VEGF 和bFGF在增生性玻璃體視網膜病變患者玻璃體中的表達及意義

西安市第四醫院眼科(西安710004)　薛曉輝

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VEGF 和bFGF在增生性玻璃體視網膜病變患者玻璃體中的表達及意義

西安市第四醫院眼科(西安710004)薛曉輝

摘要目的：探討血管內皮生長因子 (VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)在增生性玻璃體視網膜病變(PVR)患者玻璃體中的表達及意義。方法：選取經B超及眼底熒光血管造影檢查診斷為增生性玻璃體視網膜病變的患者42例(外傷性24例,原發性18例)，同時選取同時間段符合本研究要求行眼球摘除的外傷患者28例作為對照組，分別采取玻璃體標本檢測VEGF 和bFGF含量。結果：外傷性PVR和原發性PVR VEGF和bFGF含量均明顯高于對照組(P<0.01)；外傷性PVR中D級VEGF含量高于B級、C級,原發性PVR中C級、D級VEGF含量高于B級(P<0.05)；外傷性PVR 中VEGF含量均低于同級別原發性PVR中VEGF含量(P<0.05或P<0.01)；外傷性PVR中bFGF含量D級>C級>B級，原發性PVR中bFGF含量C級、D級>B級(P<0.05)；外傷性PVR中bFGF含量均高于同級別原發性PVR中bFGF含量(P<0.05或P<0.01)。結論：外傷性PVR和原發性PVR 中VEGF和bFGF含量均明顯高于對照組,且呈現出和病變程度正相關的趨勢，VEGF在原發性PVR中表現出較高主導性，而bFGF在外傷PVR中表現出較高主導性,這為進一步研究其發病機制提幫助。

主題詞玻璃體視網膜病,增生性血管內皮生長因子成纖維細胞生長因子因果律

增生性玻璃體視網膜病變(PVR)作為一種在視網膜表面、視網膜下和玻璃體腔內增生性的疾病,近年來發病率持續升高，其發病原因主要由于神經膠質細胞、視網膜色素上皮細胞和炎性細胞等增生導致。臨床常見的發病因素涉及外傷、炎癥性、血管性視網膜病變等，或由于裂孔源性視網膜脫離長期未得到復位或者術后細胞纖維增生導致膜的收縮牽拉引起視網膜脫離[1]。臨床治療多采用手術或藥物治療，但效果不佳。本研究通過探索血管內皮生長因子 (VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)與增生性玻璃體視網膜病變的相關性，試圖為研究其發病機制提供幫助,為臨床靶向性的治療提供依據。

資料與方法

1一般資料本研究通過醫院倫理委員會批準,并告知患者本研究具體內容及方法，患者簽署知情同意書。選取2010年1月至2015年11月我院就診并經B超及眼底熒光血管造影檢查診斷為增生性玻璃體視網膜病變患者42例。診斷標準參考惠延年《眼科學(第5版)》[2],分級方法參考1983年國際視網膜學會分級方法[3]。納入標準：①經B超及眼底熒光血管造影檢查有影像學改變；②經確診為因外傷或為孔裂性視網膜脫離致PVR;③患者視網膜病變分級為B～D級；④入院各項常規指標(血糖、血常規、心電圖等)正常者。排除標準：①排除糖尿病并發癥等系統疾病致眼底病變患者；②排除研究前有鞏膜扣帶、眼內注氣或視網膜光凝等手術治療史患者；③排除肝腎功能不全或凝血功能不全影響本次手術治療患者。外傷性PVR患者24例,原發性PVR患者18例,男25例,女17例,均為一只眼發病,年齡24～69歲,平均46.6±13.9歲,體質指數平均22.4±2.4 kg/m2，病程2～48周,平均16.5±7.9周。外傷性PVR患者病變分級：視網膜B級13例,C級7例,D級4例；原發性PVR患者病變分級：視網膜B級10例,C級4例,D級4例。同時選取同時間段在我院急診入院后行眼球摘除的外傷患者28例,男18例,女10例,年齡23～70歲,平均45.6±13.9歲,均排除其他眼底病變，為對照組。

2術中標本采集手術過程均由同一醫師完成,采用Alcon Accurus 400VS玻璃體切割儀,行標準三切口玻璃體切除術,灌注管未打開前,首先使用玻璃體切割頭(19G)切去中央玻璃體0.2 ml作為標本,接著進行氣液交換、視網膜光凝、注藥或硅油等填充。

3檢測方法采取酶聯免疫分析法(ELISA)檢測VEGF；采取免疫組化染色法測定bFGF的陽性表達。VEGF Elisa分析試劑盒和bFGF免疫組化試劑盒、抗體、DAB顯色劑，均購自博士德生物科技公司。

4數據分析采用酶標儀對VEGF進行含量水平測定，采用Image-Pro Plus圖像分析軟件對bFGF免疫組化圖片進行分析，400倍光鏡下隨機選取5個視野進行分析，計算平均積分吸光度值，吸光度值和陽性表達率呈正比，陽性率越高說明細胞增生越多。免疫組化染色后細胞核有明顯棕黃色顆粒的出現視為陽性標準，胞漿染成棕黃色不視為陽性，并且對增生細胞邊緣非特異性染色予以排除。

