輔酶Q10和維生素E配伍的穩定性和食用安全性研究

孫紅梅，羅　蓉，李冬梅

(1 安利(中國)日用品有限公司，廣州　510613； 2北京聯合大學應用文理學院，北京　100191)

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輔酶Q10和維生素E配伍的穩定性和食用安全性研究

孫紅梅1，羅蓉1，李冬梅2

(1安利(中國)日用品有限公司，廣州510613；2北京聯合大學應用文理學院，北京100191)

摘要：目的：研究輔酶Q10和維生素E配伍的穩定性和食用安全性。方法：采用高效液相色譜法，對經過加速破壞的輔酶Q10和維生素E配伍的樣品進行含量分析和安全性毒理學評價。結果：輔酶Q10和維生素E在24個月內未發生明顯化學反應，輔料也未對其穩定性產生影響，毒理學試驗未發現安全性問題。結論：輔酶Q10和維生素E配伍穩定，并且食用安全。

關鍵詞：輔酶Q10；維生素E；穩定性；安全性

輔酶Q10(CoQ10)是一種脂溶性的類維生素物質，廣泛存在于生物體細胞內，具有重要的生理功能活性。有研究表明，輔酶Q10具有增強免疫力、緩解體力疲勞和清除自由基等作用[1-3]，輔酶Q10和維生素E具有顯著的提高機體免疫力和緩解體力疲勞等功能[4-6]。本文主要研究了輔酶Q10維生素E配伍的穩定性和食用安全性。

1材料

1.1樣品

受試樣品由安利(中國)日用品有限公司提供，內容物為粘稠狀紅色液體的軟膠囊，塑料瓶裝，樣品核準凈含量0.414g/粒，60粒/瓶，以輔酶Q10和維生素E為原料，加入抗氧化劑迷迭香提取物、米糠油等經混和、包膠、干燥和包裝等主要工藝加工制成軟膠囊。人體推薦日服量為每天1粒。

1.2主要儀器與試劑

Waters2695-2487高效液相色譜儀、Agilent6890氣相色譜儀、電子天平、恒溫恒濕試劑箱、MEK-6318K全自動血球計數儀、SELECTRA-E全自動生化分析儀、離心機、切片機、全自動脫水機、包埋機、手術器械。

CoQ10對照品，中國藥品生物制品檢定所；維生素E(d-α-生育酚)對照品，SAGMA公司；乙腈、甲醇、無水乙醇、三氯化鐵、四氫呋喃均為色譜純。各種生化試劑盒：總蛋白試劑盒(120441)、白蛋白試劑盒(120501)、谷草轉氨酶試劑盒(120991)、谷丙轉氨酶試劑盒(122021)、膽固醇試劑盒(131501)、甘油三酯試劑盒(135941)、尿素試劑盒(120991)、葡萄糖試劑盒(133031)、肌酐試劑盒(132591)。稀釋液DH-640(121114)、溶血劑DH-680(121102)。

2方法

2.1穩定性試驗方法

2.1.1樣品處理3批受試樣品貯存于30℃以下的陰涼干燥處，保存期24個月，供常規穩定性試驗用。另取上述3批受試樣品每批次30瓶，置于溫度為37±2℃、濕度75%±5%的恒溫恒濕箱中保存，每個月每個批次取出10瓶，共分成1、2、3個月進行加速穩定性試驗。

2.1.2色譜條件

(1)CoQ10：采用高效液相色譜，Nova-Pak C18色譜柱，柱溫25℃，流動相體積比：乙腈：四氫呋喃：水(55∶40∶5)，進樣量5μL，流速1.0mL/min。

(2)維生素E：采用氣相色譜，DB-1色譜柱，載氮氣，載氣流速4.5mL/min，進樣口溫度300℃，柱溫箱的初始溫度是200℃、終止溫度300℃，升溫速率10℃/min，到達終止溫度后保持20min，檢測器溫度是300℃，進樣量1μL，分流比10∶1。

2.1.3樣品測定樣品分別在0、1、2、3個月加速穩定性試驗后進行CoQ10和維生素E的含量測定。CoQ10的含量測定采取正己烷與乙醇混合液提取試樣中CoQ10，加1mL 0.1%三氯化鐵的無水乙醇稀釋過濾后，采用高效液相色譜分離，紫外檢測器檢測，根據保留時間和峰面積進行定量[7]。維生素E的含量測定采用天然維生素E的國家標準方法(GB 19191-2003)[8]。

