TP—ELISA法檢測梅毒特異性抗體灰區(qū)內結果分析

李亦君　陳雪　蔣瑞心

【摘要】 目的 分析酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）法檢測梅毒螺旋體（TP）特異性抗體時， 檢測數(shù)據(jù)在灰區(qū)范圍內的結果。方法 15181份血清標本經(jīng)ELISA 法篩查梅毒特異性抗體， 以臨界值（cutoff）±20%為灰區(qū)即吸光度/臨界值（s/co）在0.8～1.2區(qū)間內， 0.8～1.0為低值灰區(qū)， 1.0～1.2為高值灰區(qū)， 初篩吸光度（OD）值在灰區(qū)的標本應用TP明膠顆粒凝集試驗（TPPA）法進行確認。結果 15181份標本中有96份標本數(shù)值落在灰區(qū)內， 96份中低值灰區(qū) 59份， 高值灰區(qū) 37份 。15181份標本最終確認為陽性 233份， 陽性率為1.53%（233/15181）， 其中灰區(qū)內標本確認陽性 25份， 占灰區(qū)標本的 26.04%（25/96）， 占總陽性標本的 10.73%（25/233）；71份確認陰性， 占灰區(qū)標本的 73.96%（71/96）。灰區(qū)內標本進行 TPPA復檢 25份陽性中， 低值灰區(qū) 8份， 占灰區(qū)陽性數(shù)的 32.00%（8/25）， 高值灰區(qū) 17份， 占灰區(qū)陽性數(shù)的68.00%（17/25）。低值灰區(qū) TPPA稀釋度為 1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280時標本數(shù)分別為3、2、1、0、2份， 高值灰區(qū)標本數(shù)分別為6、4、3、2、2份。結論 ELISA法檢測TP抗體， OD值處于灰區(qū)的， 不能單純以高于cutoff值判定陽性， 低于cutoff值作為判定陰性的標準， 應該進行TPPA復檢。

【關鍵詞】 梅毒螺旋體；特異性抗體；酶聯(lián)免疫吸附試驗；灰區(qū)

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.16.005

【Abstract】 Objective To analysis detection data in gray zone of treponema pallidum （TP） specific antibody by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Methods ELISA was applied to detect TP specific antibody in 15181 serum samples， and cutoff±20% as gray zone. In absorbance/cutoff （s/co） as 0.8～1.2， low value gray zone was 0.8～1.0 and high value gray zone was 1.0～1.2. Treponema pallidum particle assay （TPPA） was applied to confirm samples with gray zone optical delnsityin preliminary screening. Results There were totally 96 samples with value in gray zone among 15181 samples. Among the 96 cases， 59 cases were in low value gray zone and 37 cases in high value gray zone. There were 233 confirmed positive cases among 15181 cases， with positive rate as 1.53% （233/15181）， including 25 confirmed positive cases in gray zone， accounting for 26.04% （25/96） in gray zone and 10.73% （25/233） in all positive cases， and 71 confirmed negative cases， accounting for 73.96% （71/96） in gray zone. Reexamination by TPPA showed 25 positive cases in gray zone， with 8 cases in low value gray zone， accounting for 32.00% （8/25） in gray zone， and 17 cases in high value gray zone， accounting for 68.00% （17/25） in gray zone. Under TPPA dilution as 1∶80， 1∶160， 1∶320， 1∶640， 1∶1280， sample counts were respectively 3， 2， 1， 0， 2 in low value gray zone and 6， 4， 3， 2， 2 in high value gray zone. Conclusion In ELISA detection of TP antibody， positive and negative can not be singly determined by gray zone OD value and cutoff value， thus TPPA is necessary in reexamination.

