三個品種萊菔子生藥學研究

李媛 趙振華 李勇 劉晨星 郭鳳倩 李佳 張永清

摘要：對青、白、紅三個品種萊菔子樣品的顏色、形狀、長度、寬度、千粒重、微形態等特征進行觀察，運用UV法測定總黃酮含量，HPLC法測定芥子堿及蘿卜苷含量，并進行比較。結果表明，三個品種萊菔子在外觀形態和活性成分含量上均有較大差異，可從外觀形態和微形態方面初步對三個品種萊菔子進行區分。以總黃酮、芥子堿、蘿卜苷等活性成分含量進行評價時，紅蘿卜藥用價值為最高。建議《中國藥典》增加總黃酮、蘿卜苷兩種內在指標，全面對萊菔子進行含量分析和質量控制。

關鍵詞：萊菔子；形態特征；活性成分

中圖分類號：S330.2文獻標識號：A文章編號：1001-4942（2016）06-0058-04

萊菔子為十字花科植物蘿卜（Raphanus sativus L.）的干燥成熟種子，具有消食除脹、降氣化痰的功效[1]。萊菔子原植物來源廣泛、資源豐富，全國各地皆產，河北、河南、浙江、黑龍江為其主產地[2]。作為衛生部公布的“藥食同源物品”之一，萊菔子應用范圍較廣，不僅可榨油食用，而且具有較高的藥用價值。《本草綱目》[3]記載其“辛甘，平，無毒”；“下氣定喘，治痰，消食，除脹，利大小便，止氣痛，下痢后重，發瘡疹”。現代藥理研究表明萊菔子具有平喘、鎮咳、祛痰[4]、降血壓[5]、降血脂[6]、增強胃腸道動力[7]、改善泌尿系統[8]等多種藥理作用。

目前藥材市場上萊菔子品種眾多，入藥品種繁雜難辨，質量參差不齊，以青、白、紅三個品種為主，但《中國植物志》、《中國藥典》等文獻著作在萊菔子藥材項下并未對不同品種進行系統探究。本研究收集和整理了三個品種萊菔子樣品，通過形態特征及化學成分含量的比較，對樣品進行質量評價，以了解不同品種的質量情況，為篩選優良品種、完善萊菔子質量標準、保證臨床用藥的安全有效及資源的開發利用提供基礎數據。

1材料與方法

1.1供試材料

供試材料采集于濟南市歷城區仲宮鎮，經山東中醫藥大學張永清教授鑒定，均為十字花科植物蘿卜的干燥成熟種子。

1.2儀器與試劑

SZX7體視顯微鏡（奧林巴斯公司）、游標卡尺（上海九量五金工具有限公司）、SC7620型真空鍍膜儀（EMITECH公司）、SUPRA55型熱場發射掃描電子顯微鏡（德國蔡司公司）、PL203電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、CP225D電子天平（賽多利斯公司）、KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）、UV 5100B型紫外可見分光光度計（上海元析儀器有限公司）、安捷倫1260高效液相色譜儀（包括G1311C四元泵、G1329B自動進樣器、G1315B二極管陣列檢測器、G1316A柱溫箱和Agilent Chemstation工作站）、芥子堿硫氰酸鹽（批號20141113，純度為98%）、蘿卜苷（批號29510701，純度為98%）、蘆丁（MUST-15010707，純度98%）購于中國藥品生物制品檢定所。乙腈、磷酸、醋酸為色譜純，甲醇、乙醇為分析純。

1.3試驗方法

1.3.1形態特征觀察選擇成熟飽滿的種子置于體視顯微鏡下，觀察外觀顏色、形狀等特征。每個品種隨機選取30粒種子，用游標卡尺測量其長、寬，取平均值。測千粒重（g），重復3次。

1.3.2微形態特征觀察用超聲波清洗機洗凈并用毛筆輕輕刷去種皮表面的灰塵、雜質，置于吸水紙上自然干燥備用。在體視顯微鏡下將5粒樣品種子分別粘貼于掃描電鏡樣品臺的雙面膠紙上，將雙面膠另一面粘于干凈的玻片上，用真空鍍膜儀噴鍍金膜90 s，移入熱場發射掃描電子顯微鏡樣品室，在5 kV 加速電壓下觀察種子形態、表面紋飾、種臍性狀等，選擇具有代表性的種子表面、局部和種臍拍照。

