HIV/HCV共感染者T淋巴細胞亞群CD28、CD38分子表達特征的分析

楊國強

（鄭州人民醫院檢驗科，河南 鄭州 450000）

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HIV/HCV共感染者T淋巴細胞亞群CD28、CD38分子表達特征的分析

楊國強

（鄭州人民醫院檢驗科，河南 鄭州 450000）

【摘要】目的 通過觀察HIV/HCV共感染者外周血T淋巴細胞亞群CD28、CD38分子的表達規律，探討其與疾病進展的相關性。方法 本研究選擇本院2012年8月至2014年10月門診HIV感染者40例、HIV/HCV共感染患者40例及體檢中心2014年9～10月體檢健康人群20例，采用流式細胞術檢測HIV/HCV共感染患者（40例）、HIV感染者（40例）和健康人（20例）外周血CD8+T淋巴細胞表面CD28、CD38分子的表達，分析HIV/HCV共感染者CD28、CD38分子在T淋巴細胞亞群的表達特征；按照CD4+T數值對HIV/HCV共感染者進行分組，分析不同CD4+T水平CD8+CD28+、CD8+CD38+的表達差異，探討CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子與疾病進展的相關性。結果 與健康人群及HIV感染者比較，HIV/HCV共感染者CD8+CD38+T細胞的絕對計數與百分比明顯升高，CD8+CD28+T細胞百分比明顯降低；隨著CD4+T水平的降低，CD8+CD28+T有逐漸降低趨勢，CD8+CD38+T有逐漸升高趨勢。結論 HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細胞表面CD28分子表達降低，CD38分子表達升高，且這種變化與患者CD4+T水平密切相關，可作為判斷疾病進展的重要指標。

【關鍵詞】HIV/HCV；T淋巴亞群；CD8+CD28+；CD8+CD38+；疾病進展

丙型肝炎病毒（HCV）/人類免疫缺陷病毒（HIV）共感染不僅能增加血液和肝細胞中HCV載量水平，影響丙型肝炎的疾病進展，而且也能使患者進入艾滋病期的速度加快，但其機制尚不明確[1]。共刺激分子（CD28）、T淋巴細胞激活分子（CD38）在淋巴細胞上的表達水平可反映病毒感染后機體免疫細胞的異常激活程度，同時與抗病毒治療的時間和療效密切相關[2-3]。本研究選擇本院2012年8月至2014年10月門診HIV感染者40例、HIV/HCV共感染患者40例及體檢中心2014年9～10月體檢健康人群20例，通過觀察并比較健康人群、HIV感染者及HIV/HCV共感染者外周血CD8+T淋巴細胞表面CD28、CD38分子表達情況，探討HIV/HCV共感染對機體CD8+T細胞CD28、CD38分子表達的影響，進一步揭示CD8+CD28+、CD8+CD38+與疾病進展的相關性。

1 資料與方法

1.1 臨床資料：40例HIV/HCV共感染患者和40例HIV感染者均為本院2012年8月至2014年10月門診患者，HIV感染的診斷參照《全國艾滋病檢測技術規范（2009年版）》要求確診；HCV感染的診斷參照2010版《丙型肝炎防治指南》。40例HIV/HCV共感染患者中男性23例，女性17例，年齡21～59歲，平均年齡（32.6±6.9）歲；40例HIV感染者中男性25例，女性15例，年齡19～58歲，平均年齡（34.7± 7.3）歲。所有患者均為初次發現并未經抗病毒治療，且1年內無應用免疫制劑史。20例健康人對照來自本院體檢中心2014年9～10月體檢人群，男11例，女9例，年齡23～60歲，平均年齡為（31.5±5.5）歲，所有人肝、腎功能正常，血清抗-HBsAg、抗-HCV、抗-HIV均為陰性，且無其他自身免疫性疾病。三組人群性別、年齡等一般資料比較無統計學差異（P＞0.05）。

1.2 主要實驗試劑：FITC-CD3/PE-CD4/PerCP-CD45/APC-CD8混合抗體，FITC-CD8單克隆抗體，PerCP-CD28單克隆抗體，APC-CD38單克隆抗體，所有抗體均購自美國BD公司。

1.3 指標檢測：各組人群均于清晨空腹采集外周血，EDTA2K抗凝，2 h內流式細胞儀上機檢測。

1.3.1 CD4+、CD8+T細胞絕對計數：將20 μL FITC-CD3/PE-CD4/PerCPCD45/APC-CD8混合抗體加入Trucount管中，然后在管中加入50 μL抗凝全血，振蕩混勻，室溫避光孵育30 min。然后加入450 μL FACS裂解液，振蕩混勻，室溫避光孵育15 min。流式細胞儀（BDFACSCalibur）上機檢測，計算CD4+T、CD8+T淋巴細胞絕對計數。

