大花蕙蘭疫病病原鑒定及防治藥劑篩選

秦建彬，魏翠華 ，江　昊

(福建省福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所　350019)

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大花蕙蘭疫病病原鑒定及防治藥劑篩選

秦建彬，魏翠華 ，江昊

(福建省福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所350019)

對(duì)福州地區(qū)感病大花蕙蘭疫病的病原菌進(jìn)行鑒定并進(jìn)行接種試驗(yàn)，采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定7種藥劑對(duì)該病菌的抑制效果。試驗(yàn)結(jié)果表明：大花蕙蘭疫病的病原為棕櫚疫霉；大花蕙蘭新葉和受傷的老葉易感病，接種后的發(fā)病率為100.0%和53.3%，無(wú)刺傷的老葉則不發(fā)病；高濃度的四霉素和烯酰嗎啉對(duì)病原菌的抑制效果最好，平均抑菌率達(dá)到95.0%以上，各藥劑的抑菌效果隨著稀釋濃度的升高而下降。

大花蕙蘭疫病；病原鑒定；棕櫚疫霉；藥劑篩選

大花蕙蘭又名虎頭蘭、喜姆比蘭，植物分類(lèi)學(xué)上屬蘭科蘭屬多年生草本植物，是國(guó)際上五大盆栽蘭花之一，也是重要的切花蘭花種類(lèi)之一[1]。大花蕙蘭疫病菌主要為害幼苗和成株的莖基部與葉片，其中心葉最易受到傷害，發(fā)病初期病部為褐色小斑點(diǎn)，水漬狀，適溫高濕時(shí)病斑迅速擴(kuò)大，變?yōu)楹稚蟀撸詈蟛〔扛癄€易拔起，整株死亡。每年的6-10月是該病高發(fā)期，如不及時(shí)處理防治，傳染極快，是大花蕙蘭的一種毀滅性病害。在國(guó)內(nèi)對(duì)于花卉疫病方面的研究較少，唐祥寧等[2]對(duì)上海地區(qū)大花蕙蘭真菌性病害進(jìn)行了鑒定，認(rèn)為是棕櫚疫霉菌引起了大花蕙蘭的疫病；陳永強(qiáng)等[3]研究鑒定了廣州地區(qū)9種花卉疫病的發(fā)生情況，發(fā)現(xiàn)柑橘生疫霉、棕櫚疫霉、煙草疫霉等都會(huì)引起花卉疫病發(fā)生；姬廣海等[4]研究發(fā)現(xiàn)，黃單胞菌屬的地毯草黃單胞菌是引起紅掌細(xì)菌性疫病的病原菌。可見(jiàn)引起花卉疫病的病因較為復(fù)雜，不同地點(diǎn)由于生態(tài)條件不同，或者同一地點(diǎn)發(fā)病時(shí)間不同，導(dǎo)致疫病的優(yōu)勢(shì)菌種類(lèi)都可能不同。對(duì)于在福建地區(qū)大花蕙蘭疫病發(fā)生發(fā)展的研究尚未見(jiàn)到報(bào)道，因此本研究對(duì)在福州栽培大花蕙蘭過(guò)程中出現(xiàn)的疫病進(jìn)行了病原菌初步鑒定和藥劑篩選試驗(yàn)，以期為后續(xù)的進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。

1　材料與方法

1.1供試材料

1.1.1蘭花材料2014年在福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所的蘭花大棚中采集感病植株的病部作為分離鑒定的材料。

1.1.2供試藥劑

甲霜·霜霉威(青島百禾源生物工程有限公司)，咪鮮松脂銅(南京博士邦化工科技有限公司)，大生M-45(陶氏益農(nóng))，烯酰錳鋅(福建新農(nóng)大正生物工程有限公司)，0.15%四霉素水劑(遼寧微科生物工程有限公司)，多菌靈(江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司)，烯酰嗎啉(德國(guó)勞倫斯生命科學(xué)有限公司)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1病原菌的分離鑒定病原菌的分離鑒定和藥劑篩選試驗(yàn)均在福州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。分別剪取病葉和感病莖基部，沖洗晾干，在病健交界處切取5 mm×5 mm的小塊，經(jīng)75%乙醇、升汞依次消毒，再用無(wú)菌水進(jìn)行多次漂洗，移入選擇性V8培養(yǎng)基(含五氯硝基苯50 μg/mL、多菌靈50 μg/mL、青霉素50 μg/mL和利福平100 μg/mL)中培養(yǎng)，從新長(zhǎng)出的菌落邊緣挑取菌絲移入新制備的培養(yǎng)基中進(jìn)行純培養(yǎng)。觀察菌落的生長(zhǎng)情況，顯微鏡觀察孢囊梗、孢子囊的形態(tài)，根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[5-6]對(duì)分離的菌株進(jìn)行鑒定。

