不同激素配比對兩個藍莓品種組織培養的影響

陳原國，馬鵬，王語，高月

(棗莊學院生命科學學院，山東棗莊　277100)

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不同激素配比對兩個藍莓品種組織培養的影響

陳原國，馬鵬，王語，高月

(棗莊學院生命科學學院，山東棗莊277100)

[摘要]以兩個藍莓品種的莖段外植體為材料，探索不同的激素配比對粉藍和奧尼爾外植體伸長以及繼代培養的影響.結果顯示：粉藍外植體在WPM+IBA0.75mg/L+6-BA3.00 mg/L +ZT2.00 mg/L條件下生長較好；粉藍繼代培養在WPM+IBA1.50 mg/L +6-BA0.50 mg/L +ZT3.00 mg/L條件下可形成較多叢生芽；粉藍生根培養在WPM+IBA1.00 mg/L條件下生根率高，生根質量好.奧尼爾外植體在WPM+IBA1.00 mg/L +ZT2.00 mg/L 條件下誘導出芽率較高；奧尼爾繼代培養在IBA1.50 mg/L +ZT2.00 mg/L條件下生長較好，可形成較多愈傷組織，奧尼爾生根培養在WPM+IBA1.50 mg/L條件下生根率高，生根質量好.

[關鍵詞]藍莓；組織培養；激素配比

0引言

藍莓(Vaccinium spp.)又名越橘，屬于杜鵑花科(Ericaceae)越桔屬(Vaccinium)原產北美，多年生落葉或常綠果樹，分為高叢藍莓、矮叢藍莓、半高叢藍莓和兔眼藍莓.果實深藍色，甜酸適度，富含氨基酸，抗氧化能力列所有果品之首，堪稱“世界水果之王”被國際糧農組織列為五大健康食品之一[1].

近年來，人們對于藍莓的需求量增大，常規繁殖方法用播種、嫁接和扦插法，但播種繁殖發芽率低和嫁接繁殖成活率低，扦插繁殖的繁殖系數小，周期長，均難以滿足市場對種苗的需求[2].探討優良的藍莓快速繁殖方式成為了必要.組織培養作為一個高效藍莓繁殖方式得到了人們的重視，而不同品種藍莓的組織培養條件差別較大，目前對于優良藍莓品種粉藍和奧尼爾的組培方法仍沒有得到有效解決.為此，本文開展對藍莓組織培養的初步試驗研究.

1材料與方法

1.1材料來源

選取3～4年生藍莓的半木質化嫩莖作為試驗材料，由棗莊市薛城區沙溝鎮界溝藍莓種植合作社提供粉藍藍莓和杭州佑國生物科技有限公司提供奧尼爾藍莓.

1.2外植體處理

將取自上述兩個藍莓品種材料的幼嫩莖段，用0.5%洗衣粉溶液清洗兩次后，流水沖洗6～8次，除去泡沫，再流水沖洗30分鐘后放入100mL的燒杯中，然后置超凈工作臺進行外植體表面消毒.75%酒精滅菌15～30秒后0.1%升汞溶液浸泡7～8分鐘最后用無菌水沖洗4～6次(每次一分鐘左右)，最后剪成1.5cm長帶腋芽的莖段[3].

1.3誘導分化培養

粉藍外植體誘導培養基采用1/2MS、MS和WPM為基本培養基，添加IBA(0.75 mg/L和1.50 mg/L)、6-BA(1.00 mg/L和3.00 mg/L)和2.00 mg/L ZT.奧尼爾外植體誘導培養基采用WPM為基本培養基，添加IBA(0.50 mg/L、1.00 mg/L和1.50 mg/L、2.00 mg/L)和2.00 mg/L ZT.蔗糖2%，瓊脂0.7%，pH 5.8，在115MPa氣壓下滅菌20min.

1.4繼代增殖培養

粉藍繼代培養基采用WPM為基本培養基，添加IBA(1.50mg/L、2.50 mg/L和3.50 mg/L)、6-BA(0.50 mg/L、1.00mg/L和1.50 mg/L)和ZT(1.00mg/L、2.00 mg/L和3.00 mg/L).奧尼爾繼代培養基采用WPM為基本培養基，添加IBA(0.05mg/L、0.10mg/L、0.20 mg/L和0.50mg/L)和2.00 mg/L ZT.

1.5培養條件

培養溫度23～25℃，光強2000lx，每天光照16h[4].

2結果與分析

2.1誘導分化培養

2.1.1不同激素配比對粉藍藍莓外植體生長的影響

由表1可得出，對于粉藍藍莓外植體的培養，在IBA 0.75mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L條件下可得到較理想的效果，莖呈綠色且粗壯，葉色為正常的淡綠色.該激素配比較其他配比更適宜粉藍藍莓外植體的誘導培養.(見圖1)

圖1　IBA 0.75mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L藍莓誘導培養

處理條件平均長度(cm)莖質量11.84淡綠色,較粗壯22.30綠色,粗壯31.83綠色,較細42.15淡綠色,粗壯

注：1.IBA 0.75mg/L+6-BA 1.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

2.IBA 0.75mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

3.IBA 1.50mg/L+6-BA 1.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

4.IBA 1.50mg/L+6-BA 3.00mg/L+ZT 2.00mg/L.

2.1.3 不同激素配比對奧尼爾藍莓外植體生長的影響

由圖2可以得出，在奧尼爾藍莓外植體的培養中激素配比IBA1.50 mg/L +ZT2.00 mg/L顯著優于其他配比的激素.培養30天后誘導的腋芽莖桿粗壯，葉片淡綠色且大小正常，未出現發紅現象.

