雙試劑陽性樣本復檢結果分析及檢測策略調整研究

王　霞，潘　彤，李紅珠，楊文玲

(天津市血液中心檢驗科，天津 300110)

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雙試劑陽性樣本復檢結果分析及檢測策略調整研究

王霞，潘彤，李紅珠，楊文玲△

(天津市血液中心檢驗科，天津 300110)

摘要:目的通過對雙試劑陽性樣本的復檢結果進行分析，探討現有檢測策略調整的可行性。方法對2012年1月至2014年12月對HBsAg、抗-HIV、抗-HCV和抗-TP為ELISA雙試劑檢測陽性標本的復檢結果進行統計分析。結果雙試劑陽性標本復檢陽性率分別為，HBsAg：99.69%～100%、抗-HIV：100%、抗-HCV：98.96%～99.94%和抗-TP：99.86%～100%。結論雙試劑陽性樣本復檢結果可以作為對檢測策略調整的依據。

關鍵詞:酶聯免疫吸附測定；乙型肝炎病毒；丙型肝炎病毒；梅毒螺旋體

ELISA試驗可用于各種疾病的篩查和診斷，特別適用于血站輸血相關感染的篩查。目前血站實驗室采用ELISA主要檢測HBsAg、抗-HIV、抗-HCV和抗-TP。按照《血站實驗室質量管理規范》[1]、GBT22576-2008/ISO15189-2007《醫學實驗室質量和能力的專用要求》[2]、ISO/IEC15189-2008《醫學實驗室質量和能力的認可準則》及血站技術操作規程(2012)要求[3-4]，血站血液篩查實驗室在采用一項新的檢測方法，或更換現有檢測方法時需要考慮的因素包括完成檢測必需的儀器、試劑、校準品、實驗程序及其組合、檢測策略等。筆者回顧性分析近3年的雙試劑陽性樣本復檢結果，旨在探討酶免檢測策略調整的可行性及問題，現報道如下。

1材料與方法

1.1標本來源采自天津市血液中心2012年1月至2014年12月無償獻血者，年齡18～55歲，體檢合格，獻血前經過HBsAg初篩(金標法)及血液比重檢測(硫酸銅比重法)合格。獻血后按照衛生部要求對血樣進行5個項目的初、復檢。

1.2試劑與儀器HBsAg初篩金標試紙條(廈門新創公司)，初、復檢試劑(深圳麗珠、荷蘭梅里埃公司)；抗-HCV初、復檢試劑(北京萬泰、美國強生公司)；抗-HIV初、復檢試劑(北京萬泰、荷蘭梅里埃、法國伯樂及英國索靈公司)；抗-TP初、復檢試劑(北京華大吉比愛、北京萬泰及北京高達公司)；ALT初、復檢試劑(上海榮盛、上海科華公司)。酶免初復檢質控品為北京康徹斯坦，ALT高、低值質控品為朗道公司產品。所有試劑均通過中國藥品生物制品檢定所批檢合格，且在有效期內使用。主要檢測儀器包括STAR全自動加樣系統和FAME24/20全自動酶免分析系統和東芝TBA-120FR全自動生化分析儀。

1.3方法ALT檢測采用速率法，≥40 IU/L為不合格，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP初、復檢均采用ELISA法。目前本血站采用初、復檢初次反應性均進行雙孔復檢，雙孔陽性為陽性，復檢結果一陰一陽也判定為陽性即作不合格報廢處理，抗-HIV陽性送天津市疾病預防與控制中心進行確認。所有試驗均嚴格按照試劑盒說明書要求進行操作。

1.4統計學處理使用統計軟件SPSS16.0進行統計分析，計數資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2結果

2.1HBsAg雙試劑陽性標本的復檢2012年1月至2014年12月獻血者HBsAg雙試劑陽性標本的復檢結果見表1。各年份的復檢不合格率間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

2.2抗-HIV雙試劑陽性標本的復檢2012年1月至2014年12月獻血者抗-HIV雙試劑陽性標本的復檢結果見表2。各年份的復檢不合格率間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表1　　HBsAg雙試劑陽性結果的復檢情況

表2　　抗-HIV雙試劑陽性的復檢情況

2.3抗-HCV雙試劑陽性標本的復檢2012年1月至2014年12月獻血者抗-HCV雙試劑陽性標本復檢結果見表3。各年份的復檢不合格率間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表3　　抗-HCV雙試劑陽性標本復檢情況

