黨參、萊菔子提取物與抗性糊精復(fù)合配方的輔助通便功能研究

甘　聃，瞿晶菁，杜　軍，岑　浩，田　峰，申曉娟，桂　敏，樊柏林，李敏杰

(1安利(中國)研發(fā)中心有限公司，上?！?01203；2 應(yīng)用毒理湖北省重點實驗室，武漢　430079；3湖北省疾病預(yù)防與控制研究中心，武漢　430079)

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黨參、萊菔子提取物與抗性糊精復(fù)合配方的輔助通便功能研究

甘聃1*，瞿晶菁2，3*，杜軍1，岑浩1，田峰1，申曉娟1，桂敏1，樊柏林2，3，李敏杰1

(1安利(中國)研發(fā)中心有限公司，上海201203；2應(yīng)用毒理湖北省重點實驗室，武漢430079；3湖北省疾病預(yù)防與控制研究中心，武漢430079)

摘要：目的：研究黨參及萊菔子提取物與抗性糊精復(fù)合配方對便秘小鼠模型的腸推進(jìn)和促進(jìn)排便作用的影響，并進(jìn)一步研究復(fù)合配方中萊菔子提取物和黨參提取物在體外實驗條件下對鴉片受體的抑制作用。方法： 采用地芬諾酯灌胃造成小鼠便秘模型，觀察受試樣品對動物小腸推進(jìn)的影響；采用地芬諾酯灌胃造成小鼠便秘模型，觀察受試樣品對動物排便的影響；采用體外細(xì)胞模型，觀察萊菔子提取物和黨參提取物單獨或聯(lián)合作用對鴉片受體的抑制作用。結(jié)果 ：單獨使用黨參及萊菔子提取物(933mg/kg BW)小鼠腸推進(jìn)和首粒排黑便時間有明顯效果，抗性糊精(1 000mg/kg BW) 對首粒排黑便時間、排黑便粒數(shù)和總重量有明顯作用，二者復(fù)合配方(1 933mg/kg)在腸推進(jìn)、對首粒排黑便時間、排黑便粒數(shù)和總重量等方面均有明顯作用，表明了二者的體內(nèi)協(xié)同作用。同時，體外實驗結(jié)果表明，黨參提取物(IC50，7.97mg/mL)、萊菔子提取物(IC50，1.95mg/mL)以及二者復(fù)合使用(IC50，4.84mg/mL)對鴉片受體的抑制作用顯著。結(jié)論 ：該復(fù)合配方能顯著增加小鼠的小腸推進(jìn)，縮短便秘小鼠排便時間、增加排便次數(shù)及便重，具有輔助通便的作用。

關(guān)鍵詞：黨參；萊菔子；腸推進(jìn)；排便；鴉片受體

便秘是世界上最常見的癥狀之一，不論人種、性別、年齡以及區(qū)域，都有相關(guān)的報道[1-2]。近年來，隨著我國經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展和人們生活條件的改變，中國的便秘人群比例不斷攀升。流行病研究發(fā)現(xiàn)，中國的北方城市比南方城市的發(fā)生率高，同時老年人以及中青年女性的發(fā)生率也高[3]。中醫(yī)研究表明，便秘與氣滯、氣虛、陰虛、陽虛等均有一定關(guān)聯(lián)。

萊菔子作為一種藥食兩用的原材料常被用于保健食品產(chǎn)品的開發(fā)，在便秘人群中常見的中醫(yī)處方中，萊菔子常被用于“通氣”，《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》記載“萊菔子炒熟為末，每飯后移時服錢許，借以消食順氣”[4]；《本草綱目》記載萊菔子具有“生升熟降”的作用，表明生者可以降氣化痰，熟者功效為消食除脹[5]。黨參是中醫(yī)常用補氣藥，應(yīng)用歷史悠久。據(jù)《本草從新》記載，黨參可以“補中益氣，和脾胃，除煩渴”；《本草正義》記載“力能補脾養(yǎng)胃，潤肺生津，健運中氣，本與人參不甚相遠(yuǎn)”[6-7]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，傳統(tǒng)的具有瀉下中藥配方中含有的蒽醌和大黃素等原科的安全性受到越來越多的挑戰(zhàn)，藥食兩用的原料受到更多關(guān)注。隨著人們飲食結(jié)構(gòu)也發(fā)生了改變，高脂、高蛋白、低纖維食品不斷增多，是導(dǎo)致便秘患者顯著增加的主要原因。研究表明，有相當(dāng)一部分人對低聚糖類敏感，導(dǎo)致腸內(nèi)產(chǎn)氣，會進(jìn)一步增強便秘病人特別是氣滯體質(zhì)人的不適感。近年來，膳食纖維作為補充劑成為便秘患者的有效選擇之一[8]。本文采用地芬諾酯灌胃造成小鼠便秘模型，分別考察萊菔子提取物和黨參提取物、抗性糊精以及二者復(fù)合配方對便秘小鼠小腸推進(jìn)和輔助通便的影響，同時采用體外模型考察2種提取物對鴉片受體作用的影響。

