微衛(wèi)星QTL標(biāo)記分析豫選黃河鯉群體遺傳結(jié)構(gòu)及生長性狀相關(guān)性

顧　穎,魯翠云,張　芹,李　超,屈長義,王兆平,程　磊,孫效文,馮建新

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所,哈爾濱　150070；2.河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院,鄭州　450044)

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微衛(wèi)星QTL標(biāo)記分析豫選黃河鯉群體遺傳結(jié)構(gòu)及生長性狀相關(guān)性

顧穎1,魯翠云1,張芹2,李超1,屈長義2,王兆平2,程磊1,孫效文1,馮建新2

(1.中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所,哈爾濱150070；2.河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院,鄭州450044)

摘要：用35個(gè)鏡鯉微衛(wèi)星QTL標(biāo)記評估了豫選黃河鯉(Cyprinus carpio var. haematopterus)群體的遺傳結(jié)構(gòu),并評估了不同基因型與生長性狀(體重、體長、體高和體厚)的相關(guān)性,篩選了在群體中具有性狀優(yōu)勢的基因型。35個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記在288個(gè)豫選黃河鯉個(gè)體中的擴(kuò)增結(jié)果顯示,各標(biāo)記等位基因數(shù)為3～13,平均每個(gè)標(biāo)記6.828 6個(gè);平均有效等位基因數(shù)為4.520 8;平均觀測雜合度為0.603 0;平均期望雜合度為0.701 9;平均多態(tài)信息含量為0.665 6,群體整體處于高度多態(tài)水平(PIC>0.5)。利用SPSS19.0的GLM模型分析標(biāo)記與性狀的相關(guān)性,共17個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記與性狀表現(xiàn)出不同程度的相關(guān)性,其中HLJ2456、HLJ2387和CA1677 3個(gè)標(biāo)記與相應(yīng)的性狀相關(guān)性達(dá)極顯著水平。用Duncan氏多重比較找到了每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記具有生長性狀優(yōu)勢的基因型,下一步可根據(jù)優(yōu)勢基因型指導(dǎo)豫選黃河鯉家系配組,開展基于QTL結(jié)果的分子聚合育種研究。

關(guān)鍵詞：豫選黃河鯉(Cyprinus carpio var. haematopterus);微衛(wèi)星;遺傳多樣性;生長性狀;相關(guān)性

黃河鯉(Cyprinuscarpiovar.haematopterus)是我國“四大淡水名魚”之一,因其形狀、色澤及肉質(zhì)均優(yōu)于其他水體的鯉魚而著稱。但上世紀(jì)后半葉以來,受水質(zhì)污染、過度捕撈及黃河斷流等影響,天然水域中黃河鯉資源遭到嚴(yán)重破壞,且出現(xiàn)種質(zhì)混雜的狀況,野生黃河鯉瀕臨滅絕[1]。為了拯救黃河鯉這一名貴魚種,河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院歷經(jīng)20余年由黃河河道野生黃河鯉系統(tǒng)選育8代后,育成黃河鯉良種—豫選黃河鯉(品種登記號：GS01-001-2004),恢復(fù)了黃河鯉“金鱗赤尾,體形梭長,肉質(zhì)細(xì)嫩鮮美”的特征。該品種生長速度比選育前提高36.2%以上[2]。為了保持豫選黃河鯉資源,使其更快更好生長,需要對其進(jìn)行進(jìn)一步選育。近年來,隨著分子標(biāo)記技術(shù)的發(fā)展,通過分子標(biāo)記進(jìn)行輔助選擇為鯉種質(zhì)資源的改良提供有效途徑。