2.4抗-TP雙試劑陽性標本的復檢2012年1月至2014年12月獻血者血液檢測抗-TP雙試劑陽性復檢結果見表4。各年份的復檢不合格率間比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

表4　　抗-TP雙試劑陽性標本復檢情況

3討論

血站技術操作規程對初次試驗有反應性的檢測標本的后續處理有2種方案[4]。方案1：以同一試驗對原血樣(或從血袋導管重新取樣)做雙孔復試，如果雙孔復試結果均為無反應性，其初試有反應性可能由于假反應性或技術誤差導致，檢測結論為無反應性，血液可放行供臨床使用；如果雙孔復試結果中任何1孔為有反應性，則檢測結論為有反應性，對應的血液及由其制備的所有成分應隔離并報廢，將血液標本轉送相關實驗室做進一步確證或補充試驗。方案2：不做重復試驗，初次試驗結論即為檢測最終結論。

本血站檢驗科的既往檢測策略是對ELISA初檢有反應性標本均采用以同樣的試驗方法對原血樣做雙孔復試，如果雙孔復試結果均為陰性，檢測結論為陰性，血液可放行供臨床使用；如果雙孔復試結果中任何1孔為陽性，檢測結論也為陽性，對應的所有產品均為不合格并作報廢處理?；仡櫡治鼋?年的初次反應為雙試劑陽性的樣本，經二次復檢后陽性率約為99.39%～100%，而且統計結果也表明3年4項血液篩查檢測結果的不合格率也保持穩定狀態。據此對檢測策略進行更改：ELISA初次試驗雙試劑陽性標本，其檢測結論為陽性，不再進行雙孔復試；而對單試劑初次試驗為陽性樣本采用以同一試驗對原血樣做雙孔復試，如果雙孔復試結果均為陰性，檢測結論為陰性，血液可放行供臨床使用；如果雙孔復試結果中任何1孔為為陽性，檢測結論為陽性，對應的所有產品均為不合格。

通過此次檢測策略的調整確認使有以下幾點體會：(1)若檢測策略調整為雙試劑陽性直接報廢不再進行復試對于提高血液安全是有利的但同時也可能會造成血液資源的浪費；(2)檢測策略調整會大大減少不必要的復試從而減輕人力，節約物力與財力；(3)血液檢測方法的確認不是一性次試驗，而是一項需要持續開展的質量活動，實驗室應在一定時間周期內對已經過確認的檢查方法的性能包括策略等進行驗證、確認與調整，才能獲得準確、穩定檢測結果的證據。

總之，血站血液篩查實驗室應該在檢測過程發生的變化進行必要的方法確認[5-7]。這些變化包括實驗室首次引入的檢測方法、已確認的方法條件發生變化、試劑的更換、儀器設備的大修及大保養等。凡是涉及實驗室檢測方法的任何改變，均需在投入使用前參照相關標準實施確認[8-12]。

參考文獻

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[2]中華人民共和國國家質量監督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GBT/T22576-2008醫學實驗室質量和能力的專用要求[S].北京：中國標準出版社，2010．

[3]中國合格評定國家認可委員會.EC15189-2008醫學實驗室質量和能力的認可準則[S].北京：中國合格評定國家認可委員會，2008．

[4]中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會．國衛醫發[2015]95號 血站技術操作規程[S].北京：中華人民共和國國家衛生和計劃生育委員會，2015.

[5]葛紅衛，王鴻捷．血站核酸檢測實驗室過程確認與變更控制[J]．中國輸血雜志，2012，25(6)：519-523．

[6]葛紅衛，王鴻捷．血站實驗室血液檢測方法確認的技術實踐[J]．中國輸血雜志，2014，27(4)：345-348．

[7]王鴻捷，葛紅衛．醫藥領域的確認指南對血站實施確認活動的啟示[J]．中國輸血雜志，2011，24(10)：915-920．

[8]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP5-A2 Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods;approved guideline[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2010.

[9]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP6-A Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2010.

[10]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP10-A3 Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory methods:approved guideline[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2010.

[11]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP12-A2 User protocol for evaluation of qualitative test performance;approved guideline[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2010.

[12]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP15-A2 User verification of performance for precision and trueness:approved guideline[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2010.

(收稿日期：2016-02-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.08.047

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)08-1123-03

△通訊作者，E-mail:yangwenling@tjbc.org.cn。

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