1材料與方法

1.1實驗動物及環(huán)境

SPF級昆明種雄性小鼠，18～22g，由湖北省實驗動物研究中心提供。實驗動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(鄂)2008-0005；實驗動物使用許可證號：SYXK(鄂)2012-0065。動物飼養(yǎng)室溫度為20～25℃，濕度為40%～70%。

1.2材料與樣品

黨參，購于藥材市場，批號為20141128，粉碎后加6倍量水，加熱95℃以上提取2次，每次1.5h，水提液噴霧制粒，最終提取比例約為2.5∶1。萊菔子，購于藥材市場，批號為150128-208-01，粉碎后加10倍量80%乙醇，加熱80℃以上提取2次，每次1h，水提液噴霧制粒，最終提取比例約為5∶1。 抗性糊精，由日本松谷化學(xué)工業(yè)株式會社提供，批號為：132019。復(fù)方地芬諾酯片，購于廣西河豐藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號為130401。

1.3動物與劑量分組

共2個動物實驗，分開同時進(jìn)行，每組實驗動物包括陰性對照組、模型對照組和A組(復(fù)合配方組，包括萊菔子提取物、黨參提取物和抗性糊精，1 933mg/kg BW)、B組(萊菔子提取物和黨參提取物，933 mg/kg BW)和C組(抗性糊精，1 000mg/kg BW)，小鼠按0.20mL/10g BW容量經(jīng)口灌胃給予，每組動物數(shù)均為12只。小鼠連續(xù)灌胃7d天后開始通便功能評價實驗或小腸推進(jìn)實驗。

1.4試劑配制

墨汁的配制(含5%的活性炭粉、10%阿拉伯膠)：準(zhǔn)確稱取阿拉伯樹膠100g，加水800mL，煮沸至溶液透明，稱取活性碳(粉狀)50g加至上述溶液中煮沸3次，待溶液涼后加水定容到1 000mL，于冰箱中4℃保存，用前搖勻。

取復(fù)方地芬諾酯片50mg，用研缽研碎后加0.5%羧甲基纖維素鈉溶液至100mL，為通便模型臨用前配制。取復(fù)方地芬諾酯片25mg，用研缽研碎后加0.5%羧甲基纖維素鈉溶液至100mL，小腸運動實驗?zāi)Ｐ团R用前配制。

1.5實驗方法

1.5.1排便時間、糞便粒數(shù)和糞便重量測定實驗小鼠連續(xù)灌胃7d后，禁食16h(不禁水)，模型對照組和各劑量組給予復(fù)方地芬諾酯，劑量為10mg/kg BW，按0.20mL/10g BW容量經(jīng)口灌胃給予，30min后，各劑量組分別給予含相應(yīng)受試樣品的墨汁，陰性對照組和模型對照組給墨汁灌胃，給藥容量為0.2mL/10g BW并開始計時， 動物單籠喂養(yǎng)，正常飲水進(jìn)食，記錄每只動物首次排黑便時間、5h內(nèi)排黑便粒數(shù)及重量。

1.5.2小腸運動實驗小鼠連續(xù)灌胃7d后，禁食16h(不禁水)，模型對照組和各劑量組給予復(fù)方地芬諾酯，劑量為5mg/kg，按0.20mL/10g BW容量經(jīng)口灌胃給予，30min后，劑量組分別給予含相應(yīng)受試樣品的墨汁，陰性對照組模型對照組給墨汁灌胃，給藥容量為0.2mL/10g BW。25min后頸椎脫臼處死動物，打開腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門、下端至回盲部的腸管，置于托盤上，輕輕將小腸拉成直線，測量從幽門括約肌向小腸回盲部推進(jìn)的長度及小腸總長度。小腸運動以墨汁推進(jìn)率(%)表示為(1)式：

