4種中藥對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用*

吳賢麗，龐載元，敖茂程，華　毅

(攀枝花市中心醫院檢驗科，四川攀枝花 617067)

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·論著·

4種中藥對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌作用*

吳賢麗，龐載元△，敖茂程，華毅

(攀枝花市中心醫院檢驗科，四川攀枝花 617067)

摘要:目的研究黃芩等4種中藥對廣泛耐藥鮑曼不動桿菌(XDRAB)的抑菌作用，為臨床治療XDRAB感染尋找新的途徑。方法采用試管倍比稀釋法測定黃芩、連翹、黃連、金銀花4種藥物的最低抑菌濃度(MIC)。結果黃芩、連翹、黃連、金銀花對XDRAB的MIC平均值分別為30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黃連的抑菌作用最強。攀枝花市與外地收集的菌株抑菌作用比較，差異無統計學意義(P>0.05)。結論4種中藥對XDRAB均有不同程度的抑菌作用。

關鍵詞:中藥；廣泛耐藥鮑曼不動桿菌；體外抑菌試驗

鮑曼不動桿菌是一種獲得耐藥性和克隆傳播能力都非常強大的細菌，廣泛耐藥、多重耐藥、全耐藥鮑曼不動桿菌在全世界范圍內都呈流行趨勢，目前已經成為我國院內感染最重要的病原菌之一[1]。廣泛耐藥的鮑曼不動桿菌(XDRAB)是指對臨床常用的5類抗菌藥物都耐藥，而僅對1至2種抗菌藥物，主要是替加環素和(或)多黏菌素敏感的菌株[2-3]。多黏菌素類藥物的神經系統不良反應發生率高且具有腎毒性。由于多黏菌素E異質性耐藥的存在，在臨床中常需要聯合其他抗菌藥物一起使用[4-6]。耐亞胺培南鮑曼不動桿菌對替加環素有較好的敏感性[7-9]，但替加環素血藥濃度、腦脊液濃度低，而且常需與其他抗菌藥物聯合應用，價格過于昂貴[10]。雖然解決該菌耐藥性問題的途徑還有開發新的抗菌藥物，但投資大、周期長是新藥開發會遇到的難題。常用的抗菌中草藥有近百種，而且中藥治療感染性疾病有悠久的歷史[11]。本研究采用試管倍比稀釋法對4種中藥配方顆粒的體外抗XDRAB活性進行了檢測，參考了文獻[12]的相關方法并做了相應的改進，現報道如下。

1材料與方法

1.1菌株的選取收集2010年4月至2011年4月分離自本院和浙江大學醫學院附屬第一醫院(外院)臨床標本的XDRAB 30株，選擇標準菌株ATCC27853、ATCC25922、ATCC25923用于對比分析。

1.2儀器與耗材包括孵箱、1 000 μL無菌吸頭、1 000 μL加樣槍、帶帽無菌試管、試管架、比濁儀、API 0.85% 3 mL無菌鹽水管、梅里埃公司生產的非苛養革蘭陰性桿菌藥敏試驗專用肉湯。

1.3方法

1.3.1中藥的選取與制備通過查閱文獻，選擇有抗菌活性的4種中藥配方顆粒。這4種中藥配方顆粒包括黃連、金銀花、黃芩、連翹，均由四川新綠色藥業科技發展股份有限公司生產。將中藥配方顆粒溶解于無菌蒸餾水中，使其生藥的質量濃度為1 000 mg/mL。

1.3.2細菌的培養與稀釋將選定的實驗菌株接種于血平板培養基，于37 ℃孵箱中孵育24 h后挑取菌落于API 3 mL 0.85%無菌鹽水管中并配制成0.5麥氏比濁單位的細菌,使其細菌密度為1.5×108CFU/L。

1.3.3最低抑菌濃度(MIC)的測定按臨床標準化協會(CLSI)推薦的液體稀釋法測定實驗菌株的MIC值，稀釋液為梅里埃的非苛養革蘭陰性桿菌藥敏試驗用肉湯。

1.3.4操作步驟10支無菌試管中各加入1 mL肉湯，于第1管加入1 mL中藥藥液(生藥濃度為1 000 mg/mL)，充分混勻后取出1 mL加入第2管，混勻后再取出1 mL加入第3管，反復操作至第9管。混勻后，從第9管取出1 mL液體丟棄，第10管不加入藥液，作為MIC測定的陽性對照。除第9管外在每個試管中加入0.5麥氏單位的菌液20 μL,第9管作為MIC測定的陰性對照。從第1管至第8管的生藥濃度依次為500.00、250.00、125.00、62.50、31.25、15.63、7.81、3.91 mg/mL，將各管充分混勻后放置于37 ℃孵箱中培養，24 h后觀察細菌生長情況。在陰性對照管無細菌生長，陽性對照管中的細菌生長正常的條件下,出現無渾濁試管的最小濃度即為MIC。以上的所有無菌操作均需在生物安全柜中進行。

1.4統計學處理統計軟件為SPSS17.0，4種中藥對菌株的MIC的比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株XDRAB有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黃連的抑菌作用最強。兩個醫院的MIC相比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。

