宮頸HPV檢測在宮頸癌前病變篩選中的臨床意義

周秋蓮

【摘要】 目的：研究分析宮頸HPV檢測在宮頸癌前病變篩選中的臨床意義。方法：選取2013年1月-2015年1月在筆者所在醫院進行宮頸HPV篩查的1672例患者為分析對象，經TCT初步篩選出335例患者，隨后行宮頸活組織病理檢查及PCR檢測，分析評價HPV的檢測結果與關系。結果：TCT檢查初步篩選出335例，其中NILM 4.48%，ASCUS 9.55%，LSIL 12.24%，HSIL 68.36%，SCC 5.37%。病理檢查結果CINⅠ共56例，CINⅡ共86例，CINⅢ共160例，SCC共18例。TCT檢查在篩查宮頸病變中各分型與病理分級比較差異無統計學意義（字2=5.659，P=0.082>0.05）。335例患者中經PCR檢測，陽性298例（88.96%），陰性37例（11.04%），經卡方Fisher確切概率法統計分析發現，不同病理分級之間PCR檢查比較差異有統計學意義（字2=23.341，P=0.000<0.01）。另外，PCR檢查與病理檢查分級之間結果行Kendall等級相關系數，tau-b=-0.237，P=0.000，PCR檢測與結果具有相關性。另外，病理檢查與PCR檢查統計學分析結果比較差異有統計學意義（字2=10.091，P=0.001<0.01）。以病理檢查結果為金標準，PCR檢測的敏感度為93.13%，特異性為100%。結論：TCT檢查對初步篩選宮頸HPV具有一定的臨床意義，PCR檢測的敏感度較高，且對各級診斷具有高度統一性，病理檢查是診斷的金標準。早期HPV感染的檢測并及時的處理，從而能一定程度上起到預防宮頸癌發生的作用。

【關鍵詞】 宮頸癌； HPV； TCT； PCR； 病理活組織檢查

中圖分類號 R737.33 文獻標識碼 B 文章編號 1674-6805（2016）9-0083-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.9.046

宮頸癌是僅次于乳腺癌而居于女性患者第二位的惡性腫瘤[1]。目前，宮頸癌的篩查多采用宮頸脫落細胞檢查及人乳頭狀瘤病毒（human papillomaviruses，HPV）檢查。HPV可導致人的皮膚或黏膜增生，其感染被認為是宮頸癌發生的一項必要條件，特別是高危型人乳頭瘤病毒（HR-HPV）持續性感染[2]。而有相關研究表明，HPV感染與宮頸癌的發生確實有密切關系，但從HPV感染到宮頸癌的發生需要較長時間，因此HPV檢測的意義在于通過早期HPV感染的檢測并及時的處理，從而能一定程度上起到預防宮頸癌發生的作用[3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以2013年1月-2015年1月在筆者所在醫院進行宮頸HPV篩查的1672例患者為研究對象，患者年齡24～60歲，平均（41.26±14.24）歲。所有患者均已婚或有性生活史，納入研究的所有患者均為非孕期，無自身免疫性相關疾病，無重要臟器功能異常，無其他慢性疾病，均為初診患者。

1.2 材料

液基細胞保存液，細胞過濾器，細胞采樣器，光學顯微鏡，玻片，陰道鏡，蘇木精染液，EA50染液，95%乙醇，鹽酸，橘黃G6，PCR儀，生物傳感芯片閱讀儀，恒溫水浴箱，離心機，人乳頭狀瘤病毒分型檢測試劑，DNA提取試劑等。

1.3 方法

1.3.1 TCT檢查與病理檢查 分別取所有患者的宮頸脫落細胞行液基薄層細胞學檢查（thinprep cytologic test，TCT）檢查。取材前要求患者近期內無性生活、陰道用藥史。具體方法為：患者取截石位，擴陰器擴開陰道，用生理鹽水棉簽輕輕擦拭陰道以拭去分泌物，然后采用細胞采樣器中無菌毛刷同方向刷拭宮頸管，隨后將毛刷上的宮頸脫落細胞洗入細胞保存液中備用。隨后制作薄層細胞涂片，然后進行巴氏染色并光學顯微鏡下觀察，結果以下述判定標準進行判定。經TCT檢查為ASCUS、LSIL、HSIL及SCC需進一步行陰道鏡檢查及取活組織病理學檢查（記為≥ASCUS）。