1.2.2孢子囊的制備與致病性測(cè)定將菌株置于V8培養(yǎng)基上生長(zhǎng)3 d后，從菌落邊緣切取2 mm×2 mm的菌絲塊移至V8培養(yǎng)液中，在25℃黑暗條件下培養(yǎng)3 d，倒去培養(yǎng)液換上無(wú)菌土壤浸出液，在25℃光照條件下培養(yǎng)3 d后在顯微鏡下鏡檢是否產(chǎn)生孢子囊，待產(chǎn)生大量孢子囊后，將孢子囊懸浮液置于4℃冰箱中，再放入25℃恒溫箱中約20 min，使游動(dòng)孢子充分釋放，于磁力振蕩器上混勻，并將孢子濃度調(diào)至4×103個(gè)/mL。

剪取健康的大花蕙蘭新葉與老葉，用清水洗凈并用75%乙醇進(jìn)行表面消毒。取25 μL孢子囊懸浮液分別接種于葉片上，接種分為刺傷和不刺傷兩種處理，每個(gè)處理10片葉，重復(fù)3次，以接種無(wú)菌水為對(duì)照，接種后保濕6 d，記錄葉片的發(fā)病情況。

1.2.3抑菌試驗(yàn)采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定[5]，用無(wú)菌水將供試藥劑設(shè)置為500、1000和1500倍液3個(gè)稀釋濃度，分別取200 μL加到V8培養(yǎng)基中攤平，用無(wú)菌接種針將菌絲挑到含藥培養(yǎng)基中央。取200 μL無(wú)菌水加入V8培養(yǎng)基作對(duì)照(CK)處理。每個(gè)處理3次重復(fù)。放于28℃下培養(yǎng)3 d，用“十字交叉法”測(cè)量菌株在含不同藥劑培養(yǎng)基上的菌落直徑，計(jì)算各種藥劑對(duì)菌絲的生長(zhǎng)抑制率。抑菌率(%)=[(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/對(duì)照菌落直徑]×100

2　結(jié)果與分析

2.1病原菌孢子形態(tài)特征

在V8培養(yǎng)基上菌落呈圓形，灰白色，氣生菌絲中間多，四周少，菌絲寬度為4.0～9.6 μm；氣生菌絲水培后形成較多的淡褐色厚垣孢子，孢囊梗簡(jiǎn)單合軸式分枝產(chǎn)生大量孢子囊，孢子囊形狀不規(guī)則，呈橢圓形、卵形，倒梨形或不規(guī)則形，大小為28～67 μm×22～44 μm，長(zhǎng)寬比為1.1～1.9；乳突明顯，常為單乳突，有時(shí)為雙乳突，乳突高2.2～4.8 μm；孢子囊基部圓形，孢囊柄多生于正基部，孢子囊易脫落，脫落后具短柄，長(zhǎng)度為0～6.4 μm。

2.2病原菌鑒定結(jié)果

根據(jù)病原菌的菌落生長(zhǎng)特征和形態(tài)特征，孢囊梗、孢子囊形狀和大小，厚垣孢子及寄主范圍，鑒定該病原菌為卵菌綱霜霉目疫霉科疫霉屬棕櫚疫霉[Phytophthorapalmivora(Bulter)Bulter]。

2.3致病性測(cè)定結(jié)果

致病性測(cè)定結(jié)果表明，大花蕙蘭新葉2個(gè)處理發(fā)病率達(dá)到了100.0%，而老葉刺傷的發(fā)病率為53.3%，無(wú)刺傷的不發(fā)病。癥狀與發(fā)病植株一致，對(duì)照不發(fā)病，從發(fā)病組織中重新分離出的病原菌與接種的病原菌完全一致，說(shuō)明引起大花蕙蘭疫病的病原菌為棕櫚疫霉。

2.4藥劑抑菌效果

從表1可見(jiàn)，不同藥劑對(duì)菌絲的抑制效果存在差異，各藥劑隨著稀釋濃度的升高抑制效果下降。在500倍液濃度下，抑制效果最好的是四霉素和烯酰嗎啉，平均抑菌率達(dá)到95.0%以上，與其他處理差異達(dá)極顯著水平；其次是烯酰錳鋅，平均抑制率為82.4%；大生和咪鮮松脂銅的平均抑菌率在50.0%以上；抑制效果最差的是多菌靈，平均抑菌率只有29.9%。在1000倍液濃度下，各藥劑的平均抑菌率都有所下降，四霉素和烯酰嗎啉的平均抑菌率為93.2%和90.9%，與其他處理差異達(dá)極顯著水平；烯酰錳鋅的平均抑菌率為61.9%；多菌靈的平均抑菌率最低，為19.7%。在1500倍液濃度下，各藥劑平均抑菌率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，四霉素和烯酰嗎啉兩處理的平均抑菌率為70.2%和61.4%，兩處理間差異達(dá)顯著水平，與其他處理差異達(dá)極顯著水平；烯酰錳鋅的平均抑菌率為32.5%；大生、咪鮮松脂銅、甲霜·霜霉威和多菌靈處理間的平均抑菌率較低，且這4種藥劑之間抑菌率差異不顯著。

