IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究(二)

于　翔，陳文霏，余小六，江　明，李　可，余枝廣

(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司免疫試劑開發部，廣東深圳 518057)

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IFCC促甲狀腺激素國際溯源和檢測一致性系列研究(二)

于翔，陳文霏#，余小六，江明，李可，余枝廣△

(深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司免疫試劑開發部，廣東深圳 518057)

摘要:目的通過參與國際臨床化學聯合會(IFCC)甲狀腺功能檢測標準化委員會(C-STFT)一致性研究方案，初步實現邁瑞檢測系統促甲狀腺激素(TSH)檢測結果的一致性。方法使用不同批次試劑和校準品搭配構成的3種組合，分別檢測發放的20例健康者標本，評估檢測結果的批內不精密度和批間差異。與C-STFT提供的所有測量程序修剪均值(APTM)比對，評估一致性，并修正校準曲線進行重校準。結果檢測結果的批內不精密度為1.95%，批間差異范圍為0.47%～1.15%；與APTM存在正偏差，修正校準曲線重校準后，檢測結果Passing & Bablok回歸線斜率為1.0，相關系數大于0.975。結論通過檢測IFCC統一發放的血清盤和參考提供的APTM值，修正校準曲線重校準，實現了該檢測系統與其他廠家檢測系統TSH檢測結果的一致性。

關鍵詞:促甲狀腺激素；化學發光免疫分析法；國際臨床化學聯合會甲狀腺功能檢測標準化委員會；測量程序修剪均值

促甲狀腺激素(TSH)檢測具有世界衛生組織國際標準品(NIBSC 81/565)，但由于存在基質效應、分析物差異性等問題，不能保證可溯源至標準品的所有檢測系統對實際標本檢測結果的一致性[1]。自2010年開始，國際臨床化學聯合會(IFCC)甲狀腺功能檢測標準化委員會(C-STFT)嘗試推出特定的血清盤及所有測量程序修剪均值(APTM)的概念，在全球范圍征集了具有代表性的十余個廠家檢測系統，包括羅氏、雅培、貝克曼、西門子、邁瑞等，分階段進行TSH檢測結果一致性的可行性研究[2-3]。邁瑞公司采用CL2000i免疫檢測系統和配套TSH試劑盒，檢測了C-STFT提供的首期20份血清標本。C-STFT結合所有參與廠家的檢測結果，對CL2000i系統TSH檢測結果的可靠性和一致性進行了客觀評估。邁瑞公司則結合C-STFT反饋結果，根據20份標本的APTM數值修正校準曲線，并對檢測系統進行了重校準，初步實現了與國際主流廠家TSH檢測結果的一致性。

1材料與方法

1.1標本來源IFCC第1期20例標本來自Solomon Park Research Laboratories收集的自愿獻血者，均為表觀健康者，涵蓋有代表性的年齡段。嚴格按照美國臨床和實驗室標準化協會(CLSI)C37-A程序文件的要求采集血液標本，未進行抗甲狀腺球蛋白抗體(Anti-Tg)和抗甲狀腺過氧化物酶抗體(Anti-TPO)檢測。標本長期凍存，運送過程中溫度控制在-20 ℃以下。血清標本TSH濃度根據已完成一致性研究的數個國際性生產廠家分析系統的檢測結果確定[4]。C-STFT通過因子分析(FA)模型對廠家檢測結果進行統計處理，剔除明顯離群值，以模擬數值代替，最終獲得各標本的APTM，見表1[5-6]。

1.2方法采用邁瑞公司CL2000i全自動化學發光免疫檢測系統及配套TSH試劑盒、校準品和甲狀腺功能復合質控品進行C-STFT標本檢測。

1.2.1儀器維護與基礎性能測試按維護規程對CL2000i檢測系統進行維護，并作基礎性能測試，確保所有基礎性能滿足要求。

1.2.2校準與質控儀器裝載試劑盒，使用匹配的校準品校準后，檢測甲狀腺功能復合定值質控品，確定質控品檢測結果在(靶值±2s)范圍內后檢測C-STFT標本。根據實驗室內長期質控結果，質控靶值與范圍見表2。

表1　　C-STFT標本APTM(mIU/L)

表2　　TSH質控品靶值和允許偏差(mIU/L)

1.2.3試劑性能評估為滿足一致性研究的要求，對CL2000i檢測系統TSH試劑盒進行全面的基本性能研究，包括最低檢測限、功能靈敏度、線性范圍、分析特異性、抗內源性干擾、不精密度及校準一致性等，要求各性能指標符合文獻[7]的要求。

1.2.4C-STFT標本檢測采用2批試劑和2批校準品隨機搭配成3種組合(見表3)進行第1批IFCC標本檢測。每批標本檢測開始前和結束后檢測質控品。每批檢測將C-STFT標本按編號順序檢測1次，再逆序檢測1次。

表3　　TSH檢測試劑和校準品批號組合

表4　　標本檢測前、后質控品檢測結果(mIU/L)

