細胞因子白細胞介素-6及胰島素生長樣因子-1與類風濕關節炎臨床表現的關聯性研究

段京明 王瑞明 李祥雙 王璨 孟彩云

安徽省淮北礦工總醫院內分泌風濕科 235000

類風濕關節炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種引起滑膜炎癥，導致關節破壞，從而致殘性疾病，我國患病率為0.32%～0.38%，發病機制不十分清楚，基因及環境因素均起重要作用[1]。而細胞因子在發病過程中起重要作用，但報道結果不一，并且與RA骨質疏松的關聯性報道較少。本研究采用酶聯吸附免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)測定RA患者血清白細胞介素-6(interleukin-6，IL-6)及胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1，IGF-1)濃度，分析與RA臨床表現的關聯性。

1 資料與方法

1.1一般資料

61例均來自本院2012-2014年門診及住院患者，其中男19例，女42例，年齡21-80歲。均排除其他疾病。記錄抗環瓜氨酸多肽抗體(anti-cyclic citrullinated peptide antibody，ACCP)、類風濕因子(Rheumatoid factor,RF)滴度、病程、紅細胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、年齡、c反應蛋白(c-reative protein ,CRP)、IL-6、IGF-1水平,白細胞，血紅蛋白，血小板。

1.2檢測方法

表2 IGF-1與RA臨床表現的相關性分析Table 2 The analysis of the relationship between IGF-1 and the clinical manifestations of RF

采用ELISA測定IL-6、IGF-1水平。將所需微孔板放在酶標架上，室溫放置30 min，在酶標包被板上設置標準孔10孔，第一孔中分別加標準品100 ul，加標準品稀釋液50 ul，混勻，從第一孔中各取100 ul，分別加到第二孔中，加標準品稀釋液50 ul，混勻，從第二孔中取50 ul，棄掉，再取50 ul加到第三孔中，加標準品稀釋液50 ul，混勻，取50 ul，加到第四孔中，加標準品稀釋液50 ul，混勻，取50 ul加到第5孔中，加標準品稀釋液50 ul，混勻，取50 ul，棄掉。在待測樣品加樣品稀釋液40 ul，，待測樣品10 ul，混勻。37溫育30分鐘，棄去液體，加入1∶20稀釋洗滌液加滿每孔，靜置30 s，棄去，重復5次，濾紙吸干，每孔中加入酶標試劑50 ul，空白對照除外，溫育30 min，洗滌5次，每孔中加入顯色劑A50 ul，再加入顯色劑B50 ul，震蕩混勻，避光15 min，每孔加終止液50 ul，測定OD值，波長450 nm。

1.3統計學方法

組間均數比較用t檢驗或t/檢驗。數值之間關聯性用直線相關檢驗。檢驗水平α=0.05。

2 結果

2.1骨質疏松組IGF-1水平明顯低于無骨質疏松組(P<0.05)。而男性組與女性組、RF陽性組與陰性組、ACCP陽性組與陰性組、無+輕度貧血與中度+重度貧血、白細胞減少與白細胞不減少、血小板升高與無血小板升高之間均無顯著性差異(P>0.05)(見表1)。

分組n(例)IGF-1(pg/ml)tp性別男1932.9±42.21.57>0.05女4253.7±58.3抗CCP抗體陽性5246.1±56.70.37>0.05陰性953.6±40.2RF陽性4846.7±57.71.53>0.05陰性1349.3±41.4骨質疏松有3626.4±31.04.00<0.05無2579.8±31.0貧血無+輕度5246.6±54.70.24>0.05中+重度951.2±55.4白細胞減少652.8±66.80.26>0.05正常5546.6±53.5血小板正常4544.3±54.30.70>0.05升高1655.4±55.1

2.2IGF-1與ACCP滴度、RF滴度、病程、ESR、年齡、CRP均無相關性(P>0.05)，與疼痛關節數及腫脹關節數呈負相關(P<0.05)(見表2)。

2.3男性RA患者IL-6水平明顯比女性RA患者水平低(P<0.05)，ACCP陰性組明顯比陽性組低(P<0.05)，骨質疏松組明顯比無骨質疏松組低(P<0.05)。而RF陽性組與陰性組、無+輕度貧血與中度+重度貧血、白細胞減少與白細胞不減少、血小板升高與無血小板升高之間均無顯著性差異。(P>0.05)(見表3)。