1.3.3總黃酮含量測定取適量種子置于烘箱中40℃干燥至恒重，粉碎，過40目篩，置于硅膠干燥器中備用。

精密稱取萊菔子粉1 g，加80%乙醇10 mL，超聲提取20 min，過濾；重復1次；取兩次所得溶液過濾于50 mL容量瓶，定容至刻度，備用。

標準曲線建立：分別精密吸取0.215 mg/mL對照品溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL置10 mL容量瓶中，各加80%乙醇至2.5 mL，分別精密加入5%亞硝酸鈉0.4 mL，搖勻，放置6 min；加10%硝酸鋁0.4 mL，搖勻，放置 6 min；加氫氧化鈉6 mL，加80%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min。以第一瓶作為空白對照，于190～600 nm波長范圍內掃描，最大吸收波長在510 nm處。因此，選用510 nm作為檢測波長。以總黃酮濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得回歸方程：Y=11.603X-0.00413，R2=0.9995。線性范圍為0.01075～0.0645 mg/mL。

1.3.4芥子堿含量測定參照《中國藥典》2015版（一部）萊菔子項下芥子堿含量測定方法。

色譜條件：Agilent ZORBAX Phenyl色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以乙腈-3%冰醋酸溶液（15∶85）為流動相；采用二元梯度洗脫，柱溫30℃；檢測波長為326 nm，參比波長為360 nm；流速1 mL/min。進樣量：20 μL。

標準曲線建立：精密稱取芥子堿硫氰酸鹽對照品適量，加70%甲醇制成濃度為0.099 mg/mL的對照品儲備液。以峰面積（Y）對進樣量（X）進行線性回歸，得芥子堿硫氰酸鹽標準曲線方程Y=351.85X+300.84，R2=0.9996，線性范圍為0.198～4.455 μg。

1.3.5蘿卜苷含量測定參照文獻[9]的方法。精密稱取過三號篩后的萊菔子粉0.15 g，置于100 mL具塞錐形瓶中，加入純凈水20 mL，密塞，稱重，超聲處理，冷卻，純凈水補重，過0.45 μm的微孔濾膜，濾液置棕色瓶中。

色譜條件：Agilent ZORBAX SB-C18色譜（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.1%磷酸-水溶液作為流動相（5∶95），采用二元梯度洗脫，柱溫30℃；檢測波長225 nm，參比波長360 nm；流速1 mL/min。進樣量：20 μL。

標準曲線建立：精密稱取蘿卜苷對照品適量，加純凈水制成濃度為0.222 mg/mL的對照品儲備液。以峰面積（Y）對進樣量（X）進行線性回歸，得蘿卜苷標準曲線方程Y=1019X+2.346，R2=1，線性范圍為0.222～1.554 μg。

2結果與分析

2.1外觀形態特征

三個品種萊菔子為紅棕色或黃棕色，卵圓形或橢圓形，一側有數條縱溝，種子表面有由明顯凸起條紋構成的致密網狀紋理，種臍點狀，褐色，略微外突。平均長度0.306～0.390 cm，寬度0.247～0.299 cm，千粒重9.734～17.079 g。長度、寬度、千粒重均以白蘿卜最大，以紅蘿卜最小，不同品種之間長度、寬度、千粒重差異顯著（表1）。

2.2微形態特征

三個品種萊菔子都是凹陷的網狀紋飾，網脊皆隆起，但網脊粗細、網紋凹陷程度、網眼大小有所不同。青蘿卜種子網脊隆起最為明顯，網紋凹陷最深，網眼最大，其網眼長度與白蘿卜、紅蘿卜差異顯著。紅蘿卜種子網脊隆起最不明顯，網紋凹陷最淺，網眼最小。種臍均位于種子基部一端，但種臍凹陷程度和直徑有所區別：青蘿卜種臍凹陷最深，直徑最小；白蘿卜種子種臍凹陷最淺，直徑最大（圖1，表2）。

2.3活性成分含量

三個品種萊菔子活性成分含量差異顯著（表3）。紅蘿卜總黃酮含量最高，為0.544%，白蘿卜最低，為0.428%；紅蘿卜芥子堿含量最高，為1.640%，白蘿卜最低，為1.210%；蘿卜苷含量以紅蘿卜最高，為0.238%，青蘿卜最低，為0.163%。

3討論與結論

青、白、紅三個品種萊菔子的顏色、形狀、大小、千粒重差異顯著，可從外觀上初步進行比較；微形態方面亦有差別，種皮表面網脊粗細、網紋凹陷程度、網眼大小以及種臍性狀差異對萊菔子品種的鑒定具有重要參考價值。本研究在外觀性狀鑒別的基礎上加入內在成分指標，總黃酮、芥子堿、蘿卜苷含量均以紅蘿卜為最高，藥用價值較高。

2015版《中國藥典》中只規定了芥子堿作為藥材質量控制標準。研究表明，蘿卜苷等硫苷類化合物具有較高的抗癌活性[10]，黃酮類化合物具有抗氧化、抗腫瘤、調節心血管系統及內分泌系統等多種藥理作用[11]。因此，本研究選取總黃酮、芥子堿、蘿卜苷3個內在指標進行綜合比較，彌補藥典中萊菔子藥材質量評價的局限性，為保證臨床用藥的安全有效及資源的開發利用提供依據。

參考文獻：

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