填精補髓、活血化痰開竅法對血管性癡呆大鼠海馬組織單胺類神經遞質的影響

徐云龍李 肖趙建軍

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填精補髓、活血化痰開竅法對血管性癡呆大鼠海馬組織單胺類神經遞質的影響

徐云龍1李 肖2趙建軍1

【摘要】目的 觀察填精補髓、活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織單胺類神經遞質含量的影響。方法 建立雙血管阻塞（2VO）改良法復制VD大鼠模型；采用酶聯免疫法（ELISA）檢測海馬組織內去甲腎上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羥色胺（5-HT）含量。結果 與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量減少（P＜0．05）；與模型組比較，陽性對照組，中藥高劑量組、中藥中劑量組海馬組織DA、5-HT含量均增加（P＜0．05），陽性對照組，中藥高劑量組海馬組織NE含量增加（P＜0．05）。結論 填精補髓、活血化痰開竅法改善大鼠學習記憶功能障礙，其作用機制可能與提高海馬組織內NE、DA、5-HT含量相關。

【關鍵詞】填精補髓；活血化痰開竅法；血管性癡呆；單胺類神經遞質

Objective To observe the effect of tianjingbusui huoxuehuatankaiqiaofa （TJBSHXHTKQF） on the contents of monoamine neurotransmitter in hippocampus of vascular dementia（VD）rats． Methods The vessel occlusion（2VO）was modified to establish the VD model． The contents of NE，DA and 5-HT in hippocampus were determined with Enzyme-linked immunosorbent assay（ELISE）． Results Compared with sham group，the contents of NE，DA and 5-HT were decreased（P＜0．05） in model group． Compared with model group，the contents of DA and 5-HT were clearly increased（P＜0．05）in the high，middle dose of traditional Chinese medicine groups and the donepezil group，the contents of NE were increased（P＜0．05） in the high dose of TCM groups and the donepezil group． Conclusion The TJBSHXHTKQF could improve the learning and memory capability of VD rats，the mechanism may be closely related with increasing the contents of NE，DA and 5-HT in hippocampus．

【Key words】Tianjingbusui，Huoxuehuatankaiqiaofa，Vascular dementia，Monoamine neurotransmitter

血管性癡呆（vascular dementia，VaD）是指由各種腦血管病引起的獲得性智能損害及認知障礙綜合征，在癡呆常見病因中僅次于阿爾茨海默病，位居第二［1］。研究顯示，我國65歲及以上老年人中癡呆患病率約為7.8%，而VD患病率為1.1%，目前針對血管性癡呆的預防及治療已成為醫學基礎研究和臨床研究的迫切的任務。本文通過觀察填精補髓、活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織單胺類神經遞質含量的影響，進一步驗證填精補髓、活血化痰開竅法對VD可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 血管性癡呆大鼠模型制備

選用健康Wistar大鼠75只，體重為（250±30）g，雌雄各半，由長春中醫藥大學實驗動物中心提供及喂養。隨機分為假手術組（正常對照組）、模型組、陽性對照藥組、中藥高、中、低劑量組，經飼養及篩選后各組選取10只大鼠。參照文獻制備模型［2］，術前12 h禁食水，應用10%水合氯醛（0.3 g/kg）麻醉大鼠，仰臥固定，常規消毒后頸部正中切開，充分暴露雙側頸總動脈，并對其進行結扎。假手術組大鼠僅分離動脈，但不結扎。各給藥組劑量為中藥高劑量組2 g/（kg?d）、中劑量組1 g/（kg?d）、低劑量組0.5 g/（kg?d）。陽性對照組鹽酸多奈哌齊片0.77 mg/（kg?d），連續灌胃28 d。假手術對照組、模型組給予同體積生理鹽水。

1.2 實驗藥物與試劑

鹽酸多奈哌齊片（安理申）：每片5 mg，衛材（中國）藥業有限公司生產，批準文號：國藥準字H20050978。填精補髓、活血化痰開竅方（石菖蒲、郁金、山藥、山萸肉、龜板膠、川芎、紅花、肉蓯蓉、益智仁）由長春中醫藥大學附屬醫院制劑室制成。去甲腎上腺素（NE）測定試劑盒、多巴胺（DA）測定試劑盒、5-羥色胺（5-HT）測定試劑盒，以上試劑均為美國R＆D公司產品，批號：20151001A。

1.3 檢測指標及方法

各組大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量水平，處死大鼠后冰盤上快速取腦，加入冰生理鹽水，電動勻漿機勻漿，并于鏡檢下未見完整細胞。制備好濃度為10%的勻漿液，3 500 r/min離心10 min，提取上清。后采用ELISA法檢測海馬組織NE、DA、5-HT含量，檢測嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.4 統計學處理

