滇龍膽地上部分資源綜合利用的化學研究

黃福榮

[摘 要]目的：通過現代化的研究手段，對滇龍膽地上部分的化學成分進行測定，為綜合利用滇龍膽地上部分資源，擴大藥用部位提供依據。方法：利用色譜、光譜等方法對其化學成分進行研究并進行結構鑒定。結論：得到6個單體化合物，其中3個分別為龍膽苦苷、β-谷甾醇、熊果酸，剩余3個有待鑒定。

[關鍵詞]滇龍膽；龍膽苦苷

[中圖分類號]R282 [文獻標識碼]A

龍膽來源于龍膽科植物條葉龍膽Gentiana manshurica Kitag.、龍膽G.scabra Bge.、三花龍膽G.triflora Pall.、堅龍膽G.Rigescens Franch.的干燥根及根莖。為多年生草本，高30-60厘米；根黃白色，繩索狀，長20厘米以上。莖直立，粗壯，常帶紫褐色，粗糙。葉對生，卵形或卵狀披針形，長3-7厘米，寬1-2厘米，有3-5條脈，急尖或漸尖，無柄，邊緣及下面主脈粗糙。花簇生莖端或葉腋；苞片披針形，與花萼近等長；花萼鐘狀，長2.5-3厘米，裂片條狀披針形，與萼筒近等長；花冠筒狀鐘形，藍紫色，長4-5厘米，裂片卵形，尖，褶三角形，稀二齒裂；雄蕊5，花絲基部有寬翅；花柱短，柱頭2裂。蒴果矩圓形，有柄；種子條形，邊緣有翅。分布于朝鮮，蘇聯，日本，及我國黑龍江、吉林、遼寧、浙江等地。生草甸、灌叢或林緣。根入藥，能去肝膽火。前三種主產于東北地區，藥材俗稱關龍膽，是全國范圍內的主流品種；后一種主產于云南，藥材俗稱堅龍膽、滇龍膽，是西南和華南地區的主流品種，生于海拔1100-3000m的山地、草地、灌叢中、林下及山谷，分布于湖南、廣西、貴州、四川、云南等地。龍膽草為龍膽科龍膽屬植物。又名龍膽（《本經》），陵游（《本經》），草龍膽（《本草圖經》），苦龍膽草、地膽草（《滇南本草》），膽草（《藥品化義》），山龍膽（《浙江中藥手冊》），四葉膽（《廣西中獸醫藥植》），水龍膽（《江蘇植藥志》）。根及根莖入藥。味苦，性寒。歸肝、膽經。有清熱燥濕，瀉肝膽實火的作用。主治高血壓，頭暈耳鳴，膽囊炎、急性傳染性肝炎、陰部濕癢、濕熱黃疸、瘡癤癰腫，口苦和驚風等癥，為保肝利膽之良藥。

龍膽最早記載于《神農本草經》，列為上品，記其：“龍膽，一名陵游。味苦澀，主骨間寒熱，驚癇邪氣，續傷疤，定五臟，殺蠱毒。久服益智不忘，輕身耐老”。后世歷代本草也均收載本品。在中醫藥應用中，龍膽味苦性寒，能清熱燥濕，瀉肝膽火。以龍膽為主要藥物的經典方劑有龍膽瀉肝湯、瀉青丸、當歸龍薈丸等。而在國外植物藥應用中，龍膽也是常用品種，主要用作苦味健胃劑[4]。龍膽根莖呈不規則的塊狀，長1～3cm，直徑0.3～1cm；表面暗灰棕色或深棕色，上端有莖痕或殘留莖基，周圍和下端著生多數細長的根。根圓柱形，略扭曲，長10～20cm，直徑0.2～0.5cm；表面淡黃色或黃棕色，上部多有顯著的橫皺紋，下部較細，有縱皺紋及支根痕。質脆，易折斷，斷面略平坦，皮部黃白色或淡黃棕色，木部色較淺，呈點狀環列。氣微，味甚苦。堅龍膽 表面無橫皺紋，外皮膜質，易脫落，木部黃白色，易與皮部分離。

現代化學成分研究顯示，滇龍膽根含裂環烯醚萜甙類苦味成份：龍服苦甙，當藥苦甙，當藥甙，痕量苦龍膽酯甙，痕量苦當藥酯甙；苦甙總含量5.10%，龍膽苦甙含量5.01%。地上部分含龍膽堿，秦艽堿乙（gentianidine），秦艽堿丙（gentianal），β-谷甾醇（β-sitosterol）。但對滇龍膽地上部分至今尚無化學成分研究的報道。龍膽瀉肝湯是龍膽在臨床上應用最為廣泛，瀉肝膽實火和清利肝經濕熱。隨著臨床研究的深入，應用面不斷地擴大，主要的有以下幾個方面：治療肝膽疾病、高血壓、急性腎盂腎炎、病毒性角膜炎、皮膚病、急性咽炎、慢性支氣管炎、上呼吸道感染、結膜炎等。