【Key words】 Treponema pallidum； Specific antibody； Enzyme linked immunosorbent assay； Gray zone

梅毒是一類慢性接觸性傳染性疾病[1]， 人感染后可以導致全身多組織、器官的損傷和病變， 其病原微生物是TP。近年來， 梅毒在我國的發(fā)病呈上升趨勢[2， 3]。目前， 用人工培養(yǎng)TP尚未成功[4]， 所以臨床主要根據(jù)血清學檢測、既往病史、各種臨床表現(xiàn)進行梅毒的診斷。在檢測過程中， 因為ELISA法具有靈敏度高、特異性強、適用于大批量檢測的優(yōu)點， 是目前實驗室檢測梅毒特異性抗體最常用的方法。但同時因為方法學限制， ELISA檢測受很多因素影響， 所以結果的判讀需要謹慎， 尤其是灰區(qū)內結果判讀， 可以借助其確認試驗——TPPA進行輔助判定。作者對本院ELISA法檢測梅毒特異性抗體的OD值落在灰區(qū)內的標本進行了TPPA法復檢， 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 血清標本來自本院2015年1～12月門診及住院患者中進行TP特異性抗體篩查的標本15181份。以（cutoff值±20%）范圍設定為灰區(qū)， 其中96份（96例患者）落入該范圍， 男57例， 平均年齡48.7歲， 女39例， 平均年齡39.3歲。

1. 2 儀器與試劑 ELISA采用北京萬泰公司的TP試劑盒；TPPA采用日本富士瑞必歐株式會社試劑盒。儀器采用伯樂公司EVOLIS全自動酶標儀。

1. 3 檢測方法 TP-ELISA采用兩步法， 結果判定根據(jù)s/co值， 數(shù)值<0.8為陰性， 數(shù)值>1.2為陽性， 數(shù)值在0.8～1.2灰區(qū)范圍內為不確定。陽性標本需按梅毒的逆向檢測流程繼續(xù)檢測[5]。灰區(qū)內標本：s/co數(shù)值在0.8～1.0為低值灰區(qū)；1.0～1.2為高值灰區(qū)， 用TPPA復檢確認。根據(jù)說明書， TPPA以1∶80為判斷標準。所有操作嚴格按照試劑盒說明書要求。

2 結果

2. 1 灰區(qū)標本比例 檢測15181份標本中有96份標本數(shù)值落在灰區(qū)內， 占檢測總數(shù)0.63%。96份中低值灰區(qū)59份， 占灰區(qū)總數(shù)61.46%， 高值灰區(qū)37份， 占灰區(qū)總數(shù)38.54%。見表1。

2. 2 陽性標本 陽性標本比例：15181份標本最終確認為陽性233份， 陽性率為1.53%（233/15181）， 其中灰區(qū)內標本確認陽性25份， 占灰區(qū)標本的26.04%（25/96）， 占總陽性標本的10.73%（25/233）；71份確認陰性， 占灰區(qū)標本的73.96%（71/96）。低、高值灰區(qū)內陽性比例：灰區(qū)內標本進行TPPA復檢25份陽性中， 低值灰區(qū)8份， 占灰區(qū)陽性數(shù)的32.00%（8/25）， 高值灰區(qū)17份， 占灰區(qū)陽性數(shù)的68.00% （17/25）。見表2。

2. 3 TPPA復檢情況 低值灰區(qū)TPPA稀釋度為1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280時標本數(shù)分別為3、2、1、0、2份， 高值灰區(qū)標本數(shù)分別為6、4、3、2、2份。見表3。

3 討論

ELISA法檢測TP特異性抗體多采用兩步法， 原理為雙抗原夾心。由于該方法具有良好的標準化和自動化， 且成本低， 所以為目前基層醫(yī)院檢測梅毒抗體的首選方法[6]。作者檢測應用的是北京萬泰公司的TP試劑盒， 其微孔條包被的是重組TP特異性抗原。但是ELISA法檢測過程中容易受外界因素影響， 同時包被的基因只是部分片段， 并不是針對TP全段， 所以會存在一定假陽性、假陰性的情況。為了避免此類情況， 作者采取如下措施：①ELISA法檢測中， 標本的s/co值是研究對象。檢測梅毒特異性抗體時， 對于s/co高值部分假陽性的排查， 可以應用目前推薦的逆向檢測流程， 借助TPPA以及非特異性抗體檢測來彌補， 在之前的研究中也有過分析[5]。②對于假陰性情況。ELISA法若單純以cutoff為分界線判定陰陽性過于片面， 所以本實驗根據(jù)梅毒抗體檢測的“灰區(qū)”情況進行了相應研究。“灰區(qū)”指處于cutoff值周圍一定范圍， 通常將其上下20%檢測值視為“灰區(qū)”[7]。在本次實驗中根據(jù)cutoff值又把灰區(qū)細分為高、低兩區(qū)。對經(jīng)ELISA檢測在灰區(qū)內的標本進行TPPA確認實驗， 結果發(fā)現(xiàn)在低值灰區(qū)和高值灰區(qū)內的標本都出現(xiàn)了TPPA復檢陽性的情況。

