Gadd45α、NF-κB在胃癌中表達情況及其相關性研究*

馮水土，陳毅德，陳玉強，高應勤，范鑫

[1.福建省廈門市海滄醫院腫瘤內科，福建廈門361026；2.廈門大學附屬成功醫院（解放軍一七四醫院）腫瘤治療中心，福建廈門361004]

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Gadd45α、NF-κB在胃癌中表達情況及其相關性研究*

馮水土1，陳毅德1，陳玉強2，高應勤1，范鑫1

[1.福建省廈門市海滄醫院腫瘤內科，福建廈門361026；2.廈門大學附屬成功醫院（解放軍一七四醫院）腫瘤治療中心，福建廈門361004]

摘要：目的通過分析Gadd45α、NF-κB在不同幽門螺桿菌（HP）感染狀態胃癌中的差異表達來探討兩者表達的相關性及其對胃癌發生的意義。方法隨機選取本院70例胃癌石蠟標本及56例相應癌旁正常組織標本來檢測Gadd45α、NF-κB蛋白的表達情況；分析Gadd45α蛋白與NF-κB在胃癌中表達的相關性。結果NF-κB在HP+胃癌、HP-胃癌、HP+癌旁組織中的陽性表達率分別為82.5%、53.33%和26.32%，Gadd45α蛋白在HP+胃癌、HP-胃癌、HP+癌旁組織中的陽性表達率分別為77.5%、46.67%和34.21%，經過χ2檢驗比較陽性表達的差異有統計學意義（P<0.05）。Gadd45α與NF-κB在胃癌中表達呈正相關（P<0.05）。結論NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌組織中高表達，且Gadd45α與NF-κB蛋白兩者在胃癌中的表達呈正相關。

關鍵詞：胃癌；Gadd45α；NF-κB；幽門螺桿菌；表達

胃癌是一種常見的消化道惡性腫瘤，原發性胃癌主要是由幽門螺桿菌（helicobacter pylori，HP）感染誘發的，而我國屬HP高感染國家；HP侵染宿主胃部后，能引起宿主細胞調控出現紊亂，激活多條信號通路，其中一條較為重要的是NF-κB信號通路，該通路的異常激活使細胞內多種細胞因子的表達發生改變，從而影響細胞的生物學行為，最終導致胃癌的形成[1-3]。許多研究[3-5]提示，NF-κB、HP表達與胃癌TNM分期、病理組織分化程度及預后之間的關系密切；Gadd45α是DNA損傷修復的重要蛋白，可以被NF-κB介導的泛素化蛋白酶降解。NF-κB和Gadd45α是否與胃癌的形成以及HP感染狀態之間存在相互關系的研究罕有報道。本文選擇將Gadd45α蛋白和NF-κB蛋白、HP因素綜合起來進行初步研究，報道如下。

1　材料與方法

1.1一般資料

選取2008～2012年既往研究[5]中廈門市海滄醫院胃癌根治手術切除的大體標本術后保存在病理科的石蠟標本70例，所有標本都經病理證實為胃癌。同時還選擇了56例相應的癌旁組織石蠟標本作對照。入組標本的臨床資料情況見表1。本研究獲得單位倫理委員會的批準及受試者簽署的知情同意。

表1　入組標本的臨床資料比較

1.2方法

采用類似既往研究[6]使用的免疫組織化學Max Vision二步法檢測胃癌組織及癌旁組織中Gadd45α蛋白表達情況；Gadd45α蛋白表達以胞漿或胞核中出現棕色反應為陽性，結果參照文獻[7]及既往研究[6]評分方法，選5個高倍視野計算陽性細胞數，以陽性細胞<5%記為0分；25%≥陽性數>5% 為1分；50%≥陽性數>25%為2分；陽性數>50% 為3分。著色強度計分，與陰性對照同等顏色為0分，弱著色（淡棕黃色）為1分，強著色（明顯棕黃色）為2分。陽性分級：以上2項相加，0～2分為（-）；3～5分為（+）；由兩位病理科主治醫生采用雙盲法觀察切片，判斷蛋白的表達結果。

1.3統計學方法

采用SPSS 17.0統計軟件進行數據分析，所獲得的實驗數據進行χ2檢驗或者Spearman秩相關分析，P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1NF-κB、Gadd45α蛋白在不同HP感染狀態的胃癌及癌旁組織中的表達差異情況比較

在HP+胃癌、HP-胃癌、HP+癌旁組織、HP-癌旁組織中NF-κB蛋白的陽性表達率分別為82.50%、53.33%、26.32%和27.78%，Gadd45α蛋白的陽性表達率分別為77.50%、46.67%、34.21%和22.22%；經過χ2檢驗，在HP+組與HP-組胃癌中NF-KB、Gadd45α蛋白陽性的表達比較，差異有統計學意義（χ2=6.944、24.867，P<0.05），在HP+組胃癌與癌旁中NF-KB、Gadd45α蛋白陽性的表達差異有統計學意義（χ2=7.099、14.852，P<0.05），在HP-胃癌及其癌旁組織中NF-KB、Gadd45α蛋白陽性表達差異無統計學意義（χ2=2.99、2.87，P>0.05），見表2和圖1、2。