1.3.2 PCR檢查 然后以上述TCT檢查剩余細胞保存液進行PCR檢測。首先是處理細胞保存液得到HPV的DNA，隨后將擴增混合液、Taq酶配置成PCR反應體系，裝入擴增管后標記好樣本及陽性對照流池內控品，然后加入DNA模版，將配置好的PCR擴增體系放入PCR儀進行擴增。擴增完畢后進行離心，離心后加入陽性對照流池內控品擴增產物，然后95 ℃變性處理。最后采用生物傳感芯片閱讀儀進行檢測。結果判斷以下述判斷標準進行。

1.4 評定標準

1.4.1 液基細胞學檢查分型 無上皮內瘤變或惡性病變（NILM）；不確定意義的不典型麟狀上皮細胞（ASCUS）；低級別麟狀上皮內病變（LSIL）；髙級別麟狀上皮內病變（HSIL）；麟狀細胞癌（SCC）。ASCUS、LSIL、HSIL及SCC為異常。

1.4.2 病理學檢查分級標準 共可分為正常，CIN（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）及SCC。CIN Ⅰ級：異型細胞局限于上皮層的下1/3，為輕度非典型增生。CIN Ⅱ級：異型細胞占上皮層的1/2～2/3，且細胞異型性更明顯，為中度非典型增生。CIN Ⅲ級：異型細胞超過上皮層的2/3，為重度非典型增生。達全層者為原位癌，其細胞異型性十分明顯，核分裂像增多，原位癌可出現病理性核分裂像。

1.4.3 PCR檢測結果判定 有效：陽性對照流池的信號值>40 m°，且陰性對照流池信號值<40 m°；分型探針陽性：探針的信號值≥40 m°；分型探針陰性：探針的信號值<40 m°；無效：陽性對照流池的信號值<40 m°，或者陰性對照流池信號值>40 m°。

1.5 統計學處理

將研究數據錄入統計學分析軟件SPSS 19.0進行統計學處理與分析，計數資料采用字2 Fisher確切概率法檢驗，檢驗水準為α=0.05，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

根據液基細胞學檢查分級標準，1672例通過TCT檢查認為335例患者需要進一步明確檢查（20.04%）。TCT檢查結果報告為335例患者中NILM占4.48%，ASCUS占9.55%，LSIL占12.24%，HSIL占68.36%，SCC占5.37%。

病理檢查結果CINⅠ患者56例中，TCT檢查有異常者占96.43%，TCT檢查有3.57%的誤檢率。另外病理檢查結果CINⅡ患者86例中，TCT檢查有異常者占97.67%，TCT檢查有2.33%的誤檢率。TCT檢查與病理檢查對CINⅢ及SCC的檢出結果一致，見表1。經采用卡方檢驗中Fisher確切概率法統計分析發現，依據病理檢查結果為判定結果金標準，發現TCT檢查在篩查宮頸病變中分型與病理分級比較差異無統計學意義（字2=5.659，P=0.082>0.05）。

335例患者中經PCR檢測，陽性298例（88.96%），陰性37例（11.04%），經采用卡方檢驗中Fisher確切概率法統計分析發現，不同病理分級之間PCR檢查比較差異有統計學意義（字2=23.341，P=0.000<0.01），見表2。

進一步分析發現，PCR檢查時CINⅠ的陽性檢出率為73.21%（41/56），CINⅡ陽性檢出率88.37%（76/86），CINⅢ的陽性檢出率為95.00%（152/160），SCC的陽性檢出率為100%（18/18）。Kendall等級相關系數，tau-b=-0.237，P=0.000，PCR檢測與結果具有相關性。

另外，335例患者病理檢查異常者320例（95.52%），PCR檢測陽性患者298例（88.95%）。病理檢查與PCR檢查統計學分析結果比較差異有統計學意義（字2=10.091，P=0.001<0.01）。以病理檢查結果為金標準，PCR檢測的敏感度為93.13%（298/320），特異性為100%（15/15），陰性預測值為40.54%（15/37）。

3 討論

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，據統計宮頸癌所致女性患者的發病率和死亡率居女性患者惡性腫瘤的第二位，居我國女性惡性腫瘤患者第一位[4]。目前可以肯定的認為，HPV病毒感染是導致宮頸病變甚至癌變的主要因素之一。而通過早期篩查HPV病毒感染情況及明確宮頸是否病變及病變程度，對預防和治療均具有十分重要的臨床意義。