1.3.2 CD8+CD28+、CD8+CD38+T細胞檢測：流式管中加入100 μL抗凝全血，然后加入10 μL FITC-CD8、10μL PerCP-CD28和2.5 μL APCCD38，混勻，室溫避光孵育15 min。加入溶血素2 mL，振蕩混勻，室溫避光孵育10 min。離心1500 rpm 10 min，棄上清，用PBS緩沖液洗滌細胞1次，然后用300 μLPBS重懸細胞。流式細胞儀上機檢測，用Flowjo軟件分析計算CD8+CD28+、CD8+CD38+T細胞百分比。

1.4 統計學方法：實驗數據采用SPSS 18.0軟件分析。計量資料以（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料用百分率表示，組間比較采用χ2檢驗；相關性分析采用Pearson或Spearman秩相關。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 各組人群外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群比較：結果表明，與健康人群比較，HIV感染者及HIV/HCV共感染者CD4+T細胞計數及百分比（CD4+T/CD3+T）明顯降低，CD8+T細胞計數及百分比（CD8+T/ CD3+T）明顯升高，差異有統計學意義（P＜0.05）。與健康人群比較，HIV感染者及HIV/HCV共感染者CD4+/CD8+比值明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。與HIV感染者比較，HIV/HCV共感染者CD4+T細胞計數及百分比明顯降低（P＜0.05）。見表1。

表1 各組人群CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群比較（±s）

表1 各組人群CD4+、CD8+T淋巴細胞亞群比較（±s）

組別　CD4+T細胞　CD8+T細胞　CD4+/CD8+絕對值（cells/μL）　　百分比（%）　　絕對值（cells/μL）　　百分比（%）健康人群（n=20）　722±273　42.33±10.37　565±237　27.38±10.25　1.52±0.67 HIV感染者（n=40）　426±178*　25.36±6.08*　782±381*　52.36±13.61*　0.47±0.23* HIV/HCV共感染者（n=40）　328±128*#　17.58±4.24*#　735±414*　48.07±12.47*　0.41±0.17*

2.2 各組人群CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子表達比較：結果顯示，與健康人群及HIV感染者相比，HIV/HCV共感染者CD8+CD28+T細胞百分比（CD28+/CD8+）明顯降低，CD8+CD38+T細胞的絕對計數與百分比（CD38+/CD8+）明顯升高，差異有統計學意義（P ＜0.05）。這提示HCV合并感染能明顯改變HIV感染者CD8+T淋巴細胞表面CD28、CD38分子的表達水平，促進HIV/AIDS患者免疫激活的發。見表2。

表2 健康人群與HIV/AIDS各組人群CD8+T淋巴細胞CD28及CD38分子表達比較（±s）

表2 健康人群與HIV/AIDS各組人群CD8+T淋巴細胞CD28及CD38分子表達比較（±s）

組別　CD8+CD28+T細胞　CD8+CD38+T細胞絕對值（cells/μL）　　百分比（%）　　絕對值（cells/μL）　　百分比（%）健康人群（n=20）　273±134　47.94±15.27　312±109　51.37±18.83 HIV感染者（n=20）　295±141　45.68±16.48　458±194*　56.65±17.46 HIV/HCV共感染者（n=40）　261±137　31.72±12.52*#　586±255*#　75.02±25.18*#

2.3 HIV/HCV共感染者CD4+T計數與CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子表達的相關性分析：將40例HIV/HCV共感染者按照CD4+T淋巴細胞計數分為四組，各組病例數見表3。結果顯示，不同CD4+T分組CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子表達差異明顯，且CD28表達水平與CD4+T計數成正相關（r=0.875，P＜0.001），而CD38表達水平與CD4+T計數成負相關（r=-0723，P＜0.001）。這提示CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子表達與疾病進展密切相關。見表3。

表3 HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子表達與CD4+T計數的相關性分析（±s）

表3 HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細胞CD28、CD38分子表達與CD4+T計數的相關性分析（±s）

組別　CD4+T淋巴細胞計數　CD8+CD28+T細胞百分比（%）　CD8+CD38+T細胞百分比（%）CD4<200（n=6）　145±48　20.95±10.74　84.79±18.62 200≤CD4<350（n=16）　285±57　29.37±9.66　71.49±23.26 350≤CD4<500（n=13）　429±51　38.48±14.70　68.85±14.71 CD4>500（n=5）　653±117　46.73±16.38　61.45±20.82 r 0.875　-0.723 P 0.000　0.000