2.4IL-6水平與ACCP滴度、疼痛關節數及腫脹關節數呈正相關(P<0.05)，與IGF-1水平呈負相關(P<0.05)，與RF滴度、病程、ESR、年齡、CRP均無相關性(P>0.05)(見表4)。

分組nIL-6(ng/ml)tp性別男1923.8±25.72.51<0.05女4244.6±37.2抗CCP抗體陽性5241.5±36.73.42<0.05陰性918.4±13.3RF陽性4840.5±37.81.39>0.05陰性1329.2±21.7骨質疏松有3619.6±18.24.25?<0.05無2551.0±38.4貧血無+輕度5239.1±36.00.50>0.05中+重度932.6±31.0白細胞減少637.9±39.40.02>0.05正常5538.1±35.1血小板正常4537.5±36.10.23>0.05升高1639.9±33.5

3 討論

RA發病機制目前尚不完全清楚，在RA發生發展過程中，細胞因子起重要作用。IL-6有多種功能，當它被激活時，不僅能引起急性炎癥反應如引起發熱，并且在各種自身免疫性疾病包括RA中起重要作用，在RA患者滑膜組織及血清中均發現高濃度的IL-6，S00-jin chung等研究發現IL-6僅與CRP有關聯，IL-6能明顯升高DAS28積分[2]，本研究發現IL-6水平與腫脹關節數及疼痛關節數均呈正相關，表明其使患者關節腫痛進一步加重，參與RA的發病，Patick研究發現IL-6與RA患者MCP-1呈正相關，在早期滑膜炎與IL-6明顯相關，可能與激活B或T淋巴細胞活性，產生包括CRP等炎癥介質有關[1]。本研究發現女性RA患者IL-6水平明顯高于男性患者，可能與女性患者疾病進展較快有關。抗CCP抗體陽性組IL-6水平明顯高于陰性組，Michelle發現通過潑尼松治療能顯著降低IL-6水平[3]。

表4 IL-6與RA臨床表現的相關性分析Table 4 The analysis of the relationship between IL-6 and the clinical manifestations of RF.

本研究發現，骨質疏松組IL-6水平明顯低于無骨質疏松組，Monika等通過托珠單抗治療RA發現，不僅能降低RA活動指數，并且能阻止放射學進展，提高骨密度[4]。與本研究相符。IGF-1是一種含有70個氨基酸殘基與胰島素有相似結構的多肽，在骨骼中含量極其豐富，對骨代謝有重要的調節作用：能促進成骨細胞的有絲分裂，還能通過不依賴有絲分裂的途徑促進骨基質的合成及礦化。Marc研究發現：在動物模型中IL-6的超表達與GH/IGF-1軸有關。絕大部分活性IGF-1在肝臟中產生，RA患者IGF-1半衰期明顯縮短，GH/IGF-1軸活性的降低，打破細胞因子的平衡，在RA發病中扮演重要角色[5]。吳文等認為：IGF-1通過對抑制膠原酶的表達，從而抑制骨中膠原的降解，影響骨形成，但IGF-1水平與骨量的關系，目前無一致結論。但絕經期婦女IGF-1水平下降可能是發生骨質疏松的重要因素之一[6]。Sun Hai biao通過對坐骨神經損傷的小鼠注射IGF-1可以刺激成骨細胞的活性及增加細胞數量，減少骨丟失，研究表明神經損傷可以引起骨平衡破壞，從而引起骨丟失，認為成骨細胞活性受IGF-1受體調節[7]。Inga lill Engvall研究發現IGF-1能刺激II型膠原的合成并且糖皮質激素能提高IGF-1的活性，在激素治療RA患者組中IGF-1明顯增加，沒有激素治療的患者IGF-1與骨密度呈負相關[8]。Elisabeth研究發現，IL-1B和TNF-1能減少IGF-1受體絡氨酸磷酸化，從而阻斷細胞內活性傳導通路[9]。本研究發現IGF-1水平骨質疏松組明顯低于無骨質疏松組，與上述研究相符。Helena通過使用雌激素替代治療發現能明顯降低IL-6受體水平，并且提高IGF-1水平[10]，本研究發現IGF-1與IL-6水平、抗CCP抗體滴度、腫脹關節數、疼痛關節數呈負相關，并且骨質疏松組IGF-1水平明顯低于無骨質疏松組，表明IGF-1有阻止RA病情進展的作用。