑Infliximab)已用于腸BD的治療,并體現出一定的臨床價值[20]。Secukinumab是IL-17的單克隆抗體,可選擇性地結合IL-17A,近期研究提示其可用于治療強直性脊柱炎[21]和中、重度銀屑病[22]。IL-23拮抗劑Guselkumab可抑制Tp7細胞活性,有效控制銀屑病皮損癥狀[23]。因此,Secukinumab和Guselkumab用于腸BD具有治療前景,有必要進行下一步臨床驗證。

本研究顯示,與健康人比較,腸BD患者血清Treg相關細胞因子IL-10和IL-35過表達,與既往報道不一致[16],推測可能與該組腸BD病例腸潰瘍均處于活動期,Tp7細胞介導的炎性反應劇烈,促使Treg細胞激活,IL-10、IL-35分泌增加，參與免疫炎癥負反饋調節有關。本研究結果初步提示,Tp7/Treg相關細胞因子在BD腸道損害過程中可能發揮一定作用,具體機制尚有待進一步研究。

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The role of Tp7/Treg in the pathogenesis in patients with intestinal Behcet′s disease

LUO Dan, SHEN Yan, ZOU Jun, GUAN Jian-long△

(DepartmentofImmunologyandRheumatology,HuadongHospital,FudanUniversity,Shanghai200040,China)

【Abstract】ObjectiveTo discuss the role of Tp7/Treg in the pathogenesis of intestinal Behcet′s disease (BD) by detecting the expressions of serum Tp7/Treg related cytokines.MethodsAccording to the diagnostic criteria of BD developed by Japaness scholars in 1987 and the diagnostic criteria of intestinal BD developed by korean scholars in 2009,32 patients with intestinal BD were recruited,and 21 healthy volunteers were selected as control.Disease activity was evaluated by DAIBD developed by Korean scholars.Serum IL-17,IL-23,IL-35 and IL-10 were detected using ELISA.SPSS 17.0 software was used to analyze the data.ResultsCompared to healthy control,serum levels of IL-17 [(581.77±260.37) pg/mL vs.(172.72±33.44) pg/mL,P=0.000] and IL-23 [(588.31±192.14) pg/mL vs.(340.84±112.26) pg/mL,P=0.000] were increased in intestinal BD group; Treg related cytokines IL-35 [(875.86±436.12) pg/mL vs.(183.19±60.84) pg/mL,P=0.000] and

IL-10[(463.85±299.96) pg/mLvs.(84.47±51.06) pg/mL,P=0.000] were also overexpressed.The levels of IL-17 and IL-23 were positively correlated with the white blood cell count and DAIBD score.ConclusionsTp7/Treg cells may play a role in the pathogenesis of intestinal BD patients.

【Key words】intestinal BD;clinical characteristics;Tp7/Treg cell;cytokines

(收稿日期:2015-08-14;編輯:段佳)

【中圖分類號】R597+.9

【文獻標識碼】A

doi:10.3969/j.issn.1672-8467.2016.02.005

上海市衛生系統第二批重要疾病聯合攻關重點項目(2014ZYJB0010)

△Corresponding authorE-mail:guanjianlong@medmail.com.cn