(1)

1.6阿片受體體外檢測

該體外檢測是委托法國Cerep進(jìn)行，檢測報告編號為100017095，具體的操作流程是以非選擇性阿片受體(拮抗劑)作為篩選方法，分別篩選黨參提取物、萊菔子提取物、以及二者復(fù)合物(比例為5∶2)對阿片受體結(jié)合的能力，計算化合物對放射性標(biāo)記的配體特異性結(jié)合的抑制作用，即百分比例。一般而言，抑制率達(dá)到或超過50%被認(rèn)為是實驗化合物在更高濃度下具有更顯著作用效果，根據(jù)實驗結(jié)果進(jìn)行方程模擬，并計算IC50值，數(shù)據(jù)以及結(jié)果計算時采用Cerep公司的Hill軟件。

2結(jié)果與分析

2.1小鼠通便實驗結(jié)果

如表1所示，在小鼠通便實驗中，各劑量組小鼠的終重與陰性對照組比較均P>0.05，受試樣品對小鼠體重?zé)o明顯影響。

表1　　　　對排便時間、糞便粒數(shù)和糞便重量測定實驗小鼠體重的影響±s)

注：與陰性對照組比較，P>0.05

如表2，與陰性對照組比較，模型對照組小鼠首粒排黑便時間，黑便粒數(shù)和重量明顯減少(P<0.01)， 說明給予10mg/kg劑量的復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠便秘模型成立。與模型對照組比較，A、B和C組首便時間明顯縮短(P<0.05或P<0.01)，A和C組排黑便粒數(shù)明顯增加且黑便重量明顯增加(P<0.05或P<0.01)，說明A和C 排便時間、糞便粒數(shù)和糞便重量的測定實驗結(jié)果為陽性。本研究結(jié)合了萊菔子、黨參和抗性糊精，并采用小鼠便秘模型分組考察，結(jié)果證實了A配方中顯著提高小鼠糞便粒數(shù)和總重的是膳食纖維，同時B配方正式了黨參和萊菔子提取物能有效縮短首粒黑便的排除的時間，這與其他研究結(jié)果一致[9，10]。近年來，膳食纖維作為補充劑成為便秘患者的有效選擇之一，然而，根據(jù)不同人的體質(zhì)，特別是氣滯型的便秘人群，對大劑量的低聚糖類的膳食纖維類會較為敏感，產(chǎn)生脹氣等癥狀。本配方選用了分子量較大的抗性糊精，能有效減輕敏感人群的不良感受[8]。

表2　　　　對小鼠首粒排黑便時間、排黑便粒數(shù)和黑便重量的影響±s)

注：與陰性對照組比較，#P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05、**P<0.01

2.2小鼠小腸推進(jìn)實驗結(jié)果

如表3所示，在小鼠小腸推進(jìn)實驗中，各劑量組小鼠的終重與陰性對照組比較均P>0.05，受試樣品對小鼠體重?zé)o明顯影響。如表4所示，與陰性對照組比較，模型對照組小鼠墨汁推進(jìn)率明顯降低(P<0.01)，說明給予5mg/kg劑量的復(fù)方地芬諾酯誘導(dǎo)小鼠小腸蠕動抑制模型成立。經(jīng)對墨汁推進(jìn)率數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換后統(tǒng)計分析，A和B組與模型對照組的差異有顯著性(P<0.01)。

表3　對小腸運動實驗小鼠體重的影響±s)

