秦皇島女性人乳頭瘤病毒型別分布特征分析

樊靜 于丹軍 李淑英

秦皇島女性人乳頭瘤病毒型別分布特征分析

樊靜 于丹軍 李淑英

目的探討秦皇島地區(qū)女性感染人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)的流行和型別分布情況，為預(yù)防HPV的感染和宮頸癌的診治提供理論依據(jù)。方法應(yīng)用導(dǎo)流雜交(RDB)方法對(duì)2014-10—2015-10在秦皇島市第一醫(yī)院、秦皇島市第四醫(yī)院婦科門診及住院治療的1 561例患者標(biāo)本進(jìn)行HPV分型檢測。結(jié)果1 561例女性中HPV感染陽性檢出率為38.57%，其中高危型別的陽性檢出率29.60%(包括多重高危感染)，低危型別的陽性檢出率為9.03%(包括多重低危感染)。在高危HPV亞型中，前三位的依次為HPV16(21.4%)，52(9.47%)，58(7.97%)，低危型別中依次是HPV6(11.6%)，HPV11(6.15%)，HPVcp8304(4.15%)。在不同的年齡段人群中，HPV陽性率有明顯的差異，17～21歲年齡段人群HPV陽性率最高為44.4%，與其他組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。HPV高危型單一感染檢出357例，檢出率為77.44%，多重感染104例，檢出率為22.56%；隨著宮頸病變級(jí)別的增高，高危型HPV多重感染的檢出率也增高，宮頸炎組32.55%，CINⅠ37.90%，CINⅡ42.06%，CINⅢ54.81%，宮頸癌組69.14%各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論HPV16、52、58是秦皇島地區(qū)的高危HPV感染的主要型別，HPV6是HPV低危型感染的主要型別。隨著宮頸病變的惡性程度的增加，高危HPV的檢出率也隨之增加，多重感染的檢出率也隨之增加。

人乳頭瘤病毒；反向斑點(diǎn)雜交；宮頸癌

人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是危害人類健康的重要感染因素之一，它是引發(fā)生殖器疣和宮頸癌的主要病因[1]。它包含了大概8 000個(gè)堿基對(duì)，具有種屬特異性，屬于雙鏈閉環(huán)的小DNA病毒。包括高危亞型和低危亞型，高危亞型與宮頸癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，而低危亞型則常引起外生殖器濕疣等良性病變[2]。近年來的研究表明HPV有很強(qiáng)的地域性，不同國家和地區(qū)的感染率及型別均存在著差異[3]。本文就秦皇島女性的HPV感染情況進(jìn)行檢測，以了解該地區(qū)的HPV型別情況和流行病學(xué)特征，為宮頸癌的防治提供理論參考。

1 料與方法

1.1 標(biāo)本來源收集2014-10—2015-10在秦皇島市第四醫(yī)院、秦皇島市第一醫(yī)院婦產(chǎn)科門診就診及住院治療的宮頸炎、宮頸癌及疑似患者標(biāo)本1 561例，年齡17～72歲，平均年齡45歲。

1.2 標(biāo)本采集TCT檢查和活組織檢查后，選擇正常范圍、非典型鱗狀上皮細(xì)胞、低級(jí)別上皮內(nèi)病變、高級(jí)別上皮內(nèi)病變的標(biāo)本。用棉拭子將宮頸口過多的分泌物擦去，將宮頸刷深入宮頸處，輕輕搓動(dòng)宮頸刷使其順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3～5圈，慢慢取出宮頸刷，放入裝有專用細(xì)胞保存液的樣本管中，活檢組織標(biāo)本由婦科醫(yī)生取出及放入福爾馬林固定后送檢標(biāo)本，由病理科醫(yī)師進(jìn)行分級(jí)，若送檢樣本不能馬上檢測的置于4℃冰箱保存，并在一周內(nèi)完成檢測。

1.3 檢測方法HPV分型采用RDB反向斑點(diǎn)雜交方法進(jìn)行分型檢測。

1.3.1 DNA提取將取樣后的標(biāo)本轉(zhuǎn)移至微量離心管中，1 400 r/min離心1 min。棄上清，利用凱普生物化學(xué)科技共色生產(chǎn)的基因組提取試劑盒進(jìn)行HPV-DNA提取。

1.3.2 PCR擴(kuò)增取1 μL提取好的DNA樣本作為模本進(jìn)行PCR擴(kuò)增，20℃10 min，95℃9 min，95℃20 min，55℃30 min，72℃30 min，40個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min。