對于鯉QTL資源的發(fā)掘,已經(jīng)積累了很多,尤其近年來,利用遺傳圖譜定位及單標(biāo)記回歸分析獲得的與體重和體長等生長性狀相關(guān)的標(biāo)記達(dá)上百個(gè)之多[3-9],且這些標(biāo)記多為共顯性,適用于標(biāo)記指導(dǎo)育種實(shí)踐。但以上研究多采用鏡鯉及一些雜交鯉家系或群體,鑒于鯉不同品種、不同群體間的QTL標(biāo)記有共性也有差異,因此現(xiàn)有的QTL標(biāo)記在豫選黃河鯉繁殖群體中是否適用,還需要進(jìn)一步評估。本研究選用35個(gè)在鏡鯉家系中獲得的生長性狀QTL標(biāo)記分析豫選黃河鯉大樣本養(yǎng)殖群體,評估群體遺傳結(jié)構(gòu)及標(biāo)記基因型與生長性狀的相關(guān)性,以期為豫選黃河鯉群體的遺傳結(jié)構(gòu)優(yōu)化及開展基于QTL結(jié)果的分子聚合育種研究提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)魚及QTL標(biāo)記的選擇

2014年10月于河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院豫選黃河鯉養(yǎng)殖示范基地采集同池飼養(yǎng)的豫選黃河鯉2齡成魚288尾,測量體重(BW)、體長(BL)、體高(BH)及體厚(BT)等表型性狀,并剪取部分鰭條組織置于濾紙干燥保存[10]。本研究從魯翠云等[11]篩選的鏡鯉生長性狀QTL標(biāo)記中選取了48個(gè)對豫選黃河鯉群體進(jìn)行檢測。

1.2基因組DNA的提取及PCR擴(kuò)增

剪取約0.1 g鰭條于400 μL的裂解液(10 mmol/L EDTA,pH 8.0;200 μg/mL 蛋白酶K;0.5%的十二烷基肌氨酸鈉)中,55 ℃ 溫育2～3 h,酚、氯仿、異戊醇(體積比為25∶24∶1)混合液抽提3次,無水乙醇沉淀,自然干燥后溶解于1/10 TE中,1%的瓊脂糖檢測DNA的質(zhì)量及估測濃度。

建立15 μL反應(yīng)體系,包括PCR混合緩沖液11 μL(10 mmol/L Tris-Cl (pH8.0),50 mmol/L KCl,2.0 mmol/L MgCl2,0.01%明膠,0.1% Tween-20,0.1% NP-40,dNTP各2 mmol/L),上下游引物(10 μmol/L)各0.5 μL,模板DNA (50 ng/μL)1 μL,TaqDNA聚合酶(Promega)1 U,補(bǔ)無菌水到15 μL。PCR反應(yīng)程序?yàn)?94 ℃預(yù)變性3 min;94 ℃變性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,25～27個(gè)循環(huán);72 ℃延伸5 min,4 ℃保存。8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。Gel-Pro Analyzer 4.5軟件判讀基因型,確定等位基因大小。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

建立基因型數(shù)據(jù)庫,采用自主開發(fā)的“魚類種質(zhì)資源遺傳分析平臺(專利號:ZL200710144749.3)”將0、1矩陣轉(zhuǎn)化為PopGene(Version 3.2)格式。運(yùn)行PopGene(Version 3.2)軟件獲得各微衛(wèi)星標(biāo)記的遺傳多樣性參數(shù),包括等位基因數(shù)(observed number of alleles,Na)、有效等位基因數(shù)(effective number of alleles,Ne)、基因型數(shù)(number of genotypes,Ng)、觀測雜合度(observed heterozygosity,Ho)、期望雜合度(expected heterozygosity,He)等。

通過SPSS19.0軟件的GLM模型分析標(biāo)記各基因型與體重、體長、體高和體厚性狀的相關(guān)性。以某標(biāo)記的某基因型對應(yīng)的表型性狀均值顯著高于其他基因型的表型均值,并高于總體均值為優(yōu)勢基因型的判定標(biāo)準(zhǔn)。用Duncan氏多重比較找到了每個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記具有生長性狀優(yōu)勢的基因型。對于一些標(biāo)記中某些基因型出現(xiàn)頻率太少,缺少分析價(jià)值,因此在實(shí)際統(tǒng)計(jì)分析中,每種基因型至少有3次觀察值才被考慮。

