骨痹止痛液對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中相關(guān)因子表達(dá)影響的研究

姚興璋，李興勇，李喜香，龐增林，麻　虎，宋　敏甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 70050；甘肅省第三人民醫(yī)院；張家川縣中醫(yī)醫(yī)院；甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

骨痹止痛液對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨中相關(guān)因子表達(dá)影響的研究

姚興璋1，李興勇2，李喜香1，龐增林2，麻虎3，宋敏4
1甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2甘肅省第三人民醫(yī)院；3張家川縣中醫(yī)醫(yī)院；4甘肅中醫(yī)藥大學(xué)

目的：研究骨痹止痛液對動物模型膝關(guān)節(jié)軟骨中白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子α （TNF-α）的影響。方法：將30只新西蘭大白兔隨機(jī)分為骨痹止痛液組（A組）、鹽酸氨基葡萄糖片組（B組）、模型組（C組）3組，每組10只。建立膝骨性關(guān)節(jié)炎模型后，分別給予骨痹止痛液、鹽酸氨基葡萄糖片、生理鹽水灌胃，連續(xù)8周。于8周后取樣，采用肉眼觀察形態(tài)學(xué)改變、HE染色、RT-PCR檢測軟骨中IL-1、TNF-α因子表達(dá)等指標(biāo)。結(jié)果：肉眼觀察：A組及B組較給藥前無明顯變化，C組關(guān)節(jié)軟骨破壞較為嚴(yán)重，甚至出現(xiàn)糜爛。RT-PCR：A組、B組與C組比較，A組、B組兔軟骨標(biāo)本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）。兔軟骨標(biāo)本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達(dá)量A組較B組減低（P＜0.05）。結(jié)論：骨痹止痛液通過減少促炎因子（IL-1、TNF-α）的表達(dá)來抑制炎癥反應(yīng)，從而減緩關(guān)節(jié)損傷。

骨痹止痛液；骨性關(guān)節(jié)炎，膝關(guān)節(jié)；白細(xì)胞介素-1；腫瘤壞死因子α

膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎（k n ee osteoart h r i t i s，K OA）是一種慢性退行性疾病，好發(fā)于老年人群［1］。K OA發(fā)病機(jī)制尚未明確，細(xì)胞因子是引起K AO發(fā)病的關(guān)鍵因素。本研究通過觀測骨痹止痛液對兔K OA模型關(guān)節(jié)軟骨中白細(xì)胞介素-1（I L-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）含量的影響，為臨床上使用骨痹止痛液提供客觀依據(jù)。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物與分組清潔級新西蘭大耳兔30只，雌雄不限，體質(zhì)量為（2.5±0.3）k g，采用隨機(jī)數(shù)字表分為3組，分別為骨痹止痛液組（A組）、鹽酸氨基葡萄糖片組（B組）、模型組（C組），每組10只。

1.2動物造模所有實(shí)驗(yàn)動物實(shí)驗(yàn)性飼養(yǎng)1周，然后按照文獻(xiàn)［2］描述方法造模：采用外科手術(shù)打開兔膝關(guān)節(jié)后，切斷其前交叉韌帶、內(nèi)側(cè)副韌帶及取出內(nèi)側(cè)半月板。術(shù)后每只動物給予青霉素40萬U/d，持續(xù)7天。造模后7天每日驅(qū)趕實(shí)驗(yàn)動物活動半小時，驅(qū)趕4周后K OA造模成功。

1.3給藥參照《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》，按體表面積換算后，分別喂6mL骨痹止痛液，150mg/k g鹽酸氨基葡萄糖片，生理鹽水。結(jié)合體質(zhì)量按相應(yīng)劑量蒸餾水稀釋成20 mL后連續(xù)灌服8周后處死白兔。

1.4觀察指標(biāo)H E染色光鏡觀察及R T-PC R測定I L-1m R N A、I L-1、TNF-αm R N A表達(dá)量。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用S P SS 19.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計處理，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s）表示，統(tǒng)計方法對各時段采用單因素方差分析（A N O V A），以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1HE染色光鏡觀察8周后A組、B組軟骨細(xì)胞排列不規(guī)則現(xiàn)象在部分區(qū)域仍可見，但相比C組明顯少見，各層界限欠清楚，鏡下個別區(qū)域有簇集現(xiàn)象，潮線個別不完整；C組軟骨組織表層變薄甚至部分消失，表面粗糙，可見一些裂隙或者剝脫；軟骨細(xì)胞密度分布不均一，存在細(xì)胞簇集現(xiàn)象，軟骨細(xì)胞無明顯排列順序，潮線多不完整。見圖1。

圖1　各組關(guān)節(jié)軟骨變化（HE染色）

2.2IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達(dá)量A組、B組與C組比較，A組、B組兔軟骨標(biāo)本中I L-1m R N A、TNF-αm R N A表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）。A組與B組比較，A組兔軟骨標(biāo)本中I L-1m R N A、TNF-αm R N A表達(dá)量減低（P＜0.05）。見表1。

