32個居群滇龍膽地上部分龍膽苦苷的含量測定

黃福榮

[摘 要]目的：云南范圍內(nèi)有各個地州都有龍膽科植物分布，為綜合利用滇龍膽地上部分資源，充分發(fā)揮地方資源優(yōu)勢，為擴(kuò)大藥用部位提供依據(jù)。方法：通過現(xiàn)代研究手段，明確滇龍膽中基本化學(xué)成分，以高效液相色譜法測定云南省內(nèi)不同居群的滇龍膽地上部分龍膽苦苷的含量。結(jié)論：經(jīng)高效液相色譜法測定表明，不同居群的滇龍膽地上部分龍膽苦苷含量在0.15%～4.70%之間，平均含量1.79%，具備開發(fā)利用價值，可為地方經(jīng)濟(jì)服務(wù)。

[關(guān)鍵詞]滇龍膽；龍膽苦苷；高效液相色譜法

[中圖分類號]R284 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A

龍膽草，中藥名，為龍膽科植物龍膽、條葉龍膽、三花龍膽和滇龍膽、的根和根莖。龍膽草在我國具有比較悠久的使用歷史，具有清熱、瀉肝、定驚之功效?！侗静菥V目》記載：“性味苦，澀，大寒，無毒。主治骨間寒熱、驚病邪氣，繼絕傷，定五臟，殺蟲毒?！鼻叭N主產(chǎn)于東北地區(qū)，藥材俗稱關(guān)龍膽，是全國范圍內(nèi)的主流品種；后一種主產(chǎn)于云南，藥材俗稱堅龍膽、滇龍膽，是西南和華南地區(qū)的主流品種，分布于湖南、廣西、貴州、四川、云南等地。龍膽最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，記其：“龍膽，一名陵游。味苦澀，主骨間寒熱，驚癇邪氣，續(xù)傷疤，定五臟，殺蠱毒。久服益智不忘，輕身耐老”。后世歷代本草也均收載本品。在中醫(yī)藥應(yīng)用中，龍膽味苦性寒，能清熱燥濕，瀉肝膽火。以龍膽為主要藥物的經(jīng)典方劑有龍膽瀉肝湯、瀉青丸、當(dāng)歸龍薈丸等。而在國外植物藥應(yīng)用中，龍膽也是常用品種，主要用作苦味健胃劑。龍膽根莖呈不規(guī)則的塊狀，長1～3cm，直徑0.3～1cm；表面暗灰棕色或深棕色，上端有莖痕或殘留莖基，周圍和下端著生多數(shù)細(xì)長的根。根圓柱形，略扭曲，長10～20cm，直徑0.2～0.5cm；表面淡黃色或黃棕色，上部多有顯著的橫皺紋，下部較細(xì)，有縱皺紋及支根痕。質(zhì)脆，易折斷，斷面略平坦，皮部黃白色或淡黃棕色，木部色較淺，呈點(diǎn)狀環(huán)列。氣微，味甚苦。堅龍膽 表面無橫皺紋，外皮膜質(zhì)，易脫落，木部黃白色，易與皮部分離。龍膽瀉肝湯是龍膽在臨床上應(yīng)用最為廣泛，瀉肝膽實(shí)火和清利肝經(jīng)濕熱。隨著臨床研究的深入，應(yīng)用面不斷地擴(kuò)大，主要的有以下幾個方面：治療肝膽疾病、高血壓、急性腎盂腎炎、病毒性角膜炎、皮膚病、急性咽炎、慢性支氣管炎、上呼吸道感染、結(jié)膜炎等。在民間，龍膽草泡水喝是比較常見的應(yīng)用，不僅操作簡單，同時還可以有效的促進(jìn)這種藥材對身體的保健以及治病作用。

1 儀器與試藥

主要儀器和設(shè)備 VI500型高效液相色譜儀，F(xiàn)A3204B電子分析天平（上海精科---上海天平儀器廠），HCP-18超聲清洗器；多功能恒溫超聲波提取機(jī)。

主要試劑和藥品 龍膽苦苷對照品，甲醇（色譜純?nèi)軇?，純化水（超濾膜過濾）；提取處理等用分析純試劑。采集于云南省內(nèi)不同地區(qū)的滇龍膽藥材的地上部分，共32份樣品，生藥鑒定均為龍膽科植物堅龍膽G. rigescens Franch.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

GP-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）：甲醇—水（35：65）為流動相，1.0ml/min流動速度；30℃柱溫；270nm為檢測波長；10μl的進(jìn)樣量。色譜顯示龍膽苦苷對照品吸收峰保留時間約12min，拖尾因子1.05，理論板數(shù)大于3000，分離度大于2，符合含量測定要求（如圖1）。

2.2 對照品溶液配制

用電子分析天平精密稱取龍膽苦苷對照品，加甲醇制成濃度為5mg/ml的溶液，濃度測定后作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液制備

依次稱取滇龍膽地上部分材料，50℃下烘干，粉碎，過7號篩，精密稱取0.5g，加甲醇10ml，放置過夜，超聲提取40min，初濾，微孔濾膜（0.45μm）過濾，取續(xù)濾液為供試品液。

2.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取龍膽苦苷對照品用甲醇制成儲備液（5mg/ml），分別精密吸取儲備液各1ml，甲醇稀釋成0.01mg/ml，0.05 mg/ml，0.1 mg/ml，0.5 mg/ml，1 mg/ml，1.5 mg/ml，2 mg/ml，2.5 mg/ml濃度的對照品溶液，濾過，取10μl進(jìn)樣，按照1.2.1項色譜條件進(jìn)行HPLC分析，以峰面積Y對進(jìn)樣量X進(jìn)行回歸處理，得線性回歸方程：Y=803383.36*X-10226.04，r=0.9999，即龍膽苦苷進(jìn)樣量在0.1μg～25μg時，峰面積和進(jìn)樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.5 重現(xiàn)性考查

取同一居群供試藥材粉末5份，平行制備5份供試品樣品溶液，在GP-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）：甲醇—水（35：65）為流動相，1.0ml/min流動速度的色譜條件測定測得結(jié)果為RSD1.35%（n=5）。

2.6 樣品測定

取各居群的供試品樣品粉末0.5g，制成樣品溶液，按上述色譜條測定，各居群供試品中，龍膽苦苷含量如下：（表一）

3 結(jié)果與討論

含量測定結(jié)果顯示，各居群的滇龍膽地上部分均含有一定量龍膽苦苷，最低含量0.15%，最高含量4.70%之間，平均含量1.79%，具有可開發(fā)利用的價值。

目前，云南省內(nèi)有很多地州都在人工栽培龍膽草，有的地方栽培面積都較大，但目前主要是用其根及根莖，地上部分只是在民間有些應(yīng)用，但都沒有系統(tǒng)規(guī)范的開發(fā)利用，使有限的藥材資源浪費(fèi)了。若能有規(guī)模的加以開發(fā)利用，將會大大改善生態(tài)環(huán)境，還能為農(nóng)村增加經(jīng)濟(jì)收入，帶動農(nóng)村和社會經(jīng)濟(jì)的進(jìn)一步發(fā)展；提高資源的綜合利用，促進(jìn)生態(tài)環(huán)境良性發(fā)展，從一定程度緩解資源匱乏的狀態(tài)。

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