腹腔鏡與開腹結腸癌根治術對機體免疫功能和腫瘤轉移潛能的影響

陜西省核工業二一五醫院肝膽外科(咸陽 712000)

何盟國　沈乃營　畢建斌△　 張天政　鄭　康　譚　棟　王智翔▲

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腹腔鏡與開腹結腸癌根治術對機體免疫功能和腫瘤轉移潛能的影響

陜西省核工業二一五醫院肝膽外科(咸陽 712000)

何盟國沈乃營畢建斌△張天政鄭康譚棟王智翔▲

摘要目的：比較腹腔鏡與開腹結腸癌根治術對患者免疫功能以及腫瘤轉移潛能的影響,進一步評估腹腔鏡結腸癌根治術的安全性與可行性。方法：62例腹腔鏡結腸癌切除(腹腔鏡組)患者和83例開腹結腸癌根治術(開腹組)患者。通過檢測外周血中CD3+、CD4+、CD8+T細胞和NK細胞的水平比較不同手術方式對機體免疫功能的影響,同時通過RT-PCR 檢測游離外周血GCC-mRNA對比腹腔鏡與開腹結腸癌根治術對腫瘤轉移潛能的影響。結果：兩組患者術后外周血中CD3+、CD4+、CD8+T細胞較術前均有降低,術后逐漸恢復,但腹腔鏡組恢復顯著快于開腹組；NK 細胞的水平在術前術后以及兩組之間均無明顯差異。兩組術后外周血GCC-mRNA陽性率要明顯高于術前,但腹腔鏡與開腹組GCC-mRNA陽性率比較無明顯差異。結論：結腸癌根治術主要影響患者T細胞介導的細胞免疫，腹腔鏡結腸癌根治術患者術后免疫系統恢復顯著快于開腹手術；腹腔鏡與開腹手術對患者術后腫瘤轉移影響無差異，腹腔鏡結腸癌根治術安全、可行。

主題詞結腸腫瘤腹腔鏡檢查免疫,細胞腫瘤轉移

結腸癌是胃腸道中常見的腫瘤,以41～65歲發病率高，嚴重威脅中老年人健康。目前主要采用手術治療、放療、化療、生物治療等多種治療手段,其中手術治療是治療結腸癌的最主要方式。隨著腹腔鏡技術的推廣與應用,微創化已經成為手術方式的主要趨勢,但結腸癌腹腔鏡根治術能否成為治療結腸癌的標準術式一直備受爭議[1-3],主要是對腹腔鏡結腸癌切除術的患者術后生活質量、腫瘤復發、手術安全性和可行性缺乏可靠的證據。本研究似探討腹腔鏡與開腹結腸癌根治術對機體免疫功能和腫瘤轉移潛能的影響，現報道如下。

資料和方法

1一般資料2013年2月至2015年1月我們行結腸癌腹腔鏡切除術和開腹手術的病例145例，納入標準：術前通過結腸鏡+病理活檢確診為結腸癌患者；患者既往無其他惡性腫瘤；Ducks法分期A、B、C期，排除D期；不伴有結腸其他疾病；剔除急診手術和中轉開腹病例。145例患者隨機分為兩組，腹腔鏡組62例,男38例,女24例,平均年齡56 ±8歲；A期18例,B期36例,C期8例；行腹腔鏡左半結腸切除25例,右半結腸37例,平均清掃淋巴結個數13±6枚,平均住院時間13±5d。開腹組83例,男41例,女42例,平均年齡58± 6歲；A期21例,B期44例,C期18例；行腹腔鏡左半結腸切除35例,右半結腸48例,平均清掃淋巴結個數14±3.4枚,平均住院時間14±4d。兩組患者一般資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

2方法分別于入院時、術后當日、術后3日,術后1周4次靜脈采血,采用EDTA抗凝,通過流式細胞技術測定兩組患者血液中T淋巴亞群CD3+、CD4+、CD8+和NK細胞的水平,比較不同手術方式對機體免疫功能的影響。于入院時和術后即刻采集外周血5 ml(棄去前2 ml),通過RT-PCR 檢測游離外周血GCC-mRNA,研究腹腔鏡和開腹結腸癌根治術對腫瘤細胞轉移潛能的影響。

結果

1兩組免疫功能比較見表1。①兩組患者術后外周血中CD3+T細胞顯著降低，術后逐漸恢復。腹腔鏡組恢復快于開腹組，腹腔鏡組術后3d和7d,CD3+T細胞(%)顯著高于開腹組(P<0.05)。②CD4+T細胞腹腔鏡組在術后當日、術后3 d，術后7 d顯著高于開腹組(P<0.05)。③腹腔鏡組CD8+T細胞在術后當日,術后3d無差異，但術后7d顯著高于開腹組(P<0.05)。④兩組患者NK細胞在手術前后均無顯著差異。結腸癌患者在手術后免疫力顯著下降，術后腹腔鏡組CD3+T細胞、CD4+T細胞、CD8+T細胞恢復顯著快于開腹手術。