注：與陰性對照組比較，P>0.05

表4　對小鼠小腸推進(jìn)運動的影響

注：與陰性對照組比較，#P<0.01；與模型對照組比較，*P<0.05、**P<0.01

王少根等[10]報道了黨參煎劑能改善小鼠Ⅲ度燙傷后的腸動力功能，在0.1g/d能顯著提高小腸推進(jìn)率，且具有量效關(guān)系；同時，王少根等[11]采用燙傷豚鼠模型研究發(fā)現(xiàn)黨參煎劑可以顯著升高腸道內(nèi)后血中胃泌素(GAS) 和胃動素(MTL) 濃度。唐健元等[12]報道了萊菔子具有促進(jìn)腸推進(jìn)作用，研究發(fā)現(xiàn)，萊菔子行氣消食的作用機制可能與促進(jìn)MTL的分泌和作用于M受體有關(guān)。薛玲等[13]報道萊菔子只有炒制得當(dāng)，方能發(fā)揮消導(dǎo)作用。本實驗采用小鼠小腸推進(jìn)模型進(jìn)行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，含有黨參和萊菔子提取物的配方A和B都具有明顯的效果(P<0.05)，而不含有黨參和萊菔子提取物的C配方?jīng)]有任何效果(P>0.05)。該結(jié)果與前人研究結(jié)果一致，且表明A配方中具有小腸推進(jìn)推進(jìn)的功效成分是黨參和萊菔子提取物，該結(jié)果與便秘小鼠模型中首粒黑便排出時間縮短的結(jié)果也是一致的。

2.3阿片受體體外檢測

根據(jù)最終的檢測報告，所有的數(shù)據(jù)都是符合驗證標(biāo)準(zhǔn)，與Cerep數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比較，數(shù)據(jù)有效且能計算出IC50。根據(jù)附圖(A-C)結(jié)果顯示，黨參提取物的IC50為7.37 mg/mL、萊菔子提取物的IC50為1.95 mg/mL，二者的混合物的IC50為4.84 mg/mL。阿片類藥物是目前治療中重度疼痛最重要的藥物，然而此類藥物容易引起便秘，不僅發(fā)生率高達(dá)90%～100%，而且最不易耐受，越來越多研究人員也證實了阿片受體與便秘之間的聯(lián)系[14]。DeHaven-Hudkins[15]研究發(fā)現(xiàn)，可以通過阿片受體拮抗作用來實現(xiàn)對胃腸生理功能干預(yù)和恢復(fù)。同時有體外研究表明，萊菔子含藥血清對大鼠離體結(jié)腸平滑肌肌條作用明顯[16]。本實驗結(jié)果也證實了萊菔子在體內(nèi)對腸道的作用存在多條通路。

本實驗表明，配方B(黨參和萊菔子的提取物)是配方A中促進(jìn)小腸推進(jìn)的有效成分，同時經(jīng)過阿片體外試驗檢測發(fā)現(xiàn)，配方B能有效抑制阿片受體和配體的結(jié)合試驗，同時發(fā)現(xiàn)，配方B中萊菔子的提取物對阿片受體拮抗作用最明顯(附圖1B)。

附圖　阿片受體篩選結(jié)果(A黨參提取物；B萊菔子提取物；C二者混合物)

3結(jié)論

根據(jù)體內(nèi)實驗檢測結(jié)果，配方B能促進(jìn)腸推進(jìn)功能以及縮短排便功能中的首粒黑便時間；配方C能促進(jìn)排便實驗中的所有3個指標(biāo)(排便時間、排便粒數(shù)以及排便重量)；配方A在促進(jìn)腸推進(jìn)功能以及縮短排便功能中的4個指標(biāo)上作用都達(dá)到顯著差異。同時體外實驗表明，配方A和B可能是通過拮抗小鼠腸道中的Mu阿片受體以達(dá)到促進(jìn)腸推進(jìn)的作用?！?/p>

參考文獻(xiàn)

[1]Mugie S.E.，et al.Epidemiology of constipation in children and adults： A systematic review [J].Best Practice & Research Clinical Gastroenterology，2011，25： 3-18.

[2]Leung L.，et al.Chronic Constipation： An Evidence-Based Review [J].JABFM， 2011，24(4)：436-451.

[3]魏艷靜，卞紅磊，趙發(fā).便秘的國內(nèi)流行病學(xué)研究進(jìn)展[J].疾病控制雜志，2004，8(5)：449-451.

[4]唐健元，張磊，彭成，等.萊菔子行氣消食的機制研究[J].中國中西醫(yī)結(jié)合消化雜志，2003，11(5)：287-289.

[5]國家藥典委員會，中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：255-256.

[6]楊扶德，李成義.黨參歷代本草考證[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2007，14(2)：100-102.

[7]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：264-265.

[8]Ohkuma，K，Wakabayashi，S.Fibersol-2： a soluble，non-digestible，starch-derived dietary fibre [M].In： McCleary，BV，Prosky，L eds.Advanced dietary fibre technology.Blackwell Science，Oxford，2001：509-552.