2結(jié)果與分析

2.1表型分析

對體重、體長、體高和體厚性狀表型值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,所有性狀都顯示出連續(xù)變異的特點(diǎn),是典型的數(shù)量性狀。Shapiro-Wilk正態(tài)分布檢驗(yàn)顯示,各性狀P值均大于0.05,符合正態(tài)分布;Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)顯示,4個(gè)生長性狀間具有不同程度的相關(guān)性(表1)。

表1　豫選黃河鯉生長性狀正態(tài)分布檢測

2.2擴(kuò)增結(jié)果

用48個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記對豫選黃河鯉進(jìn)行多態(tài)性篩選,其中35個(gè)(72.92%)標(biāo)記擴(kuò)增出穩(wěn)定、清晰的DNA條帶,并在個(gè)體間表現(xiàn)出不同程度的多態(tài)性,2個(gè)標(biāo)記為單態(tài),11個(gè)標(biāo)記條帶不清晰或表現(xiàn)為三條以上的條帶,不適合二倍體鯉的群體遺傳分析。

35個(gè)標(biāo)記在288個(gè)豫選黃河鯉個(gè)體中的擴(kuò)增結(jié)果顯示,各標(biāo)記等位基因數(shù)為3～13,平均為6.828 6;觀測雜合度為0.131 9～0.964 0;期望雜合度為0.162 9～0.899 3。多態(tài)信息含量為0.153 5～0.888 8,平均為0.665 6,群體整體處于高度多態(tài)水平(PIC>0.5)(表2)。Hardy-Weinberg平衡檢測顯示,4個(gè)位點(diǎn)顯著偏離平衡(P<0.05),22個(gè)位點(diǎn)極顯著偏離平衡(P<0.01)。

表2　豫選黃河鯉群體在35個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)的遺傳多樣性參數(shù)

續(xù)表2

2.3標(biāo)記與各個(gè)性狀相關(guān)性分析

共有17個(gè)微衛(wèi)星位點(diǎn)與不同性狀表現(xiàn)出不同程度的相關(guān)性,其中HLJ2456、HLJ2387、CA1677 3個(gè)標(biāo)記與相應(yīng)的性狀相關(guān)性達(dá)極顯著水平(P<0.01)。另外,CA1812等7個(gè)標(biāo)記僅與1個(gè)性狀相關(guān);CA724等5個(gè)標(biāo)記與2個(gè)性狀相關(guān);HLJ2456等4個(gè)標(biāo)記與3個(gè)性狀相關(guān);CA1677與4個(gè)性狀都顯著相關(guān),且與體重、體長和體高3個(gè)性狀的相關(guān)性均達(dá)到了極顯著水平。詳細(xì)統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表3。結(jié)合魯翠云等[11]鏡鯉與建鯉生長性狀共享QTL標(biāo)記的結(jié)果,有9個(gè)標(biāo)記(CA2377、CA724、HLJ2456、CA1677、CA1846、CA1276、HLJ3366、CA2137和HLJ3865)與豫選黃河鯉、鏡鯉及建鯉生長性狀均相關(guān),為共享QTL標(biāo)記。

表3　基于GLM模型的permutation檢驗(yàn)表現(xiàn)為性狀顯著相關(guān)的標(biāo)記及相關(guān)性閾值

注：a:鏡鯉連鎖群編號;*表示標(biāo)記與性狀顯著相關(guān)(P<0.05);**表示標(biāo)記與性狀極顯著相關(guān)(P<0.01)

對17個(gè)與性狀顯著相關(guān)的標(biāo)記不同基因型對應(yīng)的生長性狀進(jìn)行Duncan氏多重比較,由于單個(gè)標(biāo)記在大群體樣本獲得的基因型組合較多(5～35個(gè),表2),依據(jù)優(yōu)勢基因型的評定標(biāo)準(zhǔn),僅按照基因型頻率列出性狀優(yōu)勢基因型(附表1)。標(biāo)記CA1677的3個(gè)基因型CE、DD和CC在4項(xiàng)生長指標(biāo)均表現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢,為性狀優(yōu)勢基因型。HLJ2456的基因型EE、CF、CD、AB、AC、FF、AA和AD,CA1677的基因型CD和AE,HLJ3455的基因型HH、GG、CF、EH、JJ、GI、DG和AG,CA1846的基因型DE、CD、DG、FF、FI、CH、CF、CC和EE,HLJ3865的基因型EG、CE、FG、CG、DG、BF和BC在3項(xiàng)生長指標(biāo)表現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢,為性狀優(yōu)勢基因型。其余基因型在1個(gè)或2個(gè)生長指標(biāo)表現(xiàn)出顯著的優(yōu)勢,為性狀優(yōu)勢基因型。