表1　不同藥劑對(duì)棕櫚疫霉的抑制效果

3　結(jié)論與討論

經(jīng)過(guò)鑒定，引起福州地區(qū)大花蕙蘭疫病的病原菌是棕櫚疫霉[Phytophthorapalmivora(Bulter)Bulter]，這與唐祥寧在上海地區(qū)對(duì)大花蕙蘭疫病的研究以及陳永強(qiáng)在廣州地區(qū)對(duì)卡特蘭疫病的研究結(jié)果一致[2-3]。謝為龍[7]報(bào)道了在臺(tái)灣地區(qū)棕櫚疫霉也是蘭花疫病的主要病原菌之一，說(shuō)明棕櫚疫霉在不同的地區(qū)都會(huì)引起洋蘭的疫病。該病菌的寄主范圍廣泛[8]，主要寄主包括鳳梨、木瓜、番木瓜、柑橘、枇杷、蝶蘭屬、洋蒲桃等，其危害植物后殘留在土壤中或者周邊植株上，等到氣候條件適宜時(shí)可再次侵染新植株。侵染過(guò)程分為游動(dòng)孢子的釋放、游動(dòng)孢子游動(dòng)、休止孢子形成、休止孢子萌發(fā)、附著孢子形成、菌絲擴(kuò)展、孢子梗形成和新一代孢子囊產(chǎn)生等[9]。因此，大花蕙蘭種植大棚周邊應(yīng)盡量避免種植棕櫚疫霉的寄主植物。

致病性研究發(fā)現(xiàn)大花蕙蘭的嫩葉和受傷的老葉較易感病，因此在大花蕙蘭嫩葉長(zhǎng)出和換盆時(shí)應(yīng)做好預(yù)防工作，可在每年春季大花蕙蘭新葉長(zhǎng)出時(shí)施用四霉素和烯酰嗎啉進(jìn)行防治。

室內(nèi)藥劑篩選結(jié)果發(fā)現(xiàn)，低濃度的四霉素和烯酰嗎啉對(duì)大花蕙蘭疫病病原菌有很好的抑制作用，可以為田間防治該病提供一定的參考，但是各藥劑在田間的實(shí)際防治效果還需要進(jìn)一步研究。

[1]盧思聰.中國(guó)蘭與洋蘭[M].北京：金盾出版社，1994.

[2]唐祥寧，鄧建玲.上海地區(qū)大花蕙蘭真菌病害鑒定[J].江西植保，2008，31(4)：198-200.

[3]陳永強(qiáng)，戚配坤，姜子德.廣州地區(qū)九種花卉疫病病原菌的鑒定[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，20(4)：5-9.

[4]姬廣海，魏亞?wèn)|，蔣桂芝，等.紅掌細(xì)菌性疫病的病原菌初步鑒定[J].植物病理學(xué)報(bào)，2004,34(2)：107-111.

[5]王自然，郭俊，周東果，等.檸檬苗期一種新病害的病原鑒定及防治藥劑的室內(nèi)篩選[J].植物保護(hù)，2012,38(4)：166-170.

[6]余永年.中國(guó)真菌志霜霉目[M].北京：科學(xué)出版社，1998:139-191.

[7]謝為龍.臺(tái)灣花卉疫病[J].動(dòng)植物檢疫，1998(25)：27-28.

[8]余永年，莊文穎，李金亮.柑橘疫霉[J].真菌學(xué)報(bào)，1986(S1)：31-39.

[9]郭子祥，何成興，吳文偉，等.烯酰嗎啉、甲霜靈錳鋅對(duì)辣椒疫霉的抑菌活性[J].云南大學(xué)學(xué)報(bào)，2008,30(S1)：188-189.

(責(zé)任編輯：林玲娜)

Pathogen identification and chemical screening of cymbidium blight

QIN Jian-bin, WEI Cui-hua, JIANG Hao

(FuzhouInstituteofAgriculturalSciences,FujianProvince350019)

In this paper, pathogen identification and inoculation experiment of cymbidium blight were carried out. Inhibition effect of seven chemicals on cymbidium blight was studied by mycelial growth rate method. The results showed that the pathogen of cymbidium blight wasPhytophthorapalmivora. Tender and wounded old leaves were infected easily. Infection rate after inoculation were 100.0% for young leaves and 53.3% for old ones, respectively. Old leaves without wound showed no infection. High concentration tetramycin and dimethomorph had good inhibition effects on pathogen, showed over 95.0% of inhibition rate. All tested chemicals had downward trend of controlling efficacy with increasing diluted concentration.

Cymbidium blight; pathogen identification;Phytophthorapalmivora; chemical screening

2016-02-25

秦建彬，男，1977年生，副研究員。

福州市科技攻關(guān)項(xiàng)目(2013-N-51)。

10.13651/j.cnki.fjnykj.2016.03.006