1.3.3 導(dǎo)流雜交利用Hybrmax核酸分子快速雜交儀進(jìn)行導(dǎo)流雜交，95℃把25 μL的PCR產(chǎn)物加熱5 min，然后立即冰水浴至少2 min，進(jìn)行變性；將已變性的DNA樣本加入0.5 mL預(yù)熱至45℃的雜交液，在導(dǎo)流雜交儀45℃溫育10 min后進(jìn)行導(dǎo)流雜交，雜交后再用0.8 mL雜交液沖洗膜3次，再用0.8 mL蒸餾水沖洗膜，取出雜交膜在1 h內(nèi)分析結(jié)果。

1.4 結(jié)果判斷RDB檢測結(jié)果：藍(lán)紫色圓點(diǎn)為清晰可見的陽性點(diǎn)，根據(jù)膜條HPV分型分布圖，判斷陽性點(diǎn)為何種HPV病毒類型。病理組織學(xué)及細(xì)胞學(xué)檢測：由病理科醫(yī)師閱片，并就宮頸組織病變結(jié)果進(jìn)行病理組織學(xué)分級(jí)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 14.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，應(yīng)用χ2檢驗(yàn)，把P＜0.05作為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 HPV亞型分布1 561例女性就診患者中共檢測到的HPV陽性者602例，HPV感染陽性率為38.57%(602/1 561)，其中高危型別的陽性檢出率29.60%(461/1 561包括多重高危感染)，低危型別的陽性檢出率為9.03%(141/1 561包括多重低危感染)。在被檢測的16個(gè)高位HPV亞型中，前三位的依次為HPV16(21.4%，129/462),52(9.47%57/462)，58(7.97%48/462)感染，低危型別中依次是HPV6(11.6%70/141)，HPV11(6.15%37/141)，HPVcp8304(4.15%25/141，表1)。

表1 602例HPV陽性結(jié)果亞型分布圖(n)

2.2 不同年齡段的HPV感染情況不同的年齡段人群HPV陽性率有明顯的差異，其中感染率前三位的年齡段是17～21歲，22～26歲，42～46歲的HPV高危型陽性檢出率分別是44.4%、36.22%、30.32%，其中17～21這一年齡段人群的HPV陽性率最高，與其他組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

表2 不同年齡段HPV陽性分布(n)

2.3 高危型HPV檢出率HPV高危型單一感染檢出357例，檢出率為77.28%，雙重感染75例，檢出率為16.23%，三重感染22例,檢查率為4.76%(表3)。

表3 高危HPV感染者中多重感染陽性率(n)

2.4 高危型HPV多重感染的檢出率隨著宮頸病變連續(xù)的進(jìn)展，高危型HPV多重感染的檢出率也增加，宮頸炎組8.37%，CINⅠ40.19%，CINⅡ39.78%，CINⅢ46.56%，宮頸癌組65.31%；各組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P＜0.05，表4)。

表4 宮頸各級(jí)病變中HPV陽性的檢出率[n(%)]