表1　不同手術方式對患者免疫系統的影響

注：與開腹組比較，*P<0.05

2兩種手術方式對腫瘤轉移潛能的影響 見表2。①腹腔鏡組患者術前和術后即刻GCC-mRNA陽性率分別為58.06%、74.19%,開腹組分別為56.63%和67.47%,兩組患者GCC-mRNA陽性率術后均顯著高于術前(P<0.05)；可能與術中牽拉出血使腫瘤細胞脫落以及擠壓等操作使腫瘤細胞通過淋巴結轉移增加有關。②腹腔鏡組與開腹組患者術前術后GCC-mRNA陽性率比較，差異均無統計學意義(P>0.05)。

表2 　兩種手術方式對腫瘤轉移潛能的影響 [n(%)]

注：與術前比較，*P<0.05

討論

已有研究表明,T細胞介導的細胞免疫反應在殺傷腫瘤細胞、控制腫瘤生長中起重要作用,動態監測患者T細胞亞群是判斷腫瘤術后預后的重要參考。CD3分子是T細胞識別抗原的主要識別單位,主要用于標記T淋巴細胞。NK介導的非特異性殺傷作用,通過ADCC作用和分泌IFN-γ和TNF-α等分泌因子,對腫瘤細胞進行殺傷和清除,可用于腫瘤預后的觀察指標[4-5]。腹腔鏡治療結腸癌雖已逐步用于臨床,但CO2氣腹環境對腫瘤的復發和轉移一直存在爭議,大量的體外實驗和動物實驗也表明CO2氣腹確實對于腫瘤的轉移和復發具有一定的影響，但是缺乏人體的具體數據支持[6]。鳥苷酸環化酶C(GCC)是一類局限地表達于正常腸黏膜的大腸桿菌內毒素受體,結腸癌中只有在腫瘤轉移情況下血液中才能檢測到GCC的表達,所以通過檢測游離外周血中的GCC-mRNA的水平可以評估腫瘤的復發和轉移情況[7-8]。

目前的研究提示,GCC 是檢測結腸癌患者外周血中游離腫瘤細胞較為理想的目的基因。因此本課題在研究開腹與腹腔鏡結腸癌根治組的免疫系統差別的基礎上,進一步探索腹腔鏡是否影響結腸癌患者血液中GCC 表達,從而進一步研究腹腔鏡手術對結腸癌患者腫瘤轉移潛能的影響。為進一步研究氣腹對腫瘤組織學的影響,是否加速腫瘤細胞脫落、氣化的速度,切除腫瘤表面少許組織,以便更好的為氣腹是否改變、促進腫瘤細胞脫落轉移提供理論基礎。本實驗主要采取術后當日，術后3 d、術后7 d的血液來研究手術是否具有促進轉移的作用以及腹腔鏡結腸根治術和開腹結腸癌根治術對于促進腫瘤轉移是否有差異。hTERT mRNA,CEA mRNA等受原發灶的影響太大，對于術后轉移的價值有限。結腸癌中只有在腫瘤轉移情況下血液中才能檢測到GCC的表達,所以通過檢測游離外周血中的GCC-mRNA的水平可以評估腫瘤的復發和轉移情況,本實驗選取GCC-mRNA作為腫瘤轉移的標志。結果表明，腹腔鏡組與開腹組患者手術前及術后GCC-mRNA陽性率比較差異無統計學意義(P>0.05)。由于本研究樣本量有限,無法完全排除手術外其他方面的影響,所以腹腔鏡結腸癌根治術的可靠性和安全性還需進一步大樣本臨床研究。

參考文獻

[1] Xie M,Qin H,Luo Q,etal.Laparoscopic Colorectal Resection in Octogenarian Patients: Is it Safe? A Systematic Review and Meta-Analysis[J].Medicine (Baltimore),2015,94(42):e1765.

[2]Allard MA,Cunha AS,Gayet B,etal. Early and Long-term Oncological OutcomesAfter Laparoscopic Resection for Colorectal Liver Metastases：A Propensity Score-based Analysis[J].Annals of surgery,2015,262(5)：794-802.

[3] Chand M,De'Ath HD,Siddiqui M,etal.Obese patients have similar short-term outcomes to non-obese inlaparoscopic colorectal surgery[J].World J GastrointestSurg,2015,22(10):261-266.

[4] Lin YC,Chang LY,Huang CT,etal.Effector/memory but not naive regulatory T cells are responsible for the loss of B concomitant tumor immunity [J].Immunol,2009,182：6095-6104.

[5] Wei HX,Chuang YH,Li B,etal.CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells protect against T cell-mediated fulminant hepatitis in a TGF beta-dependent manner in mice[J].Immunol,2008,181：7221-7229.

[6] Hao YX,Zhong H,Zhang C,etal. Effects of simulated carbon dioxide and helium peumoperitoneum on proliferation and apoptosis of gastric cancer cells[J]. World J Gastroenterol,2008,14：2241-2245.

[7] 陸俊,吳小紅,洪巖,等.結腸癌患者外周血中鳥苷酸環化酶C mRNA的診斷價值[J].江蘇醫藥,2015(14)：4-5.

[8] 戴慶福,姜添榮,林玉梅,等.鳥苷酸環化酶C在大腸癌患者外周血中的表達及其臨床意義[J].分子診斷與治療雜志,2014,33(6)：398-401.

(收稿：2015-12-21)

【中圖分類號】R735.35

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.06.014

△西安交通大學第一附屬醫院肝膽外科

▲通訊作者