HPV病毒目前存在多種類型，分為低危型（LR-HPV）及高危型（HR-HPV），又特別是HR-HPV的持續性感染大大提高宮頸癌變的可能。研究表明，HR-HPV感染所致宮頸癌變的發生機制可歸納為：HPV病毒基因E區是病毒主要的致病基因調控和表達區域，其中E6、E7基因是主要的致病基因[5]。HPV病毒的DNA可整合到宿主細胞的DNA中，從而使得HPV病毒大量表達E6、E7蛋白，而這兩種蛋白能夠一定程度上抑制p53和Rb基因產物，繼而導致癌蛋白產生并影響宿主細胞的周期蛋白，最終可導致宿主細胞的細胞周期紊亂而癌變[6]。

從HPV的致病機制及高危因素分析，有效的檢測HPV感染情況及HPV類型，有助于評估病情風險程度及指導采取合理的治療措施。宮頸上皮樣內瘤樣病變（cervical intraepithelial neoplasm，CIN）是宮頸癌前病變的一組統稱。從CINⅠ～CINⅡ、CINⅢ～宮頸浸潤癌需要3～15年。因此更加肯定早期檢測HPV感染情況具有重要的臨床意義。

針對HPV的檢測，目前有諸多的方式方法，其中最常采用的TCT、病理學活組織檢查，HPV-DNA分析及PCR法定量分析等。本分析首先采用TCT初步篩查，1672例篩查者共篩查出335例異常患者。隨后對≥ASCUS行病理檢查，最終分析結果提示，依據病理檢查結果為判定結果金標準，TCT檢查在篩查宮頸病變中各分型與病理分級比較差異無統計學意義（P>0.05）。也就是證明，TCT檢查對篩查宮頸病變具有一定的價值，并且對不同分級或分型的宮頸病變的檢查均可靠。這主要體現于采用TCT檢查，能有效的去除樣本中宮頸黏液及一些炎性細胞的影響，從而具有較高的敏感性和特異性。

對TCT初篩異常的患者，進一步行HPV病毒PCR定量分析及取宮頸組織病理檢查。得到的結果提示，335例患者中經PCR檢測，陽性率88.96%，且不同病理分級之間PCR檢查比較差異有統計學意義（P<0.01）。病理檢查與PCR檢測結果比較，差異有統計學意義（P<0.01），病理檢查相對更加準確，但PCR檢測的敏感度可高達93.13%。

總體分析，TCT檢查簡便、快捷，準確率較高，用于宮頸病變篩查能夠有效的發現宮頸病變，但對于TCT檢查異常者需要進一步陰道鏡下取活檢行病理檢查，以降低宮頸癌的漏診率。且相對PCR而言，病理檢查有較高的特異度和靈敏度，是宮頸癌及癌前病變檢查的首選方法。通過及早有效的篩查或檢查，其深遠的臨床意義在于早期發現宮頸早期病變，通過藥物或手術治療方式避免宮頸癌變的可能。

參考文獻

[1] Cai H B，Ding X H，Chen C C.Prevalence of single and multiple human papillomavirus types in cervieal cancer and precursor lesions in Hubei China[J].Oncology，2009，76（3）：157-159.

[2] Moberg M，Gustavsson I，Gyllensten U.Type specific associations of human papillomavirus load with risk of developing cervical carcinom ainsitu[J].Int J Cancer，2004，112（5）：854-857.

[3]李明霞，戴淑真，劉麗芝，等.高危型 HPV 檢測在宮頸病變診斷中的價值[J].山東醫藥，2009，49（6）：4-7.

[4] Dhan.D，Torkko K C，Shroyer K R.Human papillomavirus testing and molecular markers of cervical dysplasia and carcinoma[J].Cancer，2007，111（1）：1-14.

[5] Castellsague X，Diaz M，deSanjose S，et al.Worldwide human papillomavirus etiology of cervical adenoearcinoma and its cofactors：implications for seroenlng and prevention[J].J Natl Cancer Inst，2006，98（5）：303-315.

[6] Li L，Da J.Antiproliferative activity and toxicity of 2-methoxyestradiol in cervical cancer xenograft mice[J].Gynecol Cancer，2005，15（2）：301-307.

（收稿日期：2015-11-27）