表1　　　4種中藥對兩個醫院分離的XDRAB的

3討論

抗菌藥物的廣泛和不合理應用，使細菌的耐藥性日趨嚴重，醫院由XDRAB引起的感染呈逐年升高的趨勢，特別是重癥監護室(ICU)尤為嚴重。抗菌藥物中可供選擇的藥物很少，而且療效差、不良反應大，給臨床治療帶來了困難，而中藥對XDRAB有一定的體外抑菌作用。

黃芩、連翹、黃連、金銀花對30株XDRAB有不同程度的體外抑菌作用，MIC均值分別為30.99、187.50、27.61、75.00 mg/mL，其中黃連的抑菌作用最強。黃連、金銀花和連翹的抑菌濃度比冷會勇等[13]報道的對XDRAB的抑菌濃度低，而黃芩抑菌濃度與之接近。4種中藥對XDRAB的抑菌濃度比龐載元等[14]報道的對廣泛耐藥銅綠假單胞菌的抑菌濃度低，4種中藥對本地與外地收集的菌株抑菌作用無明顯差異。

中藥中有抗菌作用的有近百種，但是這些中藥的最小抑菌濃度遠遠高于按常規劑量口服所得的血藥濃度[15]。本研究中，黃連的MIC平均為27.61 mg/mL，若按5 000 mL的成年人體液量計算，需要一次性地口服多達138 g的生藥才可能在體內達到所需要的抑菌濃度，而2～10 g是黃連的常規劑量[16]。因此口服黃連藥液遠遠達不到治療所需的血藥濃度。本研究中，黃芩的平均MIC為30.99 mg/mL，若按成年人的體液量為5 000 mL計算，一次性地口服155 g生藥才可能在體內達到抑菌濃度，而5～15 g為黃芩的常規劑量[16]，也不可能達到治療所需的血藥濃度。彭乙華等[17]報道，中藥單體注射制劑棓丙酯對XDRAB的體外MIC為64～128 μg/mL，有較高的抑菌活性。但按成年人5 000 mL的體液量計算，仍需要藥物320～640 mg，而棓丙酯靜脈滴注一次的允許用量不超過180 mg。所以其采用靜脈滴注在人體內也不可能達到有效抑菌濃度。從上述中藥的抑菌試驗可以看出，傳統給藥模式難以發揮中藥的抗菌作用。

呼吸道毛細血管致密、豐富，吸收面積大，藥物吸收快，速率僅次于靜脈給藥[16]。通過霧化吸入，藥物可直達病灶，因此這種途徑給藥的藥物用量少，可以避免口服給藥中血藥濃度過低的瓶頸，吸入給藥是中藥治療呼吸道感染不錯的選擇。肺炎[18-20]和上呼吸道感染[21-23]采用中藥霧化吸入治療的報道較多，療效受到肯定。本研究顯示，雖然4種中藥對XDRAB有不同程度的體外抗菌活性，但按常規劑量口服在體內均不能達到應有的抑菌濃度。中藥霧化吸入治療XDRAB引起的肺炎是值得進一步研究的方法。

在中藥抗菌治療的研究中，已經有很多證據表明中藥在抗菌治療方面蘊藏著巨大潛力。在臨床應用中，還需要對其給藥途徑進行進一步的研究，不斷創新與開拓，才能使其更好地發揮作用。

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The bacteriostatic effect of four kinds of traditional Chinese herbal medicines on strains of extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii*

WuXianli,PangZaiyuan△，AoMaocheng，HuaYi

(DepartmentofLaboratory,PanzhihuaCentralHospital,Panzhihua，Sichuan617067，China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the bacteriostatic effect of 4 kinds of traditional Chinese herbal medicine on extensively drug-resistant A.baumannii(XDRAB) bacteriostatic effect,find a new way for the clinical treatment of the XDRAB infection.MethodsThe minimal inhibitory concentrations(MICs) of scutellaria,forsythia,rhizoma coptidis,honeysuckle were determined by using broth two-fold dilution method.ResultsThe mean values of MICs of scutellaria,forsythia,rhizoma coptidis,honeysuckle were 30.99,187.50,27.61 and 75.00 mg/mL,respectively.Among the 4 kinds of traditional Chinese herbal medicines,rhizoma coptidis got the strongest antimicrobial effect strongest inhibitory effect.There was no significant difference in the inhibitory effect of the strains collected from local or nonlocal(P>0.05).ConclusionThe 4 kinds of Chinese herbal medicine had in vitro antibacterial activity to XDRAB in different degree

Key words:traditional Chinese medicine；extensively drug resistant Acinetobacter baumannii；in vitro antibacterial test

(收稿日期：2015-12-19)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.006

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)08-1030-03

基金項目：四川省攀枝花市2015年度市級財政科技專項資金項目(2015cy-s-25)。

作者簡介：吳賢麗，女，檢驗技師，主要從事臨床微生物檢驗的相關研究。△通訊作者，E-mail：yangfan621225@qq.com。