稻黑孢菌生物學特性及殺菌劑篩選

李戌清，傅鴻妃，李紅斌（杭州市農業科學研究院，310024）

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稻黑孢菌生物學特性及殺菌劑篩選

李戌清，傅鴻妃，李紅斌
（杭州市農業科學研究院，310024）

摘要：研究了稻黑孢菌的生物學特性，并對防治藥劑進行了室內篩選。試驗結果表明，菌株HZ4111菌絲生長的最適條件為溫度30℃、12 h光12 h暗的交替光周期、培養基pH值5.0曰在以可溶性淀粉和酵母膏培養基上菌絲生長較快淵日平均生長速率分別為9.63、14.25 mm/d冤，以山梨醇、乙醇和甘氨酸培養基上較慢淵分別為0、0、0.42 mm/d冤曰9種殺菌劑對菌株HZ4111菌絲生長均有較好的抑制作用，其中75%肟菌窯戊唑醇水分散粒劑、325 g/L苯甲窯嘧菌酯懸浮劑、250 g/L嘧菌酯懸浮劑效果最好，(50)分別為0.000 1、0.000 9、0.000 9 μg/mL曰70%丙森鋅可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑、12.5%四氟醚唑水乳劑、325 g/L苯甲窯嘧菌酯懸浮劑、75%肟菌窯戊唑醇水分散粒劑對病菌孢子萌發有較好的抑制作用，MIC值均小于0.05 μg/mL。

關鍵詞：稻黑孢菌曰生物學特性曰藥劑篩選

李戌清（1982-），女，博士，高級農藝師，主要從事植物病害研究工作，E-mail：xq_li@126.com

本研究對采自浙江省杭州地區稻葉的稻黑孢菌進行了生物學特性測定和常用殺菌劑室內毒力測定，旨在尋找通過環境條件控制病害發生的途徑，并篩選防治該病害的高效藥劑，進而為稻黑孢菌的防治提供理論依據。

1　材料與方法

1

.1試驗材料

①供試菌株稻黑孢菌HZ4111采自浙江省杭州地區的稻葉，常規分離、純化后置于PDA培養斜面，4℃保存于實驗室備用[21]。

②供試藥劑供試藥劑相關信息見表1。

表1　供試藥劑種類

1.2稻黑孢菌生物學特性觀察

①溫度、光照和pH值對菌株菌絲生長的影響從預培養1～2 d的病原菌菌落邊緣取直徑為14 mm的菌絲塊接種到PDA平板中央，分別置于20、25、28、30、35℃5個不同溫度梯度下培養，每處理4次重復，培養至3 d后使用直尺“十”字交叉法測量菌落生長直徑，并計算菌絲日平均生長速率。接種菌絲塊至PDA平板中央，30℃下分別置于24 h光、12 h光12 h暗、24 h暗下培養，每處理4次重復，菌落直徑的測量和生長速率的計算方法同上。用0.1 mol/L HCl或NaOH將PDA培養基的pH值分別調至4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0[22]，接種菌絲塊，30℃培養，每處理4次重復，菌落直徑的測量和生長速率的計算方法同上。

②不同碳、氮源對菌株菌絲生長的影響以查氏培養基（KNO32.00 g，K2HPO41.00 g，KCl 0.50 g，MgSO4·7H2O 0.50 g，FeSO40.01 g，蔗糖30.00 g，加水定容至1 000 mL）為基礎培養基。以KNO3為氮源，以半乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、果糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇、乙醇、蔗糖等量替換基礎培養基中的蔗糖，測定各碳源對菌株生長的影響，以無碳源查氏培養基為對照，每處理4次重復，30℃培養3 d后使用直尺“十”字交叉法測量菌落生長直徑，并計算菌絲日平均生長速率。以蔗糖為碳源，以甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、酵母膏、硫酸銨、牛肉浸膏、胰蛋白胨、氯化銨、硝酸鉀等量替換基礎培養基中的KNO3，測定各氮源對菌株生長的影響，以無氮源查氏培養基為對照，每處理4次重復，30℃培養，菌落直徑的測量和生長速率的計算方法同上。

③菌株菌絲生長對9種殺菌劑的敏感性測定采用菌絲生長速率法測定9種殺菌劑對菌株生長的抑制作用。用雙蒸水將上述9種供試藥劑配成0.1 g/mL母液，取適量母液與溫度約60℃的PDA培養基混勻，制成藥劑濃度分別為0（對照）、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、5.00 μg/mL的含藥平板。從預培養1～2 d的病原菌菌落邊緣取直徑14 mm的菌絲塊，接種到各含藥平板上，每皿一塊，置于30℃恒溫箱內培養3 d，直尺“十”字交叉法測量菌落直徑，每處理3次重復。計算各藥劑濃度對菌絲生長的相對抑制率（%），其中相對抑菌率（%）=（1-處理菌落直徑/對照菌落直徑）×100%。

④菌株孢子萌發對9種殺菌劑的敏感性測定分別將1 mL含有0、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、5.00 μg/mL藥劑的PDA培養基加入到48孔細胞培養板上，每列為同一濃度。待凝固后，取1 μL濃度為105個/mL的孢子懸浮液分別滴在含系列濃度藥劑的細胞培養板排孔中，置于30℃恒溫箱內培養3 d，肉眼觀察孢子萌發生長情況，以明確各藥劑的最小抑菌濃度（MIC）。每處理3次重復。