2結果

3種組合在C-STFT標本檢測前、后的質控品檢測結果均在(靶值±2s)范圍內，系統均在控(見表4)。試劑各性能指標均符合要求。方差成分分析結果顯示，20個C-STFT標本檢測結果批內不精密度為1.95%。采用Passing & Bablok回歸分析進行方法學比對，結果顯示，采用3種試劑與校準品組合進行C-STFT標本檢測，結果間的總偏差范圍為0.47%～1.15%，見圖1。試劑與校準品3種組合的正向和反向檢測結果的偏差分析見圖2，偏差在±10%范圍內，測試結果穩定，無明顯的漂移。3批檢測結果均值與APTM存在一定的正偏差。根據APTM反向擬合，修正校準曲線，重新校準檢測系統，可使檢測結果與APTM具有一致性。重校準后的均值偏差分布見圖3。對重校準后的檢測結果進行殘差分析，僅有1份標本超出+1.96s上限。殘差分布分析見圖4。重校準后的檢測結果相對APTM的平均偏差為2.09%，相關系數大于0.975，Passing & Bablok回歸線斜率約為1.0，見圖5。

圖1　　3種試劑與校準品組合檢測結果比較

圖2　　穩定性與漂移分析

圖3　　重校準后標本檢測結果均值與APTM的偏差

圖4　　殘差分布

圖5　　Passing & Bablok回歸線

3討論

IFCC下屬機構C-STFT希望通過頒布統一的血清盤，采用APTM作為血清盤標定值，同時執行分階段遞進的實驗方案，實現TSH檢測結果的一致性。邁瑞公司參與C-STFT一致性研究計劃的流程包括3個階段。第一階段：測試C-STFT第一部分血清盤(健康者標本)，上報檢測結果后，C-STFT結合參與研究的各廠家系統檢測結果，對檢測結果可靠性和一致性進行評估。第二階段：結合第一部分血清盤檢測結果，修正主校準曲線，檢測C-STFT第二部分血清盤(全范圍標本)，上報檢測結果后，C-STFT結合參與研究的各廠家系統檢測結果，對系統修正后的檢測結果一致性進行再評估。第三階段：在第一階段和第二階段檢測結果通過的情況下，檢測第三部分血清盤(患者標本)，C-STFT結合參與研究的各廠家系統檢測結果，評估TSH測試結果一致性程度，證實概念的可行性。第四階段，檢測C-STFT在北美收集的120例表觀正常者標本，對參考范圍進行研究。C-STFT如果對各廠家參考范圍比對結果滿意，有望在2018年實現全球范圍TSH檢測系統一致性。大分子蛋白質結構的復雜性使檢測結果很難實現標準化，而由于生產廠家普遍采用的國際標準品或企業內部標準品往往存在基質效應、分析物差異等問題，使得檢測結果的一致性很難達到預期水平。C-STFT推出包含健康者標本和病理標本的全范圍真實臨床血清盤[8]，作為溯源鏈中的一個等級，解決了標準品的“人造性”；同時采用APTM作為血清盤的定值，既建立了統一的溯源標準，又直接保證了各生產廠家檢測系統對臨床標本檢測結果的可比性。分階段遞進實驗方案(Step-Up approach)的貫徹，進一步加強了一致性結果的可靠性[2]。當然，檢測結果標準化/一致性實驗計劃的成功執行，離不開權威機構，如IFCC的支持和推進，也離不開各主要生產廠家的支持與合作。這些都是可供國內相關機構和體外診斷系統生產廠家借鑒的寶貴經驗。

目前，邁瑞公司檢測系統已順利通過IFCC首期標本檢測結果一致性要求，為進入下一步C-STFT全范圍臨床標本檢測奠定了基礎。

參考文獻

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[8]Van Houcke SK，Thienpont LM．“Good samples make good assays”-the problem of sourcing clinical samples for a standardization project[J]．Clin Chem Lab Med，2013，51(5)：967-972．

Serial research of traceability and harmonization of thyroid-stimulating hormone detection approved by IFCC

YuXiang,ChenWenfei#,YuXiaoliu,JiangMing,LiKe,YuZhiguang△

(ShenzhenMindrayBio-MedicalElectronicsCO.,LTD,Shenzhen,Guangdong518057,China)

Abstract:ObjectiveTo implement the harmonization of thyroid-stimulating hormone(TSH) of Mindray assay system by participating in harmonization research program of International Federation of Clinical Chemistry(IFCC)-Standardization of Thyroid Function Tests(C-STFT).MethodsA total of three combinations of TSH reagents and calibrators were used to measure 20 serum samples of healthy human.Within-run precision and batch-to-batch variation were assessed.The concept of harmonization was demonstrated by comparing our test results with All Procedure Trimmed Mean(APTM) provided by IFCC and recalibrating with Mater Calibrators.ResultsThe within-run precision was 1.96%,batch-to-batch variation was 0.47%-1.15%,depending on the level of TSH analyte.There existed a positive bias compared to APTM values.After recalibration with Mater Calibrators and Passing & Bablok regression,the slope of method comparison was 1.0,and correlation coefficient was more than 0.975.ConclusionBy using a panel of real human specimen and recalibration based on APTM,the test results of Mindray assay system could be harmonized with mainstream manufacturers globally.

Key words:thyroid-stimulating hormone;chemiluminescent immunoassay;international federation of clinical chemistry-committee of standardization of thyroid functional tests;all procedure trimed mean

(收稿日期：2015-12-16)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.06.013

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)06-0751-03

#共同第一作者。

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