急性心肌梗死患者行急診冠脈支架植入術后血漿循環微粒水平的變化及意義

單雪峰，劉　成，馬松峰（新疆醫科大學第一附屬醫院兒外一病區，烏魯木齊8300；新疆醫科大學第一附屬醫院冠心病科；通訊作者，E-mail:masongfeng@63.com）

心臟與心血管疾病

急性心肌梗死患者行急診冠脈支架植入術后血漿循環微粒水平的變化及意義

單雪峰1，劉成2，馬松峰1*（1新疆醫科大學第一附屬醫院兒外一病區，烏魯木齊830011；2新疆醫科大學第一附屬醫院冠心病科；*通訊作者，E-mail:masongfeng2@163.com）

目的探討急性心肌梗死（AMI）患者行急診經皮冠脈支架植入（PCI）術前后體內循環微粒（MPs）水平的變化及意義。方法以就診于新疆醫科大學第一附屬醫院的AMI38例患者為研究對象，抽取入院時及急診PCI術后30min時的血液，通過兩步離心法提取MPs，分析比較手術前后血漿MPs的濃度變化情況及術后MPs濃度與術后心血管事件的相關性及對內皮細胞一氧化氮合酶（eNOS）表達的影響。結果與術前比較，PCI術后患者血漿中MPs濃度明顯升高［（2.46±0.53）mg/mlVs（4.31±0.67）mg/ml，P＜0.05］。而且術后MPs濃度與術后心血管事件次數呈正相關（rs=0.59，P＜0.000 1）。與術前比較，術后MPs明顯抑制了內皮細胞eNOS蛋白的表達（P＜0.01）。結論急診PCI術后血漿MPs濃度有作為間接反映預后檢測指標的潛能。

循環微粒；血小板；心血管事件；急性心肌梗塞

隨著我國經濟水平的提高和人民生活水平的改善，冠心病（coronaryheartdisease，CAD）的發病人群越來越多，而其中又以急性心肌梗死（acutemyocardial infarction，AMI）嚴重危害人民的生命安全。研究發現［1］:內皮細胞的損害和內皮功能障礙以及血小板的激活是CAD的啟動因子，而血管內皮功能障礙導致的血管內壁粥樣斑塊的破裂及繼發的血栓形成是AMI的主要發病機制。

Martinez等［2］和Cuppini等［3］研究發現，生理條件下，循環微粒（microparticles，MPs）是存在于體內的納米級微粒。當機體受到各種刺激（如炎癥、損傷等）后，因此而導致內皮細胞的凋亡和血小板的激活并產生大量的MPs。而病理條件下產生的MPs又會反過來啟動凝血系統和損害內皮細胞。本研究擬探討MPs濃度在急診經皮冠脈支架植入術（percutaneous coronary stent implantation，PCI）前后的變化及其與術后心血管事件的關系，同時檢測其對內皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）表達變化的影響，以明確MPs濃度是否可以作為間接反映AMI急診PCI術預后的臨床檢測指標。

1　資料與方法

1.1研究對象

以2014-01～2014-06期間就診于新疆醫科大學第一附屬醫院心臟外科的AMI患者并急診行PCI的患者為研究對象。同時排除有糖尿病、高血壓及腎功能衰竭等疾病者。心血管事件主要指術后24h內再次內出現心前區不適次數。共入組38例。男21例，女17例；平均年齡（39±5.45）歲。研究患者的血脂情況見表1。

表1　38例AM I患者血脂情況Table1　Blood lipid levels of 38 patients with AMI

1.2材料

采血管及離心管購自BD公司（美國）、高速離心機購自Beckman coulter（美國）、RPMI1640培養基購自Biosera公司（美國）、BCA蛋白定量試劑盒購自Thermo公司（美國）、eNOS抗體購自Santa Cruz（美國），電泳儀、轉膜儀購

自Bio-RAD（美國）、X射線膠片購自柯達、超聲破碎儀購自Cole-Parmer（美國）、人臍靜脈內皮細胞購自Science Cell（美國）。

1.3血液采集及MPs測定

所有入組AMI患者在入院時及PCI術后30min時經肘靜抽取靜脈血并低溫運送至新疆心血管病研究實驗室并將血液移入離心管內。然后按文獻［4］記錄采用兩步離心法提取MPs:第一步提取乏血小板血漿（4℃，11 000×g，2min）；第二步提取MPs（4℃，13 000×g，45min），第二步離心結束后吸干上層血漿后沉淀于管底的微小顆粒即為MPs。最后用100μlrPMI1640培養基重懸MPs。MPs濃度采用BCA蛋白定量試劑盒測定和計算。

1.4一氧化氮合酶（eNOS）蛋白檢測

空白組加入與MPs等體積的RPMI1640，術前組和術后組分別加入相同濃度的術前和術后的MPs（二者濃度均為2mg/ml）孵育人臍靜脈內皮細胞12h后，提取細胞蛋白，經超聲破碎儀充分裂解后用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度，然后進行Western blot檢測，經電泳-轉膜-封閉-孵育抗體-顯影（除抗體比例外均按常規檢測參數進行），檢測eNOS蛋白表達變化。采用Image J軟件對條帶進行灰度分析（n=12）。