2.2安全性試驗方法

2.2.1受試樣品取0時受試樣品，冷藏或貯存于30℃以下的陰涼干燥處，供試驗用。人體口服推薦量為1粒/d，即每日0.414g/60 kg BW。

2.2.2受試動物及條件急性毒性試驗和30d喂養試驗用鼠選用中國食品藥品檢定研究院[許可證號：SCXK(京)2009-0017]繁殖的SPF級昆明種小鼠和SD大鼠。遺傳毒性試驗用斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司[許可證號：SCXK(京)2011-0004]繁殖的SPF級昆明種小鼠。基礎飼料由北京華阜康生物科技股份有限公司生產[許可證號：SCXK-(京)2009-0008]。各劑量組均給予基礎飼料。采用SPF級動物房[實驗動物使用許可證號：SYXK(京)2012-0031]。

2.2.3急性毒性試驗(最大耐受量MTD法)選用18～22g昆明種小鼠20只及180～220g SD大鼠20只，雌雄各半，進行試驗。取受試樣品的內容物125.0g，加玉米油至200.0mL，使用濃度0.625g/mL。灌胃容量20mL/kg BW，分成2次灌胃，間隔6h，灌胃劑量相當于25.0g/kg BW(相當于人體推薦日攝入量的3 623倍)，連續觀察14d，記錄大鼠的一般狀態、體重變化、中毒癥狀及死亡情況，確定最大耐受劑量(MTD)。

2.2.4小鼠骨髓嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗選用體重25～30g昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只。以環磷酰胺(40mg/kg BW)為陽性對照，玉米油為溶劑對照，低、中、高等3個劑量組分別為2.50、5.00、10.00g/kg BW，相當于人體推薦劑量的362、725、1 449倍。均采用經口灌胃給予，灌胃容量約為20mL/kg BW。2次灌胃給予受試樣品，2次給藥間隔24h，末次灌胃6h后，處死動物。取小鼠胸骨骨髓，用小牛血清稀釋制作涂片。采用雙盲法閱片。顯微鏡下觀察每只小鼠計數1 000個嗜多染紅細胞(PCE)，計算含微核的PCE的千分率。同時，每只小鼠計數200個PCE和成熟紅細胞(NCE)數，計算PCE與NCE比值。

2.2.5精子畸形試驗選用體重25～30g昆明種小鼠50只，雌雄各半，隨機分為5組，每組10只。以環磷酰胺(40mg/kg BW)為陽性對照，玉米油為溶劑對照，低、中、高等3個劑量組分別為2.50、5.00、10.00g/kg BW，相當于人體推薦劑量的362、725、1 449倍。均采用經口灌胃給予，灌胃容量約20mL/kg BW。每日灌胃1次，連續5d，末次灌胃30d后，處死動物。取附睪制片，雙盲法閱片。高倍鏡下觀察小鼠的精子狀態，每組取5只小鼠計數，每只計數1 000個精子，計算精子畸變發生的百分率。

2.2.6大鼠30d喂養試驗選用離乳大鼠80只，雌雄各半，隨機分成4組，每組20只。以玉米油為溶劑對照，低、中、高等3個劑量組，分別為0.17、0.34、0.69g/kg BW，相當于推薦人體日攝入量25、50、100倍。采用灌胃給予受試樣品，每日1次，連續30d灌胃容量為10mL/kg BW。每日觀察并記錄動物的一般表現，中毒和死亡情況。每周稱2次體重，撤食量和剩余量，計算每周攝食量和食物利用率。在第30d禁食16h后稱空腹體重，測定相關血液指標和血清生化指標。進行大體解剖，稱量肝臟、腎臟、脾和睪丸等臟器的絕對重量并計算臟/體重量比。當各劑量組大鼠大體檢查沒有發現明顯病變，且血液指標和血清生化指標沒有發生顯著性變化時，取高劑量組與溶劑對照組的肝臟、腎臟、胃、腸、脾、睪丸和卵巢進行病理組織學檢查。若發現病變后對較低劑量組進行相應檢查。由每只大鼠中切取肝組織、腎組織、脾組織、胃組織、十二指腸組織、卵巢或睪丸組織各一塊，經甲醛固定，酒精、二甲苯脫水透明，石蠟包埋，制成5μm厚度切片，蘇木精伊紅染色，光學顯微鏡觀察。

3結果與分析

3.1穩定性檢測結果

從表1可見，在溫度37±2℃、濕度75%±5%的條件下分別存放0、1、2、3個月，受試樣品CoQ10和維生素E指標無發生明顯變化，這表明，受試樣品質量穩定，CoQ10和維生素E在迷迭香提取物和米糠油基質中可以穩定存在。