結果

1VEGF含量檢測結果見表1。外傷性PVR和原發性PVR VEGF含量均明顯高于對照組(P<0.01)；外傷性PVR中D級VEGF含量高于B級、C級。原發性PVR中C級、D級VEGF含量高于B級(P<0.05)；外傷性PVR VEGF含量均低于同級別原發性PVR的VEGF含量(P<0.05或P<0.01)。

表1　VEGF的表達水平

2bFGF含量檢測結果見表2。外傷性PVR和原發性PVR bFGF含量均明顯高于對照組(P<0.01)；外傷性PVR中bFGF含量D級> C級>B級；原發性PVR中bFGF含量C級、D級>B級(P<0.05)；外傷性PVR bFGF含量均高于同級別原發性PVR的bFGF含量(P<0.05或P<0.01)。

表2　bFGF的平均積分吸光度值

討論

VEGF和血管內皮細胞的增生關系密切,可以調節相關酶的活性,刺激受體產生生物效應,有研究顯示：其含量的變化表現出和視網膜病變的相關性,VEGF及其受體在正常角膜各層均有表達,當眼底玻璃體視網膜增生病變發生時,其前房液中表達率顯著升高,引發內皮細胞增生,前移等病理性改變,表明VEGF因子對視網膜上皮細胞的分化和增值有重要影響[4]。bFGF作為一種能促進細胞分裂的細胞活化因子廣泛分布于人體各種組織細胞中,可促進視網膜色素上皮細胞、視網膜膠質細胞和成纖維細胞增殖,參與視網膜病變過程。有研究表明[5-6]：外傷容易導致視網膜炎癥和玻璃體積血,容易引發巨噬細胞和成纖維細胞細胞大量增值,進而促進視網膜上皮細胞的增生表達,當視網膜病變發生時,bFGF基因大量表達,合成一種多肽物質,促進視網膜色素上皮細胞的分裂增殖。彭艷陽等[7]通過研究bFGF對視網膜上皮細胞的影響,結果表明bFGF可以加速視網膜上皮細胞的分裂期轉變,進而促進增值。

本研究結果顯示外傷性PVR和原發性PVR VEGF和bFGF含量均明顯高于對照組并且呈現出和病變程度正相關的趨勢,表明兩種細胞因子參與了PVR的發病過程；VEGF含量在原發性PVR中高于外傷性PVR,表明其參與發病可能主要通過內源性物質刺激而大量表達,而bFGF含量在外傷性PVR中較高，表明其對外傷性相關刺激更為敏感，在外傷引發的病變中起主導作用。可見雖然增生性視網膜玻璃體病變過程涉及的增生細胞有巨噬細胞、成纖維細胞、視網膜色素上皮細胞及神經膠質細胞等,但外傷性損傷和內源性損傷的發病機制可能存在一定區別,如當外傷等外來炎癥刺激視網膜玻璃體時,巨噬細胞等免疫細胞的表達可能會引起堿性成纖維細胞因子活化,進而驅使相關細胞因子大量增殖，產生纖維增殖膜，而內源性視網膜玻璃體病變可能由于視網膜自身病變或其它病原性病變引發血管內皮細胞增殖,產生了血管性病變,進而引發視網膜脫離等病變。

綜上,外傷性PVR和原發性PVR 中VEGF和bFGF含量均明顯高于對照組并且呈現出和病變程度正相關的趨勢，VEGF在原發性PVR中表現出較高主導性,而bFGF在外傷PVR中表現出較高主導性,兩種因子參與PVR的發病機理存在一定差異,這將為進一步研究其發病機制提幫助。

參考文獻

[1]焦明菲,顏華.增生性玻璃體視網膜病變的藥物治療[J].眼科研究,2010,28(4)：381-383.

[2] 惠延年.眼科學[M].6版.北京：人民衛生出版社,2006：6.

[3] Retina Society Terminology Committee.The classification of retinal detachment with proliferative vitreoretinopathy[J].Ophthalmology,1983,90(2)：121-125.

[4] 石蕊,薛雨順,王峰.糖尿病視網膜病變合并白內障患者血清及房水中VEGI和VEGF的含量分析[J].陜西醫學雜志,2015,44(10)：1393-1395.

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[6]徐洋,周榮奎,崔海濱,等.曲安奈德預防術后增殖性玻璃體視網膜病變患者的臨床分析[J].中國現代醫生,2015,53(9):88-90.

[7]彭艷陽,吳偉,曾麗娜,等.重組人表皮生長因子和堿性成纖維生長因子促進人角膜上皮細胞的增殖[J].中國組織工程研究,2014,18(17)：1045-1046.

(收稿：2016-01-11)

【中圖分類號】R776.4

【文獻標識碼】A

doi：10.3969/j.issn.1000-7377.2016.06.027