1.5統計學方法

2　結果

2.1手術前后血漿MPs濃度變化

手術后30min血漿中MPs濃度［（4.31± 0.67）mg/ml］明顯較術前升高［（2.46±0.53）mg/ml，P＜0.05］。

2.2術后血漿MPs濃度與心血管事件發生的相關性

由圖1中可見，血漿MPs濃度與術后24h內心血管事件發生的次數呈正相關（rs=0.59，P＜0.000 1）。提示血漿MPs濃度一定程度上反應了病情的預后。

圖1　ACS患者血漿MPs與冠脈狹窄程度相關性研究Figure1　Correlation between plasmamPs and severity of coronary artery stenosis in ACS patients

2.3血漿MPs對內皮細胞eNOS蛋白表達的影響

與空白組比較，術前MPs抑制了內皮細胞eNOS蛋白的表達，而手術進一步增強了MPs對eNOS的抑制作用（P＜0.05，見圖2）。

3　討論

本研究結果顯示，急診PCI術后30min時血漿內MPs濃度較術前明顯升高，而且術后MPs濃度與術后24h內心血管事件的次數呈正相關，提示MPs濃度有作為間接反映急診PCI患者預后指標的潛能。作為治療CAD患者的有效手段，急診PCI挽救了無數AMI患者的生命。雖然隨著設備的改進和介入技術的發展，PCI術中和術后的并發癥和死亡率較前明顯減少，但是作為一種有創性的介入檢查和治療手段，PCI手術不可避免會造成血管內皮的損害和血小板的激活［5-7］。內皮細胞可能會因為PCI介入手術的機械性的血流動力學損傷發生凋亡、缺血、功能障礙、加速膽固醇和脂類物質沉著而加重血管的粥樣斑塊形成；同時PCI介入手術還會加速血小板黏附、聚集和活化［8］。文獻顯示，MPs主要來源于各種有害因素而導致的內皮細胞凋亡和血小板激活［2，3］。而且還有研究表明［8］:急性冠脈綜合征（acute coronary syndrom，ACS）患者體內升高的MPs與高密度脂蛋白含量呈負相關。王妍等［9］研究發現:mPs在高血壓病患者體內與肱踝脈搏波傳導速度正相關，而且MPs是高血壓患者肱踝脈搏波傳導速度的獨立影響因素。

eNOS在維持內皮細胞功能中具有重要作用［10］。eNOS是內皮細胞合成NO的關鍵酶，分布在血管內皮細胞表面［11］。eNOS是內皮細胞產生NO的重要來源，是維持心血管平衡的重要調節物質［12］。NO是血管內皮細胞產生和釋放的血管活性物質，具有選擇性舒張作用，可以阻斷血管內皮損傷。eNOS表達降低，必將導致NO生成減少以致內皮功能受損。本研究發現，術后MPs不僅數量增多，而且相同濃度情況下抑制eNOS表達較術前明顯，提示術后MPs質量亦發生改變，可能正是其與術后心血管事件次數正相關的機制所在。

綜上所述，PCI介入手術的影響會致使血中MPs濃度升高和質量變更“差”，而這一升高的MPs又通過抑制eNOS蛋白表達進一步損害內皮而加重AMI患者的病情，形成惡性循環。因此急診PCI術后患者體內MPs濃度與術后24h心血管事件次數正相關提示MPs有望成為間接反映急診PCI術后患者預后的指標。

圖2　血漿MPs對內皮細胞eNOS表達的影響Figure2　Effect of plasmamPs on the expression of eNOS in endothelial cells

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Changes of p lasma circulatingm icroparticles in acutemyocardial infarction patients after the emergency coronary stent imp lantation

SHAN Xuefeng1，LIU Cheng2，MA Songfeng1*（1department of Children's Cardiac Surgery，First Affiliatedhospital of Xinjiangmedical University，Urumuqi830011，China；2department of Coronaryheartdisease，First Affiliatedhospital of Xinjiangmedical University；*Corresponding author，E-mail:masongfeng2@163.com）

Objective To investigate the clinicalValue of circulatingmicroparticles（MPs）levels in patients with acutemyocardial infarction（AMI）undergoing emergency percutaneous coronary stent implantation（PCI）.Methods Thirty-eight patients with AMI in thedepartment of cardiac surgery in First Affiliatedhospital of Xinjiangmedical Universitywererecruited，and blood was extracted on admissionday and 30min afteremergency PCI.Then，MPswere obtained by two steps centrifugation anddetected before and after surgery.The correlation ofMPswith postoperative cardiovascular events and the effects on eNOS in endothelial cellswereanalyzed.ResultsmPs levels were significantly increased after PCI［（2.46±0.53）mg/mlVs（4.31±0.67）mg/ml，P＜0.05］.MPs contentwas positively correlated with incidences of postoperative cardiovascular events（rs=0.59，P＜0.000 1）.A fter surgery，the expression of eNOSwas inhibited bymPs in patients suffering PCI（P＜0.01）.Conclusion ThemPs content in plasma after emergency PCIhave the potential to be used as an indirect indicator of prognosis.

circulatingmicroparticles；platelet；cardiovascular events；acutemyocardial infarction

R654

A

1007-6611（2016）04-0303-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.04.001

國家自然科學基金專項基金資助項目（81341112）

單雪峰，男，1982-06生，碩士，主治醫生，E-mail:414943385@qq.com

2015-11-27