HMGB1及MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內膜癌中的表達及臨床意義

華金仁 曾丹

HMGB1及MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內膜癌中的表達及臨床意義

華金仁 曾丹

目的 探討高遷移率族蛋白B1(HMGB1)及基質金屬蛋白酶9（MMP9）在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內膜癌中的表達及臨床意義。方法 選擇兩種子宮內膜癌標本存檔蠟塊100例作為研究對象，將其按照病理分型分成Ⅰ型組和Ⅱ型組，而后采用免疫組織化學法展開HMGB1及MMP9水平檢測，并對檢測結果進行統計分析。結果 Ⅰ型組中HMGB1陽性者46例，MMP9陽性者47例，Ⅱ型組HMGB1陽性者49例，MMP9陽性者49例。顯然HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宮內膜癌組織中呈現高表達；HMGB1及MMP9在Ⅱ型子宮內膜癌組織中表達水平高于Ⅰ型子宮內膜癌組（P＜0.05）。結論 HMGB1及MMP9在子宮內膜癌的形成中表達存在一定異常。在今后的臨床工作中，應對其給予足夠的重視。

子宮內膜癌；高遷移率族蛋白B1；基質金屬蛋白酶；免疫組織化學

子宮內膜癌在臨床上被分成兩大類：一類是雌激素依賴型（Ⅰ型）：該類癌癥疾病的發生與內源性或外源性雌激素的分泌量明顯增高具有一定的關系，80%以上的子宮內膜癌疾病患者屬于該種類型；癌的組織學結構與處于增生期階段的子宮內膜腺體較為類似，成為子宮內膜樣腺癌。另一類是非激素依賴型（Ⅱ型）：占子宮內膜癌的10%～15%。其發病與雌激素無明確關系，可能與癌基因或抑癌基因突變有關，據研究，P53抑癌基因的突變是其最重要的特征之一[1]。本研究對兩種子宮內膜癌標本存檔蠟塊展開了高遷移率族蛋白B1(HMGB1)及基質金屬蛋白酶9（MMP9）表達水平檢測，分析HMGB1及MMP9在Ⅰ型及Ⅱ型子宮內膜癌中的表達及臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年6～8月江西省婦幼保健院兩種子宮內膜癌標本存檔蠟塊100例作為研究對象，按照臨床分型分成Ⅰ型組和Ⅱ型組，每組50例。臨床資料和病理資料均完整，術前均未進行化療、放療及生物治療。子宮內膜癌按FIGO2009年分期標準[2]。

1.2 方法 從資料庫中，選取合適的病例，登記每例病例所有病理號。根據病理號從玻片庫中，找到每例病例的所有玻片，在顯微鏡下篩選出最適合做免疫組織化學的玻片，并登記所選玻片號。根據所登記的玻片號，從蠟塊庫中，找到相應的蠟塊，用于制作組織切片。

采用免疫組織化學方法（EnVision二步法）檢測HMGB1及MMP9的表達，用購買試劑公司所提供的已知HMGB1及

MMP9陽性切片作為本研究的陽性對照標本，采用磷酸鹽緩沖液PBS代替一抗作為本次研究的陰性對照標本。實驗的主要操作步驟包括以下幾個方面：(1)首先將石蠟標本切成厚度為

4μm左右的切片；(2)將切好的切片進行常規二甲苯脫蠟處理，實施梯度酒精脫水，自來水沖洗，蒸餾水沖洗；(3)再將切片置于濃度水平為10 mmol/L的檸檬酸緩沖液中，并在醫用微波爐中煮20 min左右,然后在室溫狀態下進行冷卻處理20 min左右；(4)蒸餾水沖洗后PBS緩沖液沖洗3次，每次3 min；(5)每張切片應該加一滴濃度為3%的雙氧水,在室溫狀態下孵育10 min左右,以達到使內源性的過氧化物酶的生物活性消除的目的；(6)PBS液沖洗3次,每次間隔3 min；(7)除去PBS液，每張切片加一抗50μL，室溫下孵育3 h；(8)PBS液沖洗3次,每次間隔

3 min；（9)除去PBS液，每張切片加二抗100μL，室溫下孵育

20 min；(10)PBS液沖洗3次,每次間隔3 min；(11)除去PBS液，每張切片加三抗100μL，室溫下孵育30 min；(12)PBS液沖洗3次,每次間隔3 min；(13)甩去PBS液，每張切片上應該加

100μL左右新鮮配制的DAB溶液進行顯色，在室溫條件下等待5 min左右，在顯微鏡下觀察染色反應,顯色適度時終止反應；(14)PBS液沖洗，自來水沖洗，蘇木精復染核3 min，自來水沖洗，PBS液返藍；(15)切片經梯度乙醇脫水干燥，中性樹膠封固。

