安乳消痛丸對乳腺增生模型大鼠的影響

周朝暉，劉鴻雁，安曉芳，賈　忠，樵小健，姜專基天水市中西醫結合醫院，甘肅 天水 7400；蘭州市肺科醫院；3甘肅省腫瘤醫院

安乳消痛丸對乳腺增生模型大鼠的影響

周朝暉1，劉鴻雁2，安曉芳1，賈忠2，樵小健1，姜專基3△
1天水市中西醫結合醫院，甘肅 天水 741020；2蘭州市肺科醫院；3甘肅省腫瘤醫院

目的：研究中藥安乳消痛丸對大鼠的增生乳腺肉眼形態、組織病理學形態和血清雌、孕激素水平的影響。方法：建立乳腺增生大鼠模型，空白對照組：給予蒸餾水灌胃，20mL/kg，1次/d，連續25天。模型對照組：給予蒸餾水灌胃，20mL/kg，1次/d，連續25天。安乳消痛丸低、中、高劑量分別給予安乳消痛丸低（2.5g/kg）、中（5.1 g/kg）、高（7.7 g/kg）劑量，20mL/kg，1次/d，連續25天。結果：與空白對照組相比，模型組大鼠血清雌二醇（E2）含量顯著增高，孕酮（P）含量明顯降低，安乳消痛丸各劑量組大鼠血清E2含量降低、P含量升高，差異有統計學意義（P＜0.05）；安乳消痛丸可減輕大鼠乳頭腫脹度，降低乳腺組織重量；安乳消痛丸可可減少大鼠乳腺小葉和腺泡數目，降低腺泡上皮細胞高度，縮小腺腔直徑。結論：安乳消痛丸通過調節大鼠血清性激素水平，改善乳腺組織病理變化，對大鼠乳腺增生具有較好治療作用。其機理可能是通過降低血清E2含量，升高P含量，調節二者的相對平衡而實現的。

安乳消痛丸；性激素；乳腺增生；動物實驗；大鼠

乳腺增生是女性常見病，發病率約占乳房疾病的75%，居乳腺疾病首位，隨著生活節奏加快、女性社會壓力增大及受生育率下降的影響，該病的發病率逐年增高，近年來已引起普遍關注［1］。目前臨床上對乳腺增生病還沒有一種適用性廣且療效肯定的治療藥物或方案［2］。中醫藥治療乳腺增生病有其獨到之處。安乳消痛丸為院內中藥制劑，多年來臨床用于治療乳痛癥和乳腺增生癥。筆者對安乳消痛丸干預大鼠乳腺增生模型進行了藥效學研究，為其臨床使用提供動物實驗和組織病理學依據。

1　材料與方法

1.1實驗動物S D大鼠，雌性，清潔級，體質量190～200 g，購自蘭州生物制品研究所實驗動物中心，合格證號：醫動字第14-001。

1.2藥品及試劑苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司生產，國藥準字H12020534）、黃體酮注射液（天津金耀氨基酸有限公司生產，國藥準字H12020529）；乳康片（安康正大制藥有限公司生產，國藥準字Z20003227）；安乳消痛丸（甘肅省腫瘤醫院院內中藥制劑，甘藥制字Z20140008）；生理鹽水（四川科倫藥業股份有限公司生產，國藥準字H51021157）；人血清雌二醇（E2）、孕酮（P）放射免疫試劑盒（均由深圳拉爾文生物工程有限公司提供）。

1.3方法

1.3.1乳腺增生模型的建立成年雌性未孕S D大鼠60只，體質量190～200 g，正常飼養5天后，采用隨機數字表法分為安乳消痛丸高、中、低劑量組，乳康片組，模型對照組，空白對照組，每組10只。空白對照組肌肉注射等量生理鹽水，其他各組大鼠肌肉注射雌二醇0.5mg/（k g·d）共25天后注射黃體酮5mg/（k g·d）共5天。實驗第31天從模型對照組和空白對照組隨機抽取實驗大鼠各3只，行組織病理學檢查，如顯示模型組大鼠乳腺導管及腺泡增生，則提示造模成功。

1.3.2給藥造模成功后開始灌胃給藥。空白對照組給予蒸餾水灌胃，20mL/k g，1次/d，連續25天。模型對照組給予蒸餾水灌胃，20mL/k g，1次/d，連續25天。安乳消痛丸低、中、高劑量組分別給予安乳消痛丸低（2.5mL/k g）、中（5.1 mL/k g）、高（7.7 g/k g）劑量，20mL/k g，1次/d，連續25天。

1.3.3樣本采取各組大鼠于末次給藥后禁食10小時，先稱取大鼠體質量并記錄，然后按照體質量腹腔注射戊巴比妥鈉進行麻醉，股動脈采血，離心保存，待后期采用放射免疫法測定大鼠血清E2、P水平；最后脫臼法處死大鼠，用打孔器于第2～3對乳房中心對大鼠乳腺腺體組織進行取材，電子天平稱重后用中性甲醛溶液固定，石蠟包埋、切片、染色。光學顯微鏡下觀察大鼠乳腺組織形態學變化，每例樣本隨機選取5個視野，取乳腺小葉數量及腺腔直徑平均值計數，按半定量分級標準比較分析，進行統計處理。