表2　NF-κB、Gadd45α蛋白在不同HP感染狀態的胃癌及癌旁組織中的陽性表達差異　例（%）

2.2NF-κB，Gadd45α蛋白在胃癌及癌旁組織的陽性表達

NF-κB蛋白在胃癌和癌旁組織中的陽性表達率分別為70.00%和26.79%（χ2=23.246，P <0.05）；Gadd45α蛋白的陽性表達率分別為64.29%和30.36%（χ2=12.611，P<0.05），經過χ2檢驗，兩者比較差異有統計學意義，提示NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌組織中高表達，在癌旁組織中低表達。見表3。

2.3胃癌組織NF-κB與Gadd45α蛋白表達的相關性

結合既往的研究[6]進行分析，在胃癌組織中NF-κB與Gadd45α均為陽性的表達率為51.43% （36/70），均為陰性的表達率為17.14%（12/70），而NF-κB（+）/Gadd45α（-）表達率為18.57%（13/70），NF-κB（-）/Gadd45α（+）表達率為12.86%（9/70），經Spearman秩相關分析，該組試驗中胃癌組織NF-κB與Gadd45α蛋白的表達呈正相關（r s= 0.29，P<0.05），兩組比較差異有統計學意義，見表4。

圖1　NF-κB在胃癌組織及癌旁正常組織中的陽性表達（×400）

圖2　Gadd45α在胃癌及癌旁組織中的陽性表達（×400）

表3　NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌及癌旁組織中的陽性表達情況

表4　NF-κB，Gadd45α蛋白在胃癌組織中表達情況的相關性檢驗　例

3　討論

研究表明[3-4]，NF-κB在HP+胃炎轉化為胃癌的過程中起到了重要作用。而Gadd45α基因是以P53基因為核心的調控體系中的重要一員[8-11]，是NF-κB下游的一個重要靶基因，Gadd45α的誘導表達受到多層次的調控[9，12-14]。正是這種多重的誘導表達機制決定Gadd45α具有多樣化的功能，它與許多腫瘤的發生、發展關系密切，其發揮功能的機制考慮可能與Gadd45α基因異常甲基化及表達有關[8-11，14-20]。

本文通過免疫組織化學法檢測隨機選取的70例胃癌石蠟標本及56例相應癌旁正常組織標本中NF-κB、Gadd45α的表達情況，并與不同HP感染狀態的胃癌組織中的表達情況及其相互關系進行統計分析。實驗結果發現，NF-κB、Gadd45α蛋白在胃癌組織中的陽性表達率較高的情況（表達陽性率分別為70.00%和64.29%），在HP感染型胃癌中的陽性表達率更高（表達陽性率分別為82.50%和77.50%），統計學分析提示差異有統計學意義；同時結合既往的研究[5]進一步分析，結果提示Gadd45α表達水平與NF-κB呈正相關。但Gadd45α與NF-κB的正相關系數rs僅為分別為0.29，提示了胃癌發生、發展過程極其復雜，除NF-κB外還有很多分子參與Gadd45α的調節、影響其表達水平。這有待在以后的試驗中進行進一步胃癌細胞學及基因學的進一步研究，需要有更多的相關研究加入到胃癌的研究中。上述研究結果提示，胃癌的產生可能與其細胞內NF-κB、Gadd45α的活化和過表達有關，對其表達水平的檢測有益于胃癌的早期診斷及其預后的早期預測，以兩者為靶點的治療可能是對胃癌（特別是HP+胃癌）另辟的一條治療途徑。

參考文獻：

[1] Gonzalez CA, Agudo A. Carcinogenesis, prevention and early detection of gastric cancer: where we are and where we should go[J]. International Journal of Cancer Journal International Du Cancer, 2012, 130(4): 745-753.

[2] Xu ZH, Zhang J, Yang D, et al. Progress of research between Helicobacter pylori infection and osteoporosis[J]. China Journal of Orthopaedics and Traumatology, 2011, 24(11): 966-968.

[3]紀雪松,趙春歌,潘彥珞,等. NF-κB及其對靶基因的調控在幽門螺桿菌感染與胃癌發生的關系初探[J].華北煤炭醫學院學報, 2008, 10(2): 144-146.

[4]蒲澤錦,吳靈飛. NF-κB與幽門螺桿菌相關性胃炎及胃癌[J].國際消化病雜志, 2006, 26(1): 46-48.

[5]成春麗,師水生.幽門螺桿菌感染胃癌中CCL20核轉錄因子-κB表達的相互關系及臨床意義[J].中國藥物與臨床, 2010, 10(4): 411-413.

[6]馮水土,陳玉強,陳毅德,等. NF-κB在幽門螺桿菌陽性和陰性胃癌中的差異表達及臨床意義[J].中國腫瘤臨床, 2012, 39(21): 1626-1629.

[7] Shimizu M, Saitoh Y, Itoh H. Immunohistochemical staining of Ha-ras oncogene product in normal, benign, and malignant human pancreatic tissues[J]. Human Pathology, 1990, 21(6): 607-612.