3 討論

HPV是女性中感染較為常見的性傳播病毒，目前發(fā)現(xiàn)了100余種HPV亞型，有35種與生殖道疾病有關(guān)，但大多數(shù)感染是一過性的，可被自身的免疫系統(tǒng)清除，僅有一少部分高危(HR-HPV)持續(xù)感染者可發(fā)展為宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)進(jìn)而發(fā)展為浸潤癌[4]。近年來，越來越多的研究顯示，宮頸癌的主要致病因素之一是HPV病毒，尤其是其高危型[5]的持續(xù)感染。由于在30歲以下性活躍的年輕婦女HPV感染較為常見，所以宮頸癌的發(fā)病率逐年上升且有年輕化的趨勢，已經(jīng)成為婦科腫瘤中的第二大腫瘤[5]。本研究采用RDB雜交技術(shù)對(duì)秦皇島市地區(qū)1 561例女性人乳頭瘤病毒的性別分布進(jìn)行21種HPV分型檢測，研究結(jié)果顯示，HPV的感染率為38.57%，高于俞志紅等[6]報(bào)道的24.03%，HPV陽性的單一感染357例，檢出率為77.28%，多重感染105，感染率為22.72%，在HPV高危型的感染中以HPV16，、52、58型為主，這一結(jié)果有別于歐洲國家，以HPV16和HPV18為主，亞洲地區(qū)HPV52、HPV58所占比例要高于HPV45、HPV31、HPV33型[7]，與本文一致。在中國大陸主要以HPV16亞型為主，居第一位，18亞型居第二位，58和52亞型居第三第四位[8]與中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤研究所研究中表明生殖器疣患者HPV16和18型31型是最主要的感染型別[9]，存在著一定差異，提示不同的地區(qū)感染高危的型別可能存在差異。根據(jù)國外的大多數(shù)學(xué)者的研究發(fā)現(xiàn)，35歲以下的婦女被稱為年輕婦女宮頸癌[10-12]，在本文中17～21歲這一階段年齡的HPV陽性的感染率最高，具有年輕化的趨勢，與相關(guān)資料報(bào)道一致[12]。因此，宮頸癌的預(yù)防和診治需要做定期有效的的HPV篩查，尤其是年輕的婦女這個(gè)特殊的群體，才能真正的減少宮頸癌的發(fā)病率。隨著宮頸病變級(jí)別的增高，多重感染檢出率也增加。Lee等[13]的研究發(fā)現(xiàn)，如果感染單一型別HPV，患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加19.9倍，但是如果感染HPV多重型別，患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)將會(huì)增加至31.80倍。因此，制定本地區(qū)的HPV型別分布特點(diǎn)，為該地區(qū)的疫苗防治提供了有力的理論依據(jù)，也為宮頸癌的防治和篩查提供有效的檢測方法。

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ObjectiveTo investigate the status of infection as well as distribution of human papillomavirus(HPV)types among females in Qinhuangdao and provide theoretical basis for HPV prevention and treatment of cervical cancer.MethodsReverse dot blot(RDB)method was adopted to conduct the HPV typing test in 1 561 sufferer specimens who were collected from gynecological outpatients and inpatients between October 2014 and October 2015 at Qinhuangdao No.1 Hospital and Qinhuangdao No.4 Hospital.ResultsThe positive rate of HPV infection was 38.57%(602/1 561)in 1561 women，among which the positive rate of high-risk type was 29.60%(462/1 561，including multiple high-risk infection)，the positive rate of low-risk type was 9.03%(140/1 561，including multiple low-risk infection).Among the detected high-risk HPV subtypes，the top three were HPV16 infection(21.4%，129/462)，HPV52 infection(9.47%，57/462)，and HPV58 infection(7.97%，48/462).The top three of low-risk HPV subtypes were HPV6(11.6%，70/140)，HPV11(6.15%，37/140)，and HPVcp8304(4.15%，25/140).There were obvious differences between the HPV-positive rates in different age groups，among which the age group of 17～21years old had the highest positive rate of 44.4%and the differences with other age groups were of statistical significance(P＜0.05).357 cases had high-risk HPV single infection with a detection rate of 77.44%，and 104 cases had high-risk HPV multiple infection with a detection rate of 22.56%.With the increase of cervical lesions，the detection rate of high-risk HPV multiple infection increased，32.55%in the inflammation group，37.90%in the CINⅠgroup，42.06%in the CINⅡgroup，and 54.81%in the CINⅢgroup，and 69.14%in the cervical cancer group.The differences between the groups were of statistical significance(P＜0.05).ConclusionHPV16，HPV52 and HPV58 are the main types of high-risk HPV infection in Qinhuangdao，and HPV6 is the main type of low-risk HPV infection.With the increase of the malignant degree of cervical lesions，the detection rate of high-risk HPV also increases，and the detection rate of multiple infection increases as well.

Human papillomavirus(HPV)；Reverse dot blot(RDB)；Cervical cancer

2016-03-29)

1005-619X(2016)06-0667-04

10.13517/j.cnki.ccm.2016.06.048

066300華北理工大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院(河北省慢性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，唐山市慢性病臨床基礎(chǔ)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(樊靜，李淑英)；066000秦皇島市第四醫(yī)院(樊靜)；066000秦皇島市第一醫(yī)院(于丹軍)