1.4統計學方法應用S P SS 13.0軟件包進行統計學處理，多組比較行單因素方差分析，方差齊性時用L S D檢驗，方差不齊用D unn et t′s T3檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

2.1體質量和乳腺肉眼形態自造模起，體質量隨時間延長而逐步降低，至造模結束時，大多數大鼠體質量未恢復至造模前；肉眼觀察大多數大鼠乳腺增大、發育，乳頭紅腫，觸之較韌，部分伴有乳暈形成。給予安乳消痛丸治療后，各劑量組大鼠乳頭紅腫減輕，觸之較軟，增生狀態減輕。而模型對照組乳頭無明顯變化。空白對照組大鼠實驗結束時，體質量增加，未見明顯增生。

2.2血清E2、P水平與空白對照組相比，模型對照組的E2水平明顯升高、P水平明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.05）。安乳消痛丸各劑量組及乳康片組血清E2水平不同程度降低，P水平不同程度升高。安乳消痛丸降低E2及升高P的作用具有劑量依賴性，隨著藥物劑量的增加，其降低或升高的程度逐漸增強，與模型對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.3乳房質量與空白對照組比較，模型對照組大鼠第2、3對乳房質量均顯著增加，差異有統計學意義（P＜0.05）。與模型對照組比較，安乳消痛丸低、中、高劑量組均可降低乳腺增生大鼠第2、3對乳房的質量，差異有統計學意義（P＜0.05），隨著劑量的增加其降低程度增強，與模型對照組相比，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

表1　各組乳腺增生模型大鼠激素水平比較（±s）

表1　各組乳腺增生模型大鼠激素水平比較（±s）

注：與模型對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與正常對照組比較，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。

表2　各組乳腺增生模型大鼠乳房質量比較（±s）

表2　各組乳腺增生模型大鼠乳房質量比較（±s）

注：與模型對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01；與正常對照組比較，#表示P＜0.05，##表示P＜0.01。

2.4乳腺病理學空白對照組大鼠乳腺導管、小葉、腺泡鏡下組織結構基本正常，腺體未見明顯增生。模型對照組大鼠乳腺部分小導管擴張，導管壁略有增厚，周圍纖維組織增生明顯，細胞較為活躍，間質有少量以小淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤；乳腺小葉單位數目增多密集，小葉形態欠規則，鏡下顯示相互靠近，較為擁擠；乳腺腺泡大小不等，數目增多，形態不規則，甚至變形，部分結構混亂，可見融合傾向，腺泡內有粉色滲出物。安乳消痛丸各劑量組、乳康片組大鼠增生程度均有減輕，其中安乳消痛丸高、中劑量組與與模型對照組比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表3—4及圖1—6。

表3　各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅰ（±s）

表3　各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅰ（±s）

注：與空白對照組比較，##表示P＜0.01；與模型對照組比較，*表示P＜0.05；**表示P＜0.01。

?

表4　200 HPF下各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅱ（±s）

表4　200 HPF下各組乳腺增生模型大鼠乳腺病理組織比較Ⅱ（±s）

注：與空白對照組比較，##表示P＜0.01；與模型對照組比較，*表示P＜0.05，**表示P＜0.01。

組別　只數　劑量/（g·kg-1）　乳腺小葉數/個　腺腔直徑/mm左側　右側　左側　右側空白對照組　10　-　16.13±4.78　16.94±4.18　0.31±0.14　0.30±0.16模型對照組　10　-　26.03±2.46##　25.68±2.36##　0.99±0.17##　1.00±0.18##乳康片組　10　0.675　15.00±4.08**　15.06±3.26**　0.67±0.26*　0.65±0.24*安乳消痛丸高劑量組　10　7.700　15.40±4.50**　13.90±3.38**　0.41±0.16**0.41±0.17**安乳消痛丸中劑量組　10　5.100　16.00±4.89**　16.00±4.89**　0.76±0.18*　0.73±0.17*安乳消痛丸低劑量組　10　2.500　23.11±1.91　23.00±3.62　0.81±0.24　0.80±0.26

圖1　HE染色10×40空白對照組　

圖2　HE染色10×40模型對照組

圖3　HE染色10×40乳康片組

圖4　HE染色10×40　安乳消痛丸大劑量組　

圖5　HE染色10×40安乳消痛丸中劑量組

圖6　HE染色10×40安乳消痛丸小劑量組

3　討論

雌激素和孕激素在維持女性第二性征和內分泌功能穩定方面具有重要作用，乳腺是女性性激素的重要靶器官之一，雌激素的生理作用為刺激乳腺導管和小葉增生，同時促進組織水、鈉潴留，進一步引起小葉間質水腫，乳腺增生病的發生與體內E2水平失衡，同時P的拮抗作用不足有明顯關系。