1.3 判斷標準[3]HMGB1主要是在細胞核中進行表達,當染色呈現出黃色或棕黃色的時候，可以判定為陽性細胞。每張切片均采用隨機方式選取10個400倍的視野,當陽性細胞的出現率達到30%以上的時候，可以判定為陽性表達,當陽性細胞的出現率達30%～50%時，判定為+,當陽性細胞的出現率達到50%～70%時，判定為++,當陽性細胞的出現率達到70%以上時，判定為+++。MMP-9陽性染色為在細胞質和/或細胞膜有棕黃色的顆粒狀物質出現。根據陽性細胞數所占的具體比例及染色的實際強度可以分為：無陽性染色細胞可以判定為--,陽性染色細胞數保持在20%以下,染色呈現淡黃色,個別可以表現為黃至棕黃色，判定為+；陽性細胞數保持在20%～50%,染色呈現黃色，判定為++；陽性細胞數保持在50%以上,染色呈現強度黃至棕黃色,只有少數顯示為淡黃色，判定為+++。

1.4 統計學方法 應用SPSS 18.0統計軟件進行處理。各組間樣本率差異的比較采用Fisher確切概率法,P＜0.05為差異有統計學意義。HMGB1及MMP9表達相關性采用Spearman等級相關分析。患者生存率分析采用生存曲線評估。

2 結果

在Ⅱ型組中HMGB1、MMP-9陽性率顯著高于Ⅰ型組（P＜0.05），HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宮內膜癌組織中呈現高表達。見表1。

表1 2組檢測結果比較（n）

3 討論

研究顯示[4]，子宮內膜癌的發生多在絕經后婦女。調查顯示，人口老齡化的日益嚴峻，子宮內膜癌的發病率也在逐年升高。在歐美等一些發達國家，子宮內膜癌疾病的發生率，在所有女性生殖道惡性腫瘤類疾病中高居首位，而目前在我國，子宮內膜癌的發生率位居女性生殖道惡性腫瘤的第3位[5]。

HMGB1是在核內非組蛋白染色質內廣泛分布的一種結合蛋白類物質，目前已經發現HMGB1與其相應的受體，晚期糖基化終末產物受體(RAGE)在多種惡性腫瘤中呈現出高表達。研究顯示[6]，HMGB1的過度表達會直接導致一些基因表達功能失調，腫瘤的產生、浸潤、轉移等病理學發展過程產生積極的促進作用。有學者研究指出，HMGB1可以與甾體類激素受體之間產生相互作用，特別是在與雌激素水平密切相關的乳腺癌細胞中[7]。HMGB1在多種惡性腫瘤中都會以高表達狀態存在，譬如宮頸鱗狀細胞癌、乳腺癌、前列腺癌、胃癌、子宮內膜癌等[8]。

本研究結果顯示，HMGB1及MMP9在Ⅰ型子宮內膜癌組織中呈現高表達；HMGB1及MMP9在Ⅱ型子宮內膜癌組織中表達水平高于Ⅰ型子宮內膜癌組。由此可知，HMGB1及MMP9在子宮內膜癌的形成中可能具有相關促進作用，即呈正相關。在今后的臨床工作中，應對其給予足夠的重視。

[1] 劉晶晶,顧振鵬,姚麗娟,等.RECK與MMP-9基因在子宮內膜癌中的表達及臨床意義[J].國際婦產科學雜志,2012,39(1):95-97.

[2] 馮力元,吳佳捷.小干擾RNA抑制HMGB1表達對子宮內膜癌細胞侵襲與遷移的影響[J].中南大學學報(醫學版),2014,39(1):36-42.

[3] 賀小燕,王海琳,陳曉紅,等.HMGB1在卵巢癌中的表達及臨床意義[J].現代生物醫學進展,2011,11(4):695-697.

[4] 肖建彪,陳龍華,陳斌.HMGB1在多種人體惡性腫瘤組織、癌旁組織中的表達及意義[J].山東醫藥,2013,53(12):1-3.

[5] 殷旭光,劉紫燕,王楚平.HMGB1和VEGF在妊娠期高血壓疾病中的作用及其相關性研究[J].中國優生與遺傳雜志,2015,23(3):18-19.

[6] 林麗,趙福杰,劉旭.基質金屬蛋白酶抑制基因RECK在子宮內膜癌中的表達及意義[J].山西醫藥雜志(下半月刊),2013,42(2):135-137.

[7] 呂穎慧，龔玉華，刁勇，等．高遷移率族蛋白A2在腫瘤發生和血管形成中的雙重作用[J].中國臨床藥理學與治療學,2011,16:975-980．

[8] 楊國良,薄雋杰.高遷移率族蛋白A2與腫瘤[J].中國癌癥雜志,2010, 20:156-160．

10.3969/j.issn.1009-4393.2016.30.017

江西 330006 江西省婦幼保健院（華金仁 曾丹）