[8]韓敏輝.NF-κB, Gadd45γ蛋白在肝癌中的差異表達及其意義[D].第四軍醫大學, 2010.

[9]韓敏輝,馮英明. Gadd45α與腫瘤關系的研究進展[J].現代腫瘤醫學, 2010, 18(2): 418-421.

[10]郭煒,朱鐵年,董稚明,等. Gadd45G基因在食管鱗癌組織中的異常甲基化及表達[J].腫瘤, 2013, 33(1): 74-80.

[11] Sanchez R, Pantoja-Uceda D, Prieto J, et al. Solution structure of human growth arrest and DNA damage 45alpha (Gadd45alpha) and its interactions with proliferating cell nuclear antigen (PCNA) and Aurora A kinase [J]. The Journal of Biological Chemistry, 2010, 285(29): 22196-22201.

[12] Ngo SN, Williams DB, Head RJ. Rosemary and cancer prevention: preclinical perspectives [J]. Critical Reviews in Food Science and Nutrition, 2011, 51(10): 946-954.

[13] Bertoni F, Coiffier B, Salles G, et al. MALT lymphomas: pathogenesis can drive treatment[J]. Oncology (Williston Park), 2011, 25(12): 1134-1142.

[14]馮雪鳳,王迎偉. DNA損傷修復相關基因Gadd45的研究進展[J].癌變.畸變.突變, 2009, 21(5): 404-407.

[15]郝一,宋倫. GADD45α參與維持基因組穩定性并發揮腫瘤抑制效應的多樣性分子機制[J].生物技術通訊, 2011, 22(2): 264-267. [16] Gao C, Zhang Z, Liu W, et al. Reduced microRNA-218 expression is associated with high nuclear factor kappa B activation in gastric cancer[J]. Cancer, 2010, 116(1): 41-49.

[17]冀秀英,王艷梅,白洋,等. Gadd45a在人腦膠質瘤細胞中的表達及其與細胞凋亡及增殖的關系[J].中國老年雜志, 2013, 33(7): 1593-1594.

[18]游慶朋,郭煒,張明慧,等.賁門腺癌中GADD45G基因的異常甲基化及表達[J].天津醫藥, 2013, 41(10): 949-952.

[19]李小靜,李柳君,李志鋒,等. 5-氮-2’-脫氧胞苷對A431細胞Gadd45α表達及細胞凋亡的影響[J].中華實用診斷與治療雜志, 2013, 27(2): 150-152.

[20]王赟,季洪亮. Gadd45在惡性腫瘤中的研究進展[J].中國實驗診斷學, 2013, 17(6): 1155-1158.

（張蕾編輯）

論著

Differential expression and correlation of Gadd45α and NF-κB in human gastric cancer*

Shui-tu Feng1, Yi-de Chen1, Yu-qiang Chen2, Ying-qin Gao1, Xin Fan1
[1.Department of Medical Oncology, Xiamen Haicang Hospital, Xiamen, Fujian 361026, China;
2. Clinical Center of Tumor Therapy, Chenggong Hospital (the 174th Hospital of PLA), Xiamen University, Xiamen, Fujian 361004, China]

Abstract:Objective To explore the differential expression level of Gadd45α and NF-κB in human gastric cancer with Helicobacter Pylori (HP) infection status, and to explore a way to clinical diagnosis and treatment for gastric cancer. Methods A total of 70 paraffin-emeded samples of gastric cancer and 56 normal tissues from surgical resected tissues were selected randomly. We analyzed the correlation between the expression of Gadd45α protein and NF-κB in gastric carcinoma. Results The positive rates of expression of NF-κB protein in HP+ gastric carcinoma tissues, HP-gastric carcinoma tissues and HP+ adjacent non-neoplastic tissues were 82.5%, 53.33% and 26.32% respectively. The positive rates of expression of Gadd45α protein in HP+ gastric carcinoma tissues, HP-gastric carcinoma tissues and HP+ adjacent non-neoplastic tissues were 77.5%, 46.67% and 34.21% respectively. The difference of the expression levels was significant (P < 0.05 ). The expression of Gadd45α protein in gastric carcinoma samples was positively correlated with NF-κB (P < 0.05 ). Conclusions The levels of Gadd45α and NF-κB protein expression are up-regulated in HP+ gastric carcinoma sample. The expression of Gadd45α and NF-κB in gastric carcinoma is positively correlated.

Keywords:gastric cancer; Gadd45α; NF-κB; Helicobacter Pylori; expression

[通信作者]陳玉強，Tel：13358389899，E-mail：chenyq707@163.com

*基金項目：廈門市海滄區科技計劃項目（No：350205z20144010-05）；南京軍區醫學科技創新課題（No：10MA068）；福建省自然科學基金資助項目（No：2010D013）；廈門市科技計劃創新項目（No：3502z20104014）

收稿日期：2015-09-14

文章編號：1005-8982（2016）08-0033-05

DOI:10.3969/j.issn.1005-8982.2016.08.007

中圖分類號：R735.2

文獻標識碼：A