圖2　激素配比對奧尼爾藍莓外植體生長的影響

2.2繼代增殖培養

2.2.1不同激素配比對粉藍繼代培養增殖生長的影響

試驗結果表明，當采用IBA1.50 mg/L +6-BA0.50 mg/L +ZT3.00 mg/L的激素配比時，30天可生長4cm以上且誘導出較多叢生芽(見圖3).采用IBA3.50 mg/L +6-BA1.00 mg/L +ZT2.00 mg/L能誘導產生較多的愈傷組織且無褐變現象生長狀態良好(見圖4).

圖3　IBA1.50 mg/L +6-BA0.50 mg/L +ZT3.00 mg/L藍莓誘導培養

圖4　IBA3.50 mg/L +6-BA1.00 mg/L +ZT2.00 mg/L藍莓誘導培養

2.2.2不同激素配比對奧尼爾繼代培養增殖生長的影響

表2　激素配比對奧尼爾繼代培養增殖生長的影響

由表2可以得出在奧尼爾藍莓的繼代培養中采用激素配比IBA0.20 mg/L +ZT2.00 mg/L進行培養時能有效促進枝條的生長，并且生長狀態良好，葉色嫩綠葉片大小正常.培養30天后枝條底部能誘導形成愈傷組織.

2.3瓶內生根培養

2.3.1不同濃度IBA對粉藍藍莓苗生根的影響

表3　培養基中不同濃度IBA對粉藍藍莓苗生根情況

由表3可以得出在粉藍藍莓的生根培養中采用激素配比IBA1.0mg/L能誘導分化出更多的根，60天后觀察結果顯示生長出的根粗壯，長度較長，分支多.并且根系的生長并不影響植株葉片及枝條的正常生長，葉色嫩綠葉片，大小正常.

2.3.2不同濃度IBA對奧尼爾藍莓苗生根的影響

表4　培養基中不同濃度IBA對奧尼爾藍莓苗生根情況

由表4可以得出在奧尼爾藍莓的生根培養中采用激素配比IBA1.5mg/L能誘導分化出更多的根，根為白色且柔嫩，莖桿及葉片嫩綠.(見圖5)

3結論

通過試驗得到：粉藍外植體在WPM+IBA0.75mg/L+6-BA3.00 mg/L +ZT2.00 mg/L條件下生長較好，粉藍繼代培養在WPM+IBA1.50+6-BA0.50+ZT3.00條件下可形成較多叢生芽，粉藍生根培養在WPM+IBA1.00 mg/L條件下生根率高，根的質量好.奧尼爾外植體在WPM+IBA1.00+ZT2.00條件下誘導出芽率較高，奧尼爾繼代培養在IBA1.5 mg/L +ZT2.0 mg/L條件下生長較好，可形成較多愈傷組織，奧尼爾生根培養在WPM+IBA1.50 mg/L條件下生根率高，根的質量好.

圖5　IBA1.5mg/L藍莓誘導培養

對與藍莓外植體的培養，防止各種內生真菌、細菌的污染是成功的關鍵.可以通過在3～4月份采取幼嫩的枝條，以及在培養基中加入一定量的青霉素來降低染菌率.對與繼代培養，最好采取逐代減少激素用量的方法進行培養，以避免激素用量過大給植株造成不良的影響.生根培養時，培養時間不可超過80天，否則會造成植株發育不良，莖尖有白化現象.另外，培養過程中應控制好光照，避免應光照不良引起植株發紅的癥狀.一旦出現植株發紅，可放置散射的自然光下恢復.

參考文獻

[1]姜冬,張麗萍.藍莓的組織培養及快速繁殖[J].中國林副特產,2012,8(4):12-14.

[2]李麗容,金開正.兔眼藍莓組織快繁試驗[J].中國南方果樹,2010(4):71-72.

[3]茨韋特科夫·約旦, 趙燕麗. 引進國外藍莓品種的組織培養及快繁技術研究[J].黑龍江農業科技,2011(6): 6-8.

[4]梁文衛.藍莓最佳繼代培養基的篩選試驗 [J].黑龍江農業科技,2.14,(8):32-34.

[責任編輯：閆昕]

Effect of Different Phytohormone Combinations on Tissue Culture of Two Varieties of Blueberries

CHEN Yuan-guo, MA Peng, WANG Yu, GAO Yue

(College of Life Sciences, Zaozhuang of University, Zaozhuang 277160, China)

Abstract:To explore the effect of different phytohormone combinations on Powderblue and O'neal explants elongation and subculture with the stem of the two varieties of blueberry plants as materials. The results showed that Powderblue explants which cultivated in the WPM medium with 0.75 mg/L IBA,3.00mg/L 6-BA and 2.00mg/L ZT growed better. In Powderblue subculture, it developed more multiple adventitious bud in the condition of the WPM medium with 1.50mg/L IBA,0.50mg/L 6-BA and 3.00mg/L ZT. In Powderblue rooting culture, it gained higher rooting rate even better quality on the ground of the WPM medium with 1.00mg/L IBA. Similarly, O'neal explants which cultivated in the WPM medium with 1.00mg/L IBA and 2.0mg/L ZT reached higher shoot induction rate. In subculture, it vegetated better in the condition of the WPM medium with 1.50mg/L IBA and 2.00mg/L ZT, even developed more callus tissue. In rooting culture, while cultivated in the WPM medium with 1.50mg/L IBA, the roots improved better with handsome rooting rate.

Key words:vaccinium spp.; tissue culture; phytohormone combinations

[中圖分類號]Q943.1

[文獻標識碼]A

[文章編號]1004-7077(2016)02-0087-05

[作者簡介]陳原國(1972-)，男，陜西三原人，棗莊學院生命科學學院講師，理學博士，主要從事植物學、細胞生物學研究.

[收稿日期]2016-02-02