表1　受試樣品穩定性測試結果

3.2安全性檢測結果

3.2.1急性毒性(最大耐受MTD量)試驗結果由表2可見，給雌、雄的昆明小鼠和SD大鼠灌胃2次受試樣品，灌胃劑量為25.0g/kg BW，在觀察14d期間，動物狀態正常，無中毒體征和死亡等異常情況。第15d將受試動物處死進行大體解剖檢查，主要器官未見明顯異常。受試樣品對雌、雄昆明小鼠和SD大鼠的經口MTD均大于15g/kg BW，受試樣品屬無毒級別。

表2　急性毒性試驗(MTD)結果

3.2.2小鼠骨髓嗜多染紅細胞(PCE)微核試驗結果 由表3、表4可見，各劑量受試樣品對雌、雄昆明小鼠的骨髓細胞增殖沒有明顯抑制作用。雌、雄昆明小鼠各劑量組骨髓PCE微核率與溶劑對照組比較均無顯著性差異(P>0.05)。陽性對照組小鼠骨髓PCE微核率顯著高于溶劑對照組(P<0.01)，說明受試動物敏感，試驗可靠。結果表明，在受試劑量范圍內，受試樣品小鼠骨髓PCE微核試驗陰性。

表3　雌性昆明小鼠骨髓PCE微核試驗結果

表4　雄性昆明小鼠骨髓PCE微核試驗結果

3.2.3小鼠精子畸形試驗結果由表5可見，與溶劑對照組比較，受試樣品各劑量組的小鼠精子畸形發生率均無顯著性差異(P>0.05)。陽性對照組小鼠精子畸形發生率有顯著性差異(P<0.01)，說明受試小鼠敏感，試驗可靠。結果表明，在受試劑量范圍內，受試樣品小鼠精子畸形試驗陰性。

表5　小鼠精子畸形試驗結果

3.2.4大鼠30d喂養試驗結果給予大鼠不同劑量的受試樣品30d后，大鼠體重、體重增重、攝食量、食物利用率、臟器檢查、臟器重量、臟/體比值、血液學和血液生化學檢查結果表明，與溶劑對照組間比較，受試樣品各劑量組的各檢驗項目均沒有顯著性差異(P>0.05)。

病理組織學結果表明，溶劑對照組與受試樣品各劑量組的雌、雄大鼠的肝臟、腎臟、胃、十二指腸、脾、睪丸或卵巢均沒有發現明顯損傷性病理變化，說明30d喂養沒有發現本受試樣品有明顯的毒性作用。

4討論

CoQ10與其他原料一起使用時是否會發生化學反應一直被食品行業重視，CoQ10與維生素E都含有共軛雙鍵，兩者混合成軟膠囊時，有可能發生化學反應而導致產品不穩定[9-12]。本實驗結果表明，采用CoQ10和維生素E為主要原料，迷迭香提取物和米糠油為基質制成的軟膠囊中，未見CoQ10和維生素E的量發生明顯變化，可見CoQ10和維生素E在24個月的有效期內是穩定的，且輔料的存在也未對其穩定性產生任何的影響。毒理學評價實驗也表明CoQ10和維生素E配伍食用安全。◇

參考文獻

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(責任編輯李婷婷)

作者簡介：孫紅梅(1985—)，女，碩士，研究方向：保健食品研發和注冊。

通訊作者：羅蓉(1970—)，女，雙學士，工程師，研究方向：食品和保健食品技術法規。

Compatible Stability and Edible Safety of Coenzyme Q10and Vitamin E

SUN Hong-mei1，LUO Rong1，LI Dong-mei2

(1Amway (China) Co.Ltd.，Guangzhou 510613，China；2College of Applied Arts and Science of Beijing Union University，Beijing 100191，China)

Abstract：【Objective】To study the compatible stability and edible safety of coenzyme Q10and vitamin E.【Method】The samples containing coenzyme Q10and vitamin E were analyzed by high-performance liquid chromatography，and their toxicological safety was assessed.【Result】 No significant changes were found in contents of coenzyme Q10and vitamin E.The presence of excipients did not show any impact on its stability.No reaction of coenzyme Q10and vitamin was found within 24 months.Toxicological evaluation showed no safety issues.【Conclusion】It was proved that combination of coenzyme Q10and vitamin E was stable and safe.

Keywords：coenzyme Q10；vitamin E；stability；safety