中醫藥在治療乳腺增生病方面有其獨特的優勢，通常通過直接或間接降低體內雌激素的水平和作用來發揮治療作用［4］。安乳消痛丸是中藥制劑，主要由柴胡、當歸、白芍、仙茅、淫羊藿、巴戟天、川芎等組成。當歸補血活血，調經止痛；白芍養血斂陰，柔肝止痛；仙茅行血消腫；川芎活血止痛；柴胡和巴戟天用于月經不調［5］。諸藥合用具有明顯的止痛和抗乳腺增生作用。

在本實驗中，乳腺增生大鼠經安乳消痛丸治療后，血清E2水平降低，乳腺腺泡數目減少，部分腺泡出現萎縮現象，導管擴張程度減輕，部分乳腺已恢復到正常狀態。隨著安乳消痛丸給藥劑量逐漸增加，E2逐漸降低、P水平逐漸升高，該結果提示安乳消痛丸能夠影響模型大鼠E2、P水平，且存在量效關系，這可能是安乳消痛丸治療乳腺增生病的主要機理［6］。此外組織病理結果也顯示，安乳消痛丸對乳腺增生有良好的治療作用。但其在人體中的抗增生機理和血清學變化還有待于進一步臨床研究明確。

［1］ 王玉蘭.健康知識教育聯合生活習慣護理在體檢發現乳腺增生患者護理中的應用價值［J］.西部中醫藥，2014，27（2）：122-123.

［2］ 張春霞，李曉琴，孫亮，等.平衡針刺配合桂枝茯苓丸治療乳腺囊性增生療效觀察［J］.西部中醫藥，2013，26（8）：111-113.

［3］ 王燦，苗明三.乳絡通膠囊對大鼠乳腺增生模型的影響［J］.中藥藥理與臨床，2014，30（2）：128-130.

［4］ 姚艷飛，路秀麗，王莘.蛹蟲草菌絲體多糖對小鼠乳腺增生模型的影響［J］.中草藥，2011，42（9）：1796-1798.

［5］ 劉鴻雁，張櫻山，陳德道，等.HPLC法測定二十五味珍珠丸中3種成分［J］.中成藥，2013，35（8）：1689-1692.

［6］ 阮詩蘭，周勝利，金鶴.中醫藥治療乳腺增生的研究進展［J］.安徽醫藥，2011，15（12）：1593-1595.

Effectsof AnRu XiaoTong Pillson the RatM odelw ith M amm ary G land H yperp lasia

ZHOU Chaohui1，LIU Hongyan2，AN Xiaofang1，JIA Zhong2，QIAO Xiaojian1，JIANG Zhuanji3△
1 TianshuiMunicipality Integrative Medicine Hospital，Tianshui741020，China；2 Lanzhou Municipal Lung Hospital；3 Gansu Provincial Cancer Hospital

Objective：To study the influence of AnRu XiaoTong pillson the levelsof estrogen（E2）and progesterone（P），histopathologicalmorphology and themorphology of hyperplasticmammary gland in the naked eye examination of the rats.Methods：Ratmodelsw ith hyperplasiawere prepared，blank controlgroup：intragastric administration of distilled water，20m L/kg，once each day，for 25 consecutive days.Model control group：intragastric adm inistration of distilled water，20 m L/kg，once each day，for 25 consecutive days.High，moderate and low doses groups of AnRu XiaoTong pillswere given w ith AnRu XiaoTong pills in low（2.5 g/kg），moderate（5.1g/kg）and high （7.7 g/kg），20m L/kg，once each day，for25 consecutive days.Results：Compared w ith blank controlgroup，the contents of E2in the serum of the rats notably increased，and the contents of P significantly decreased in themodel group，the contents of E2lowered and the contentsof P increased in different doses groups of AnRu XiaoTong pills （P＜0.05）；AnRu XiaoTong pills could relieve nipple swelling of the rats，decrease theweightofmammary tissue；it could reduce the numbersofmammary gland lobules andmammary acini，decrease the heightof aciniepithelia and reduce acinidiameter.Conclusion：AnRu XiaoTong pills are effective in treatingmammary gland hyperplasia of the ratsby regulating the levelsof sex hormone of the ratsand improving pathological changesofmammary glands.Its mechanism mightbe realized through decreasing the contents of E2and raising the contents of P to adjust relative balance between E2and P.

AnRu XiaoTong pills；sex hormone；mammary gland hyperplasia；animalexperiment；the rats

R285.5

A

1004-6852（2016）04-0026-04

2015-10-04

周朝暉（1979—），男，副主任醫師。研究方向：乳腺疾病的臨床診治。

姜專基（1978—），男，副主任醫師。研究方向：乳腺腫瘤。