目前尚作為廢棄物的滇龍膽地上部分，若能開發利用，將會使龍膽藥物資源更為充分的利用。滇龍膽資源主要分布云南中部及中南部的丘陵山區，人工種植的發展也集中在該地區，其地上部分資源的綜合利用，不僅提高龍膽種植產業的經濟效益，還能在一定程度上緩解龍膽的資源緊張態勢。

1 儀器與材料

材料：硅膠G和薄層層析板為青島海洋化工廠產品；Sephadex LH-20凝膠。

常用試劑：環己烷、乙酸乙酯、氯仿、丙酮、甲醇。

滇龍膽地上部分藥材于2015年8月采集于云南省境內，經云南省農業科學院藥用植物研究所張金渝副研究員鑒定。

2 提取與分離

2.1 提取

取638.4g干燥的滇龍膽地上部分藥材，粉碎成粗粉，用95%乙醇回流提取，減壓回收，得到浸膏102.2g，將其懸浮于水中，用乙酸乙酯和正丁醇分別萃取，回收溶劑得到正丁醇部分39g（Fr-A）、乙酸乙酯部分36g（Fr-B）、水層棄去。

2.2 分離

Fr-A（正丁醇萃取部分）用甲醇溶解，硅膠G（45g）拌樣，經硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇（20：1至3：1）進行梯度洗脫，收集流份（500ml/份），將洗脫液減壓回收，用TLC檢查，合并色點相同的流份，得到2個部分（Ⅰ、Ⅱ、）。

其中，Ⅰ部分靜置后析出白色粉末用甲醇-丙酮反復重結晶，經TLC檢查為一純品，標記為化合物Fr-A-1（986mg）。Ⅱ部分回收溶劑，約重3.4g，經反復凝膠柱層析后，在收集液（18-29瓶）中有黃白色粉末析出，用甲醇反復重結晶后，得到一純品，標記為化合物Fr-A-2（235mg）；在收集液（39-62瓶）中析出黃色顆粒狀結晶，TLC檢查發現含有少量的雜質，將粉末用甲醇溶解后過凝膠柱色譜，重結晶后得到一純品，標記為化合物Fr-A-3（121mg）。

Fr-B（乙酸乙酯部分）用乙酸乙酯溶解，硅膠G（40g）拌樣，室溫揮干后經硅膠柱色譜分離，用環己烷-乙酸乙酯（0：100-100：0）梯度洗脫，收集流份（250ml/份），將洗脫液減壓回收，用TLC檢查，合并色點相同的流份，得3個部分（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）。

其中，Ⅰ部分為白色蠟狀固體，經TLC初步檢查為一純品，標記為化合物Fr-B-3（88mg）；Ⅱ流份靜置后析出無色針狀結晶，濾出后TLC檢查為一純品，標記為化合物Fr-B-1（45mg）；Ⅲ流分靜置后析出白色粉末，濾出后TLC檢查為一純品，標記為化合物Fr-B-2（23mg）。

3 實驗結果

從滇龍膽地上部分中，用各種色譜方法分離純化，共得到6個單體化合物，即化合物Fr-A-1（986mg）、Fr-A-2（235mg）、Fr-A-3（121mg）、Fr-B-1（45mg）、Fr-B-2（23mg）、Fr-B-3（88mg）。

化合物Fr-A-1：經TLC檢查和龍膽苦苷對照品Rf值、顯色現象一致，鑒定為龍膽苦苷，如：圖-1。

化合物Fr-B-1：經TLC分析和β-谷甾醇對照品的Rf值、顯色現象一致，鑒定為β-谷甾醇，如：圖-2。

化合物Fr-B-2：經TLC分析和熊果酸對照品Rf值、顯色現象一致，鑒定為熊果酸，如：圖-3。

化合物Fr-A-2、化合物Fr-A-3、化合物Fr-B-3的結構鑒定工作尚待進行。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會.中國藥典2005年版（一部）[M].北京化學工業出版社，2005.

[2] 國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海科學技術出版社，1999.

[3] 國家藥典委員會.中國藥典2005年版（一部）[M].北京化學工業出版社，2005.

[4] 謝觀.中國醫學大辭典第四冊[M].北京：中國書店出版社，1988.