覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量測定

占少華

摘要：目的 探討覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量測定方法及效果。方法 采用兩種不同的藥物含量提取方法對覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量進行測定。結果 不同提取方法覆盆子椴樹苷和山奈酚含量差異明顯。結論 實驗結果為建立覆盆子藥材質量標準的制定提供參考。

關鍵詞：覆盆子；高效液相色譜法；椴樹苷；山奈酚；測定方法

為了保證藥物臨床使用的安全性，完善藥典相關空缺，本文對覆盆子中進一步完善藥典，保證臨床用藥安全有效，對覆盆子中椴樹苷和山奈酚含量進行測定，建立高效液相色譜法測定覆盆子中椴樹苷和山萘酚含量方法，報告如下。

1 儀器與材料

1.1實驗儀器 本次研究中中所使用的儀器與試劑及廠家（見表1）。

1.2材料 覆盆子：江西德興；對照品：椴樹苷對照品（上海永恒生物科技有限公司）；山奈酚對照品（上海永恒生物科技有限公司）。

1.3方法

1.3.1供試品溶液制備 精確稱取定量覆盆子，采用粉碎機粉碎成細粉，并過60目篩。同時，稱取精密稱定1.5g，置于圓底燒瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30ml，回流提取1h。放冷后稱定質量，采用濃度為80%的甲醇補充減少質量，混合均勻、濾過。

1.3.2對照品溶液的制備 椴樹苷和山奈酚對照溶液的制備：精密稱取椴樹苷對照品9.98mg和山奈酚對照品11.84mg置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得每1ml含椴樹苷0.3992mg的對照品溶液。

1.3.3 HPLC測定操作 前期準備：開啟高效液相色譜儀后，排氣，排氣完成后，關上排氣閥，先用純甲醇沖洗色譜柱再用流動相沖洗色譜柱，待柱子平衡后開始進樣；進樣測定：逐一精密吸取對照品溶液及不同提取方案所得到的供試品溶液50μl（定量環(huán)20μl），注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖[1]。

1.4色譜條件的選擇

1.4.1檢測波長的選擇 將上述獲得溶液等進行全波長圖譜掃描，確定最大吸收波長。本次研究中，進行三次全波長掃描，且最大波長為316nm，最大吸收值為2.8（見表2）。

1.4.2色譜流動相比例的選擇 采用流動相甲醇-0.1%的磷酸水比例為55：45、52：48、50：50按進行高效液相檢測，結果如下（見圖1）：

由此看出：當甲醇濃度為0.1%的磷酸水=55：45時，分離效果不好，適當調低甲醇的比例，保留時間延長，分離度增大；當甲醇：0.1%的磷酸水=52：48時分離效果較好，再減小甲醇比例，分離效果變化不大，但保留時間延長較大。因此，選用甲醇：0.1%的磷酸水=52：48作為流動相。

1.4.3色譜條件的確定 覆盆子的HPLC含量測定條件為：高效液相色譜儀（Agilent1260，μV檢測器）；色譜柱（C18，5μm，200×4.6mm）；流動相：甲醇-0.1%的磷酸水=52：48；檢測波長：366nm；柱溫：25℃；流速1ml/min。

1.5提取工藝的考察

1.5.1提取溶媒的考察 精密稱取覆盆子粉末（過60目篩）1.5g2份，置錐形瓶中，分別準確加入80%甲醇25ml、80%乙醇25ml，稱重，回流提取1h，取出，放至室溫后，再稱定重量，用所用的溶劑補足減失的重量，搖勻，過濾。取續(xù)濾液用0.45μm微孔濾膜過濾，制得供試品溶液，吸取20μl測定峰面積[2]。見圖2。

由此看出：乙醇的回流提取效果不如甲醇回流提取效果好，故采用甲醇作為提取溶劑。

由上圖可以看出用甲醇回流方法提取的峰面積比超聲方法大，故選用回流提取方法。

1.6含量測定 標準品測定：取混合標準品椴樹苷（0.11976mg/ml）山奈酚（0.02368mg/ml）進行峰面積的測定。見圖3。

平均峰面積分別為椴樹苷2388.4，山奈酚2188.2。

樣品測定：取德興覆盆子粉末，過60目篩。取約1.5g，精密稱定。置于圓底燒瓶中，精密加入已配制好的80%的甲醇30ml，稱定質量，回流提取1h。放冷后稱定質量，用80%的甲醇補充減少的質量，混勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品的溶液。見圖4。

由此看出：平均峰面積分別為椴樹苷493.8，山奈酚141.5。得出：德興覆盆子中椴樹苷和山奈酚的含量分別為0.4933mg/g，0.0302mg/g。

3 討論

本次研究中，采用甲醇-0.1%的磷酸水（55：45）時，分離度并不是很好，所以嘗試減小甲醇的比例，發(fā)現(xiàn)當甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）時，椴樹苷和山奈酚的分離度都較好，故選用甲醇-0.1%的磷酸水（52：48）作為流動相。通過全波長掃描確定最佳波長366nm。由上述單因素實驗選定，覆盆子的提取條件為：30ml80%甲醇在80℃條件下回流提取1h[3]。通過上述研究測定，最終得出以下結果：德興覆盆子中椴樹苷和山奈酚的含量分別為0.4933mg/g，0.0302mg/g。

參考文獻：

[1]何建明，孫楠，吳文丹，等.HPLC測定覆盆子中鞣花酸、黃酮和覆盆子苷-F5的含量[J].中國中藥雜志，2013，38（24）：4351.

[2]鐘瑞建，郭卿，周國平，等.RP-HPLC法同時測定覆盆子藥材中2個主要黃酮苷成分的含量[J].藥物分析雜志，2014，34（6）：971-974.

[3]何建明，孫楠，吳文丹，等.HPLC測定覆盆子中鞣花酸、黃酮和覆盆子苷-F5的含量[J].中國中藥雜志，2013，38（24）：4351-4356.

編輯/趙恒德