表1　各組動物軟骨標(biāo)本中IL-1mRNA、TNF-αmRNA表達(dá)量的比較

3　討論

細(xì)胞因子在K OA發(fā)病中的作用備受關(guān)注，其中I L-1、TNF-α在K OA發(fā)病中起著重要的介導(dǎo)作用［3-4］。研究認(rèn)為I L-1、TNF-α可以促使破骨細(xì)胞分泌多種金屬蛋白酶和其他酶類，從而引起軟骨細(xì)胞及其基質(zhì)、軟骨下骨等結(jié)構(gòu)降解和破壞，并可刺激成骨細(xì)胞樣細(xì)胞增殖，導(dǎo)致關(guān)節(jié)骨、軟骨增生性改變［5］。Y a n g L等［6］采用E LL S A對K OA患者膝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)腔內(nèi)滑液測定發(fā)現(xiàn)，K OA患者滑液中I L-1β含量明顯高于正常人。

西醫(yī)對K OA的治療沒有特別有效的方法，藥物口服治療、關(guān)節(jié)內(nèi)注射藥物治療、手術(shù)治療等遠(yuǎn)期療效不容樂觀，而且有較多的副作用［7-11］。而基于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的以促進(jìn)軟骨細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)的生長為目的的方法，大多在臨床上較難實(shí)施，價格也比較昂貴。近年來，中藥對K OA治療實(shí)驗(yàn)方面的研究越來越多。研究顯示［12-18］，很多中成藥或者經(jīng)驗(yàn)方劑都可以從關(guān)節(jié)軟骨、細(xì)胞因子、骨內(nèi)壓、自由基、細(xì)胞凋亡、降低血清透明質(zhì)酸、滑膜、金屬蛋白酶、雌激素等方面修復(fù)被破壞的軟骨細(xì)胞，改善膝關(guān)節(jié)疼痛、恢復(fù)膝關(guān)節(jié)功能。骨痹止痛液是甘肅省中醫(yī)院老一輩醫(yī)務(wù)工作者在中醫(yī)辨證論治、因地制宜的基礎(chǔ)上，針對甘肅特殊的地理面貌、氣候特征，集其臨床經(jīng)驗(yàn)而成。主要由制川烏、杜仲、獨(dú)活、羌活、穿山甲、川芎、當(dāng)歸尾、肉桂等10余味藥物組成，具有補(bǔ)肝腎、通經(jīng)脈、散瘀血、止痹痛、祛風(fēng)濕的功效［9］。本研究結(jié)果表明，骨痹止痛液可通過減低I L-1m R N A、TNF-α m R N A表達(dá)量來減少炎性反應(yīng)、緩解疼痛癥狀，為臨床使用骨痹止痛液提供了理論依據(jù)。

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Study on the In fluence of GuBi ZhiTong Liquid on Cartilage-related Factors Expressions of the Rabbitsw ith KneeOsteoarthritis

YAO Xingzhang1，LIXingyong2，LIXixiang1，PANG Zenglin2，MA Hu3，SONGMin4
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Lanzhou 730050，China；2 Gansu Province the Third People′s Hospital；3 Zhangjiachuan County TCM Hospital；4 Gansu University of Traditional Chinese Medicine

Objective：To study the influence of GuBi ZhiTong liquid on IL-1 and TNF-αin knee cartilage ofthe animalmodel.Methods：Thirty rabbitswere random ized into the group of GuBi ZhiTong liquid（A），the group of glucosam ine hydrochloride tablets（B）and themodelgroup（C），ten rabbitseach group.The rabbit received intragastric administration of GuBi ZhiTong liquid，glucosamine hydrochloride tablets and physiological saline for eight weeks consecutively after establishing the rabbitmodel w ith knee osteoarthritis.Morphological changes were observed by the naked eyes，the expressions of IL-1 and TNF-αin the cartilage were detected by HE staining and RT-PCR after the sampleswere taken in eightweeks.Results：The observation under the naked eyes：therewas no obviouschange in the comparison of A and B between before and aftermedication，the damage of jointcartilagewas severe in group C，even erosion.RT-PCR：when A and Bwere comparedw ith C，theexpressionsof IL-1mRNA and TNF-αmRNA lowered obviously in A and B（P＜0.05）.The expressionsof IL-1mRNA and TNF-αmRNA in the rabbitcartilageof A were lower than these of B（P＜0.05）.Conclusion：GuBi ZhiTong liquid could inhibit inflammatory reaction by reducing the expressionsof IL-1 and TNF-α，therefore，to relieve jointdamage.

GuBi ZhiTong liquid；osteoarthritis；knee；IL-1；TNF-α

R285.5

A

1004-6852（2016）04-0029-03

2015-10-21

姚興璋（1987—），男，碩士學(xué)位，醫(yī)師。研究方向：骨傷科疾病的中醫(yī)藥診治。