在分子育種中,優(yōu)勢基因型在育種群體中的分布頻率決定了在一定檢測范圍內(nèi)是否能夠獲得目標(biāo)個(gè)體。本研究在17個(gè)生長相關(guān)標(biāo)記上共獲得175個(gè)性狀優(yōu)勢基因型,其中標(biāo)記CA2377的基因型CC、CA724的基因型DD、HLJ2456的基因型CF、HLJ3460的基因型FF、HLJ3289的基因型BB、HLJ2387的基因型DE、CA1677的基因型CE和CC、HLJ2783的基因型CF、CA2278的基因型EE、HLJ3455的基因型HH、CA1846的基因型CD、CA1276的基因型CE、HLJ3366的基因型BD、CA2137的基因型GG和HH、HLJ3865的基因型FG、HLJ3770的基因型CD等基因型的個(gè)體在某個(gè)生長指標(biāo)表現(xiàn)為極顯著的優(yōu)勢(生長性狀均值最大),且這些基因型出現(xiàn)的頻率較高(0.05以上),有較高的育種價(jià)值。另外,標(biāo)記CA1812的基因型AA、HLJ3455的基因型AG、CA1846的基因型EE、HLJ3366的基因型FF、CA2137的基因型FI、HLJ3770的基因型FH和HH等基因型的個(gè)體生長性狀均值顯著高于總體均值,但是這些基因型在育種群體中出現(xiàn)的頻率較低(低于0.015),因此不利于后續(xù)的育種操作。

3討論

3.1豫選黃河鯉群體的遺傳多樣性

豫選黃河鯉是由河南省水產(chǎn)科學(xué)研究院從黃河河道采捕300尾個(gè)體,選外觀與黃河鯉原種一致的成熟親魚建立豫選黃河鯉的選育基礎(chǔ)群,經(jīng)過20余年8代系統(tǒng)選育,育成的黃河鯉良種。作為人工選育的群體,在多代選育過程中近交、遺傳漂變和人為選擇壓力是難以避免的,因此評價(jià)并維持選育品種的遺傳多樣性對其優(yōu)良性狀的穩(wěn)定遺傳具有重要作用[13-15]。Na、Ne、Ho、He和PIC等都是反映群體遺傳多樣性的參數(shù),這些參數(shù)值越大,表明群體遺傳多樣性越豐富。本研究選用的35個(gè)微衛(wèi)星QTL標(biāo)記在豫選黃河鯉群體中的各指標(biāo)平均值為Na=6.828 6、Ne=4.520 8、Ho=0.603 0、He=0.701 9、PIC=0.665 6,顯示遺傳多樣性水平較高,除Ho接近蘇勝彥等[16](Ho=0.62),其余各指標(biāo)均明顯高于李超等[17](Na=5.809 5、Ne=3.370 6、Ho=0.589 3、He=0.657 8、PIC=0.610 8)及蘇勝彥等[16](Na=5.4、Ne=2.04、Ho=0.62、He=0.47、PIC=0.42)在黃河鯉群體中的結(jié)果，也高于鏡鯉繁殖群體[18](Na=4.125 0、Ne=2.540 1、Ho=0.406 8、He=0.493 4、PIC=0.484 1),表明經(jīng)過了多年的人工選擇,豫選黃河鯉群體仍然保留了豐富的遺傳多樣性,具有較大的保種潛力。這與關(guān)建義[19]利用ISSR分子標(biāo)記證明人工選育群體的遺傳多樣性相對于野生群體尚未發(fā)生明顯變化相一致,也可能與本研究的樣本量大有關(guān)。

Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)結(jié)果表明,35個(gè)標(biāo)記中26個(gè)(74.3%)標(biāo)記顯著偏離平衡(P<0.05),其中22個(gè)極顯著偏離平衡(P<0.01),說明群體內(nèi)的基因型頻率發(fā)生了較大改變。由于豫選黃河鯉群體是一個(gè)經(jīng)過長達(dá)20余年人工定向選擇(體形、體色、生長速度等)的群體,它面臨的選擇壓力較大,導(dǎo)致群體基因型頻率發(fā)生嚴(yán)重偏離。

3.2微衛(wèi)星QTL標(biāo)記與豫選黃河鯉性狀的相關(guān)分析

在魚類育種中,分子標(biāo)記應(yīng)用方向之一是利用基因型與目標(biāo)性狀的連鎖關(guān)系,將某個(gè)基因型作為選擇這個(gè)性狀優(yōu)勢品種的工具。近年來,對于鯉QTL區(qū)間及生長性狀相關(guān)標(biāo)記的篩選已經(jīng)積累了很多,其中以鏡鯉為代表發(fā)掘與生長性狀相關(guān)的QTL標(biāo)記達(dá)上百個(gè)之多[3～9,20-21],鑒于鯉不同品種、不同群體間的QTL標(biāo)記有共性也有差異,因此現(xiàn)有的QTL標(biāo)記在豫選黃河鯉群體中是否適用,還需要進(jìn)行驗(yàn)證。本研究選用48個(gè)在鏡鯉家系中獲得的生長性狀QTL標(biāo)記在豫選黃河鯉群體中進(jìn)行檢測,有35(72.92%)個(gè)標(biāo)記穩(wěn)定擴(kuò)增并呈現(xiàn)多態(tài)性,接近魯翠云等[18]用鏡鯉QTL標(biāo)記在建鯉中擴(kuò)增的多態(tài)比例(74.07%);高于隨機(jī)選用鏡鯉圖譜上的標(biāo)記在建鯉中擴(kuò)增的多態(tài)比例(41.84%)[22]。可見QTL標(biāo)記比隨機(jī)標(biāo)記在鯉不同品種及群體間的保守性更高。從35個(gè)QTL標(biāo)記中篩選出17個(gè)與豫選黃河鯉生長性狀顯著相關(guān)(P<0.05)的標(biāo)記,其中9個(gè)是建鯉、鏡鯉和豫選黃河鯉的共享QTL標(biāo)記,這些標(biāo)記可能與控制生長性狀的基因連鎖,更應(yīng)該優(yōu)先應(yīng)用于豫選黃河鯉、建鯉和鏡鯉的分子育種。

3.3性狀優(yōu)勢基因型的分析

鯉QTL區(qū)間及生長性狀相關(guān)的標(biāo)記大部分是通過對單家系等近交群體的分析獲得的,由于單家系中所有個(gè)體具有相同的遺傳背景,每個(gè)位點(diǎn)上的等位基因、基因型不超過4種,因此只需要相對較少的樣本量可得到較高的檢測效率。而對于一個(gè)隨機(jī)交配的外交群體,每個(gè)基因座位上的等位基因較多,同一基因型的個(gè)體數(shù)偏少而使與經(jīng)濟(jì)性狀連鎖的結(jié)果產(chǎn)生偏差或錯(cuò)誤[3]。而在育種過程中使用的多為混合家系的外交群體,因此通過家系分析獲得與目標(biāo)性狀相連鎖的QTL標(biāo)記,再將這些標(biāo)記在隨機(jī)的外交群體中進(jìn)行驗(yàn)證,是提高QTL檢測效率并應(yīng)用于指導(dǎo)育種實(shí)踐的前提。