1.3數據統計與分析

所得數據經DPS統計軟件進行處理分析，并求出毒力回歸方程、及相關系數。

2　結果與分析

2.1溫度、光照和pH值對菌株菌絲生長的影響

稻黑孢菌菌株HZ4111菌絲在20～35℃均能生長，但在30℃下菌絲生長速率顯著高于其他供試溫度，其平均生長速率為13.96 mm/d，35℃下生長最慢，為0.42 mm/d，表明高溫對病原菌菌絲生長有較強的抑制作用（圖1）。不同光照條件下菌落生長速率差異顯著，在12 h光12 h暗的光暗交替條件下生長最快，其平均生長速率為21.04 mm/d，在24 h光條件下生長最慢，為11.25 mm/d（圖2）。在pH值4.0～9.0范圍內菌絲均能生長，其中pH值為5.0時菌落生長速率最快，其平均生長速率為15.54 mm/d，顯著高于其他供試pH值；在供試pH值范圍內，菌落生長速率隨pH值的升高先升后降，且pH值為9.0時下降顯著，表明該病菌對堿性環境條件敏感（圖3）。

圖1　溫度對菌株HZ4111菌落生長的影響

圖2　光照條件對菌株HZ4111菌落生長的影響

2.2不同碳、氮源對菌株菌絲生長的影響

菌株HZ4111能利用多種碳、氮源營養，但不同氮源、碳源菌株菌絲生長存在一定差異。以可溶性淀粉為碳源的培養基上菌落生長最好，平均生長速率為9.63 mm/d，顯著優于葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、果糖、甘露醇、半乳糖、無碳源（CK）、山梨醇、乙醇，其中以山梨醇和乙醇為碳源的培養基上菌絲不能生長（圖4）。不同氮源對菌絲生長的影響差異顯著，以酵母膏培養基上菌落生長最好，線性生長率為14.25 mm/d，顯著優于胰蛋白胨、氯化銨、牛肉浸膏、硫酸銨、無氮源（CK）、硝酸鉀、谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸，其中甘氨酸最差，生長速率0.42 mm/d（圖5）。

圖3　pH值對菌株HZ4111菌落生長的影響

圖4　不同碳源對菌株HZ4111菌落生長的影響

圖5　不同氮源對菌株HZ4111菌落生長的影響

2.3菌株菌絲生長對9種殺菌劑的敏感性測定

由表2可知，9種殺菌劑對菌株HZ4111菌絲生長具有不同程度的抑制作用。其中肟菌·戊唑醇、苯甲·嘧菌酯、嘧菌酯效果最好，分別為0.000 1、0.000 9、0.000 9 μg/mL；其次是氰霜唑、四氟醚唑、噻呋·己唑醇、丙森鋅，分別為0.0131、0.020 3、0.020 3、0.068 4 μg/mL；代森鋅、百菌清效果最差，分別為0.109 3、0.421 3 μg/mL。

2.4菌株孢子萌發對9種殺菌劑的敏感性測定

經觀察可知，氰霜唑的MIC值大于5 μg/mL；嘧菌酯的MIC值為1～5 μg/mL；代森鋅、噻呋·已唑醇對菌株HZ4111的MIC值為0.5～ 1 μg/mL；丙森鋅、百菌清、四氟醚唑、苯甲·嘧菌酯、肟菌·戊唑醇的MIC值小于0.05 μg/mL。即丙森鋅、百菌清、四氟醚唑、苯甲·嘧菌酯、肟菌·戊唑醇對病菌孢子萌發有較好抑制作用，代森鋅、噻呋·己唑醇抑制效果一般，嘧菌酯、氰霜唑較差。

表2　9種殺菌劑對稻黑孢菌菌株HZ4111菌絲生長的毒力

3　結論與討論

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Biological Characteristics and Fungicides Screening of

LI Xuqing, FU Hongfei, LI Hongbin

Abstract:We studied the biological characteristics ofand conducted the fungicides screening test in lab. The results showed that, the optimum condition for mycelia growth of HZ4111 was 30℃, 12 h light/12 h dark alternate illumination with pH value of 5.0. Mycelia grew faster on soluble starch medium and yeast extract medium, with average growth rates of 9.63 and 14.25 mm/d respectively, while mycelia grew slower on sorbitol medium, ethanol medium and glycine medium, with average growth rates of 0, 0 and 0.42 mm/d respectively. The nine fungicides had better effect on inhibiting mycelial growth of HZ4111, among them, 75% trifloxystrobin+tebuconazole water dispersible granule (WDG), 325 g/L difenoconazole+azoxystrobin suspension concentrate (SC) and 250 g/L azoxystrobin SC were the most effective inhibitors, with EC50 value of 0.000 1, 0.000 9 and 0.000 9 μg/mL respectively. 70% propineb wettable powder (WP), 75% chlorothalonil WP, 12.5% tetraconazole emulsion in water (EW), 325 g/L difenoconazole+azoxystrobin SC and 75% trifloxystrobin+tebuconazole WDG had better effects on inhibiting spore germination of HZ4111, with MIC value less than 0.05 μg/mL.

Key words:Biological characteristics; Fungicides screening

收稿日期：2015-12-11

基金項目：杭州市科委資助項目（20140432B10）

DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2016.06.030

中圖分類號：S432.44

文獻標識碼：A

文章編號：1001-3547（2016）06-0080-05