3 討 論

HIV、HCV等病毒感染機體后，正常情況下機體免疫系統可通過體液免疫或細胞免疫對病毒或病毒感染的細胞進行清除。T淋巴細胞是機體免疫系統的主要組成部分，CD4+T和CD8+T與病毒感染和疾病密切相關。本研究對健康人群、HIV感染者及HIV/HCV共感染者三類人群的T淋巴細胞亞群進行比較和分析，結果顯示，HIV感染者及HIV/HCV共感染者CD4+T和CD8+T計數及百分比與健康人群相比均發生明顯變化，且出現明顯的CD4+/CD8+比例倒置現象。與HIV感染者相比，HIV/HCV共感染者CD4+T細胞絕對計數及百分比均明顯下降，這提示，相對于HIV單獨感染，HCV共感染能加速CD4+T的破壞，使艾滋病疾病進程加快。CD8+T是人體內具有直接殺傷病毒作用的主要免疫細胞，能特異性地識別病毒感染的靶細胞，并對其產生殺傷作用[4]。CD28和CD38分子對于CD8+T的激活和殺傷功能的發揮有著重要的作用。CD28屬于共刺激分子，其主要的生物學作用是在T細胞的激活過程中發揮共刺激作用，相關研究表明，大約95%的CD4+T細胞和50%的CD8+T細胞表面可表達CD28[5]。CD28與抗原遞呈細胞表面的B7分子結合形成第二信號，促進T細胞的增殖活化。如果缺少CD28共刺激信號，抗原呈遞細胞即使能與TCR CD3復合物及HLAⅡ類分子作用，也不能有效的激活T細胞[6]。CD38分子與細胞分化和活化狀態相關，在NK細胞、T細胞、B細胞等細胞表面均有表達。相關研究表明，HIV感染可導致CD38表達升高，CD38不僅能反映CD8+T細胞的激活狀態，而且與HIV病毒載量正相關，CD38分子可間接反映體內的HIV載量水平[7-8]。本研究結果顯示，與健康人群及HIV感染者相比，HIV/HCV共感染者CD8+CD28+T細胞百分比（CD28+/CD8+）明顯降低，CD8+CD38+T細胞的絕對計數與百分比（CD38+/CD8+）明顯升高，這提示合并HCV感染能明顯改變HIV感染者CD8+T淋巴細胞表面CD28、CD38分子的表達水平，促進患者CD8+T細胞免疫激活的發生。

綜上所述，通過不同人群T淋巴細胞亞群及其表面標記分子CD28、CD38的表達進行研究和分析，我們發現與健康人群和HIV單純感染人群相比，HIV/HCV共感染者CD8+T淋巴細胞表面CD28分子表達降低，CD38分子表達升高，且這種變化與患者CD4+T水平密切相關，可作為判斷疾病進展的重要指標。

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中圖分類號：R512.6+3；R512.91

文獻標識碼：B

文章編號：1671-8194（2016）07-0005-03

T he Expressyon C haracterystycs of C D28， C D38M olecular on C D8+T Lym phocytes of H IV /H C V C o-Infected Patyents

YANG Guo-qiang
（Department of Clinical Laboratory， Zhengzhou People's Hospital， Zhengzhou 450000， China）

[Abstract]Objective To study the expression of CD28， CD38molecular on CD8+T cell of peripheral blood of HIV/HCV co-infected patients， and explore its correlation with disease progression. Methods 40 cases of HIV infection and 40 cases of HIV/HCV coinfection come from Outpatient service of our hospital from October 2012 to August 2012， while 20 cases of healthy people were chosen from medical examination center from September 2014 to October check-up 20， the CD28， CD38molecule expression on CD8+T lymphocytes of 40 HIV/HCV co-infected patients， 40 HIV patients and 20 healthy people were detected by flow cytometry instrument， analyzed the expression characteristics of CD， CD molecular on CD+28388T lymphocytes of HIV/HCV co-infected patients； grouped the HIV/HCV co-infected patients according to the CD4+T value， through comparing the different expression of CD8+CD28+， CD8+CD38+among different CD4+T groups， discuss the correlation between CD28， CD38molecules on CD8+T lymphocytes and disease progression. Results Compared with healthy people and HIV patients， the percentage of CD8+CD28+T cells of HIV/HCV coinfected patients reduced significantly， while the CD8+CD38+T cell absolute counting and percentage increased significantly； followed the the reduction of the CD4+T ，the CD8+CD28+T reduced gradually ，while the CD8+CD38+T has a trend of increasing gradually. Conclusion The CD8+CD28+in peripheral blood of HIV/HCV co-infected patients reduces gradually， while CD8+CD38+increased gradually， both of which are closely associated with disease progression， and they can be used as judgement index of disease progression.

[Key words］HIV/HCV co-infected； T lymphocyte； CD8+CD28+； CD8+CD38+； Disease progression