由于魚類具有驚人的繁殖力,在分子育種中,是否能夠從眾多苗種中獲得具有優(yōu)勢基因型的個(gè)體,也是需要考慮的因素。因此,優(yōu)勢基因型在育種群體中的分布頻率也非常重要。本研究采用大樣本群體288個(gè)個(gè)體,在17個(gè)生長相關(guān)QTL位點(diǎn)共得到175個(gè)性狀優(yōu)勢基因型,由于等位基因數(shù)及基因型數(shù)較多致使同一基因型個(gè)體數(shù)偏少,因此在實(shí)際育種操作中既要考慮基因型的性狀優(yōu)勢大小,還要考慮其出現(xiàn)頻率,以便于選取最佳配組方案。如標(biāo)記CA2377的基因型CC、CA724的基因型DD和HLJ2456的基因型CF等基因型的個(gè)體在某個(gè)生長指標(biāo)表現(xiàn)為極顯著的優(yōu)勢,且這些基因型出現(xiàn)的頻率較高(高于0.05),便于在實(shí)際育種操作中利用這些優(yōu)勢基因型,故在分子標(biāo)記輔助選擇中有較大的育種參考價(jià)值。而標(biāo)記CA1812的基因型AA、HLJ3455的基因型AG和CA1846的基因型EE等基因型的個(gè)體生長性狀均值顯著高于總體均值,但是這些基因型在育種群體中出現(xiàn)的頻率較低(低于0.015),不利于后續(xù)的育種操作。對于本研究中大樣本養(yǎng)殖群體,優(yōu)勢基因型數(shù)較多,這給標(biāo)記輔助選擇應(yīng)用于育種帶來了很大便利。可以選擇同一微衛(wèi)星位點(diǎn)上性狀優(yōu)勢較大的基因型,并結(jié)合基因型頻率進(jìn)行選擇,同時(shí)篩選出不同微衛(wèi)星位點(diǎn)性狀優(yōu)勢較大的復(fù)合基因型并進(jìn)一步將其應(yīng)用于育種實(shí)踐。

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(責(zé)任編輯：張瀟峮)

附表1　17個(gè)微衛(wèi)星標(biāo)記優(yōu)勢基因型個(gè)體生長性狀的平均值和多重比較

續(xù)附表1

續(xù)附表1

續(xù)附表1

收稿日期：2015-11-25；

修訂日期：2016-04-01

第一作者簡介：顧穎(1983-),女,碩士,從事魚類分子遺傳育種研究。E-mail:guying_1983@163.com 通訊作者：孫效文。E-mail:sunxw2002@163.com;馮建新。E-mail:fnjaxn@163.com

中圖分類號：S917.4

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1000-6907-(2016)04-0009-10

Analysis of genetic diversity and growth traits in Cyprinus carpio var. haematopterus using microsatellite QTL markers

GU Ying1,LU Cui-yun1,ZHANG Qin2,LI Chao1,QU Chang-yi2,WANG Zhao-ping2,CHENG Lei1,SUN Xiao-wen1,FENG Jian-xin2

(1.HeilongjiangFisheriesResearchInstitute,ChineseAcademyofFisherySciences,Harbin150070,China;2.HenanProvincialResearchInstituteofAquaculture,Zhengzhou450044,China)

Abstract：Thirty-five QTL markers in mirror carp were used to analyze the genetic diversity and the correlationship between the growth traits (body weight,body length,body height and body thickness) and genotypes in 288 Yuxuan Cyprinus carpio var. haematopterus individuals.The number of alleles per locus ranged from 3 to 13 with an average of 6.828 6.The mean observed and expected heterozygosity were 0.603 0 and 0.701 9,respectively.The mean polymorphism information content was 0.665 6.The result indicated that the population was at the high genetic diversity level (PIC>0.5).A GLM procedure in the SPSS 19.0 software was used to analyze the correlation between genotypes of these 35 microsatellite markers and growth traits.A total of 17 markers were associated with these traits,of which three markers (HLJ2456,HLJ2387,and CA1677) had a significant impact on the corresponding traits.Superior genotypes were obtained using Duncan′s multiple comparison.These QTL markers and superior genotypes for growth traits in Yuxuan C.carpio var. haematopterus will promote the growth to higher production through molecular marker-assisted breeding.

Key words：Cyprinus carpio var. haematopterus;microsatellite marker;genetic diversity;growth traits;correlation

資助項(xiàng)目：中國水產(chǎn)科學(xué)研究院基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)項(xiàng)目(2014A05CG01);河南省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(S2015-10)