結合國內外多項研究， ELISA商品化試劑只包被幾個重組蛋白抗原[8-10]， 雖然敏感性和特異性日趨完善， 但是與TPPA 試劑是以TPNichols株全病原體作為抗原[11]仍有一定差距， 這時應用ELISA法檢測時， 單純以cutoff值做分水嶺來判定陰陽性就有可能出現(xiàn)漏檢， 尤其是對于早期梅毒的患者。

另外研究中還發(fā)現(xiàn)， 即使在低值灰區(qū)中檢出的TPPA陽性者也有達到1∶1280的高稀釋比例。所以在灰區(qū)內ELISA 檢測數(shù)值與TPPA法檢測稀釋度并不一定完全符合正相關的關系， 這也與包被物質不同有關。

本次灰區(qū)內檢出的陽性標本占到了總陽性標本數(shù)的10.73%， 說明通過設立“灰區(qū)”， 并進行TPPA確認試驗， 在一定程度上避免了漏檢。

梅毒容易帶來一定的社會問題， 在檢測中應該根據(jù)實際工作情況和臨床需要盡可能選擇多方法聯(lián)合檢測， 最大限度減少漏檢和誤診。本次研究針對漏檢的情況， 從灰區(qū)下手進行確認試驗， 但是在低于灰區(qū)的部分是否還存在一定比例的假陰性情況， 由于TPPA 操作方法不適于大批量標本， 所以沒有進一步研究。今后將擴大研究范疇， 為梅毒檢測探索出更為準確、合理的流程盡最大努力。

參考文獻

[1] 張旭東， 馬艷華， 周少聰， 等.微粒子化學發(fā)光法和梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗檢測梅毒抗體的一致性比較.武警醫(yī)學， 2012， 23（9）：756-757.

[2] 王長海， 呂長坤.梅毒螺旋體感染篩選方法的臨床研究.國際檢驗醫(yī)學雜志， 2010， 31（6）：609-610.

[3] 曹樹正， 王文武， 張真路.梅毒檢測“灰區(qū)”樣本的分析.實用醫(yī)學雜志， 2010， 26（3）：476-477.

[4] Jantzen SU， Ferrea S， Langebner T， et al. Late-stage neurosyphilis presenting wjth severe neuropsychiatric deficits： diagnosis， therapy， and course of three patients. J Neurol， 2012， 259（4）：720-728.

[5] 李亦君， 程振忠， 許興， 等.基層醫(yī)院梅毒螺旋體抗體篩查方法比較及篩查流程探討.中國性科學， 2015， 24（7）：39-42.

[6] 杜靜， 張澤云， 周薇， 等.化學發(fā)光微粒子免疫發(fā)光分析法檢測梅毒螺旋體特異性抗體的應用與評價.廣東醫(yī)學， 2012， 33（8）：1100-1102.

[7] 鄧紅艷， 赫蘭輝.老年患者血清梅毒抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗假陽性結果分析. 檢驗醫(yī)學與臨床， 2011， 8（2）：151.

[8] 龐妍， 張志勇， 趙燕玲， 等.三種梅毒抗體檢測方法的比較.天津醫(yī)科大學學報， 2007， 13（3）：441-442.

[9] Ebel A， Bachelart L， Alonso JM. Evaluation of a new competitive immunoassay（BioElisa Syphilis） for screening for Treponemapallidum antibodies at various stages of syphilis. J Clin Microbiol， 1998， 36（2）：358-361.

[10] Vladana W， Zuzana V. Performance of CAPTIA SelectSyph-G enzyme-linked immunosorbent assay in syphilis testing of a high-risk population： analysis of discordant results. J Clin Microbiol， 2007， 45（6）：1794-1797.

[11] 鄧美霞.梅毒實驗室檢測方法的研究進展.微生物學免疫學進展， 2016， 44（1）：76-82.

[收稿日期：2016-02-26]