[9]劉蕊，等.萊菔子不同提取物對實驗性便秘小鼠排便的影響[J].現(xiàn)代中醫(yī)藥，2010，30(2)：59-60.

[10]王少根，等.黨參對小鼠Ⅲ度燙傷早期胃腸動力的影響[J].安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1999，18(6)：50-51.

[11]王少根，等.黨參對嚴(yán)重燙傷豚鼠腸道的保護(hù)作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合急救雜志，2005，12 (3)：144-145.

[12]唐健元，等.萊菔子對胃腸道的實驗研究及臨床應(yīng)用[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2002，11(5)：474-475.

[13]薛玲，等.萊菔子不同炮制品對消化系統(tǒng)作用及其急性毒性研究[J].山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2006，30：74-75.

[14]Wang Ying-li，Wang Yan.Effects of Sijunzi Dripping Pill on Gastrointestinal Motility of Mice [J].Chinese Herbal Medicines，2014，6(2)：120-124.

[15]DeHaven-Hudkins D.L.，et al.The involvement of the μ-opioid receptor in gastrointestinal pathophysiology： Therapeutic opportunities for antagonism at this receptor [J].Pharmacology & Therapeutics，2008，117： 162-187.

[16]石艷婷，等.萊菔子含藥血清對大鼠離體結(jié)腸平滑肌肌條的作用[J].山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版)，2009，47：34-37.

(責(zé)任編輯李婷婷)

作者簡介：甘聃(1981—)，男，博士，高級研究員，研究方向：食品科學(xué)與營養(yǎng)；瞿晶菁(1984—)，女，碩士，研究方向：毒理學(xué)。

通訊作者：李敏杰(1971—)，女，博士，技術(shù)開發(fā)高級經(jīng)理，研究方向：營養(yǎng)科學(xué)與健康。

Experimental Study on Constipation Relief Function by a Complex Formula Composed by Extract of Codonopsis pilosula and Semen raphani and Resistant Dextrin

GAN Dan1，QU Jing-jing2，3，DU Jun1，CEN Hao1，TIAN Feng1，SHEN Xiao-juan1，GUI Min1，F(xiàn)AN Bo-lin2，3， LI Min-jie1

(1Amway (China) R&D Center，Shanghai 201203，China；2Key Lab of Applied Toxicology of Hubei Province，Wuhan 430079，China；3Center for Disease Prevention and Control of Hubei Province，Wuhan 430079，China)

Abstract：【Objective】 To study the effect of a combination formula containing Codonopsis pilosula and Semen raphani extract and resistant dextrin on intestinal movement and defecation improvement in mice model，and test the binding inhibition of Codonopsis pilosula and Semen raphani extract on Mu-Opioid receptor in an in vitro bioassay.【Method】Effects of testing sample on intestinal movement were studied in mice model using diphenoxylate as model drug.Effect of testing sample on defecation improvemnt were studied in mice model using diphenoxylate as model drug，The binding inhibition activity by single or combination of Codonopsis pilosula and Semen raphani extract on Mu-Opioid receptor was studied by in vitro cell model.【Result】 Codonopsis pilosula and Semen raphani extract，with dose of 933mg/kg BW could significantly improve the intestinal movement and decrease the time of first black fecal grain.Resistant dextrin，with dose of 1 000mg/kg BW could significantly decrease the time of first black fecal grain and increased the total fecal grains and fecal weight.Combination of Codonopsis pilosula and Semen raphani extract and resistant dextrin，with dose of 1 933mg/kg BW，could significantly show the synergy effect on four index including intestinal improvement，time of first black fecal grain，total fecal grains and fecal grains.Meanwhile，in-vitro results showed that significant inhibitory effect on Mu-Opioid receptor by Codonopsis pilosula extract (IC50，7.97mg/mL)，Semen raphani seed extract (IC50，1.95mg/mL) and their combination (IC50，4.84mg/mL)，respectively.【Conclusion】The combination formula could significantly increase the gastrointestinal propulsion，fecal grains and total fecal weight，and decrease the first black carbon fecal grain.This combination formula possessed the potential capability on constipation relief based on overall related results.

Keywords：Codonopsis pilosula；Semen raphani；intestinal propulsion；defecation；Mu-Opioid receptor

*共同第一作者。