應用SPSS 13.0統計軟件對本次的研究數據進行處理分析，結果用（均數±標準差）（±s）表示，組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

結果顯示，與假手術組比較，模型組大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量減少（P＜0.05），與模型組比較，陽性對照組，中藥高劑量組、中藥中劑量組海馬組織DA、5-HT含量均增加（P＜0.05），而陽性對照組，中藥高劑量組海馬組織NE含量增加（P＜0.05）。結果見表1。

3 討論

現代中醫學者在長期臨床實踐中不斷發現，VD的發病與“毒邪”致病有著密切聯系。王永炎院士［3］提到痰、虛、瘀互結為VD發病的病理基礎，病久痰瘀互阻，毒自內生，毒害腦髓、腦絡而發展為癡呆。而任繼學教授則認為“髓虛毒損”是本病的關鍵病機，認為癡呆就病性而言，多以虛為本，實為標，虛實夾雜是該病特點。虛則責其年老體衰，臟氣虧虛，真水不足，無以聚精生髓，故髓減腦消；而實則責其卒中后血損而成瘀，而“血液者，痰之本也”，有瘀必有痰，痰瘀互結，則生毒邪，更傷腦髓。故以此病機為指導，確立“填精補髓、活血化痰開竅法”治療本病。

表1 填精補髓、活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量的影響（±s，n=10）

表1 填精補髓、活血化痰開竅法對VD大鼠海馬組織NE、DA、5-HT含量的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較：*P＜0．05

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單胺類神經遞質是記憶形成及存儲中不可或缺的環節之一，主要包括NE、DA、5-HT等［4］。腦內缺血缺氧時，腦組織內單胺類神經遞質代謝發生紊亂，導致神經功能障礙，促使VD的發生發展。有研究證實，認知能力下降與單胺類神經遞質的下降程度是一致的［5］。由此可見，單胺類神經遞質對認知功能有著直接關系。本研究提示腦缺血時腦組織內NE、DA、5-HT含量下降，對學習記憶功能產生了影響。因此提高腦組織內的單胺類神經遞質，可改善學習記憶能力。

本實驗表明填精補髓、活血化痰開竅法高劑量組、中劑量組、陽性對照藥鹽酸多奈哌齊組能提高VD大鼠海馬組織DA、5-HT含量，且高于模型組，證實填精補髓、活血化痰開竅法高劑量組、中劑量組能增加VD大鼠海馬組織內DA、5-HT的含量，使其記憶力及學習能力得到改善。而填精補髓、化痰開竅法高劑量組和陽性對照藥鹽酸多奈哌齊組可提高VD大鼠海馬組織NE的含量，且高于模型組，促進了VD大鼠學習記憶功能恢復。因此，填精補髓、活血化痰開竅法改善VD大鼠認知功能的機制可能是通過提高腦內海馬組織中NE、DA、5-HT含量水平而得到改善，為填精補髓、活血化痰開竅法在臨床防治VD中提供了科學依據。

參考文獻

［1］ Lobo A，Launer LJ，Fratiglioni L，et al． Prevalence of dementia an major subtypes in Europe：A collaborative study of population-base cohorts． Neurologic Diseases in the Elderly Research Group［J］Neurology，2000，54：S4-S9．

［2］ 徐叔云，卞如濂，陳修，等． 藥理實驗方法學［M］． 北京：人民衛生出版社，2002：1060．

［3］ 王永炎，張伯禮． 血管性癡呆現代中醫臨床與研究［M］． 北京：人民衛生出版社，2003：49．

［4］ Blom K，Emmelot-Vonk M H，Koek H L． The influence o vascular risk factors on cognitive decline in patients with dementia：systematic review［J］． Maturitas，2013，76（2）：113-117．

［5］ 方之勇，彭漢光，張茂林． 清腦靈對擬血管性癡呆大鼠腦海馬內5-HT、DA、NA的影響［J］． 中醫藥學刊，2002，20（3）：304-305．

【中圖分類號】R285．5

【文獻標識碼】A

【文章編號】1674-9316（2016）06-0189-03

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．06．140

作者單位：1 長春中醫藥大學附屬醫院腦病科，吉林 長春130021 ；2 長春中醫藥大學，吉林 長春 130117

通訊作者：趙建軍，E-mail：zhaojianjun8777@163．com

Effect of Tianjingbusui Huoxuehuatankaiqiaofa on the Contents of Monoamine Neurotransmitter in Hippocampus of Vascular Dementia Rats

XU Yunlong1LI Xiao2ZHAO Jianjun11 Department of Encephalopathy，Affiliated Hospital of Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun Jilin 130021，China，2 Changchun University of Traditional Chinese Medicine，Changchun Jilin 130117，China

【Abstract】