超聲輔助雙水相體系提取苦蕎籽黃酮

沈美榮,李云龍,俞月麗,王　敏,*,寇莉萍,*

(1.西北農林科技大學食品科學與工程學院,陜西楊凌 712100;2.山西省農業科學院,山西太原 030031)

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超聲輔助雙水相體系提取苦蕎籽黃酮

沈美榮1,李云龍2,俞月麗1,王敏1,*,寇莉萍1,*

(1.西北農林科技大學食品科學與工程學院,陜西楊凌 712100;2.山西省農業科學院,山西太原 030031)

為提高苦蕎黃酮分離純化效率,本文采用雙水相體系超聲輔助提取苦蕎籽黃酮。本文探討了15種有機試劑/無機鹽雙水相體系萃取苦蕎黃酮的能力,并考察了液料比、超聲時間、超聲溫度、硫酸銨和丙酮質量濃度在丙酮/硫酸銨雙水相體系對黃酮分配行為的影響,同時采用響應面優化萃取條件。結果表明:15種有機試劑/無機鹽雙水相體系中,丙酮/硫酸銨雙水相體系具有最佳的苦蕎黃酮提取能力;苦蕎黃酮最佳提取條件為:液料比46.65 g/g,超聲溫度 44.75 ℃,硫酸銨質量濃度22.86%,在此條件下,黃酮得率可達20.01±0.26 mg/g;與80%乙醇提取法相比,本法所得黃酮提取物總黃酮含量和蘆丁含量沒有顯著性差異,但黃酮純度高達62.35%,純度提高了38.86%;提取物DPPH·和ABTS+·清除率分別提高了22.52%、43.82%。因此,本法是一種更經濟快速的苦蕎黃酮初步提取純化方法,有效提高了黃酮功能性整體研究進度。

苦蕎籽,黃酮,雙水相

苦蕎(Fagopyrum tataricum(L.)Gaertn),又名韃靼蕎麥,起源于中國西南部和喜馬拉雅山,在東北、華北和西北等地區廣有分布[1],是一種獨特的藥食兩用糧食作物。大量研究資料表明:苦蕎具有降血糖、降血脂、抗腫瘤、抗炎、抗氧化等多種藥理活性[2-3]。而文獻報道,苦蕎的保健功能主要歸功于其富含的黃酮類物質[4],且黃酮類化合物更是以其廣譜的藥理作用引人矚目。因此,越來越多的科學家集中以黃酮為目標物質研究苦蕎潛在的健康益處,而苦蕎黃酮的提取純化則成為研究者首要解決的問題。

目前,苦蕎黃酮的提取方法主要有浸漬提取、微波提取、超聲波提取、酶解法和超臨界流體萃取法,但這些方法存在溶劑消耗大,提取時間長,或提取溫度高,熱敏成分易失活,能耗大等不足[5],且提取后的黃酮類化合物成分復雜,需進一步分離純化。近年來,雙水相萃取技術作為一種新型的分離技術日益受到重視,與常規提取方法相比較,具有操作條件溫和、提取時間短、能耗低、被分離物質純度高等優點[6],已被廣泛應用于黃酮類化合物的分離和提純。Liu等人[7]采用乙醇/K2HPO4雙水相體系提取金銀花總黃酮,提取物中總黃酮純度為49.73%,顯著高于70%乙醇提取物(8.86%);Zhang等人[8]采用乙醇/K2HPO4雙水相體系從木豆中提取染料木黃酮和芹黃素,純度比80%乙醇提取分別提高了110%和85%。雙水相萃取技術在苦蕎黃酮中的應用也有報道,徐春明等人[9-10]采用微波輔助乙醇/硫酸銨雙水相體系分別提取苦蕎麥麩皮和粉中的黃酮類化合物,黃酮得率依次為16.17、13.82 mg/g。但對于富含淀粉的天然植物有效成分,微波提取很容易使它們變性和糊化,堵塞通道,不利于胞內物質的釋放[11]。

因此,本研究將實驗室常用集成方式-超聲波提取,與雙水相技術耦合集成,比較了不同有機試劑/無機鹽雙水相體系對苦蕎籽黃酮的萃取能力,并考察了黃酮在丙酮/硫酸銨雙水相體系萃取的分配規律,以期得到較高收率和純度的黃酮提取物,為苦蕎進一步研究提供更加經濟快速的實驗方法。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

苦蕎種子(川蕎1號):2013年購于四川涼山彝族自治州,處理后粉碎,全粉過40目篩,置于4 ℃冰箱中備用;DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl)、ABTS(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)、Trolox(6-hydroxyl-2,5,7,8-tetramethylcroman-2-carboxylic acid)Sigma公司;蘆丁、槲皮素(色譜級)上海試劑二廠;甲醇(色譜級)安徽天地高純溶劑有限公司;其他均為市售分析純試劑。

高速萬能粉碎機天津市泰斯特儀器有限公司;JD400-3電子分析天平沈陽龍騰電子有限公司;KQ-700DE型數控超聲波清洗器昆山市超聲儀器有限公司;HC-2516高速離心機科大創新股份有限公司中佳分公司;UV-1800紫外分光光度計上海美譜達儀器有限公司;RE-52AA旋轉蒸發器上海亞榮生化儀器廠;LC20A高效液相色譜儀日本島津公司。

1.2實驗方法

1.2.1雙水相體系的選擇雙水相體系按質量配制,系統總量為20 g。分別稱取15%(w/w)不同無機鹽(K2HPO4,(NH4)2SO4,Na2CO3),33%(w/w)不同有機溶劑(乙醇、丙酮、正丁醇、異丙醇、乙酸乙酯)與一定質量的蒸餾水,于漩渦混合器上混勻,靜置,待溶液分相完全后加入0.5 g苦蕎粉,25 ℃,420 W超聲提取10 min,10000 r/min離心5 min后,分別取樣分析上下相中苦蕎黃酮的含量。有關的計算公式如下[8]:

K=Ct/Cb

式(1)

R=Vt/Vb

式(2)

Y1(%)=R×K/(1+R×K)×100

式(3)

Y2=mt/ms

式(4)

注:Ct、Cb為雙水相系統上、下相苦蕎黃酮的濃度(mg/mL);Vt、Vb為雙水相體系上、下相體積(mL);mt為雙水相體系上相黃酮的質量(mg);ms為苦蕎粉干物質的質量(g);K為黃酮在雙水相體系分配系數;R為雙水相體系上下相的體積比;Y1為黃酮在上相中的收率(%);Y2為黃酮在上相中的得率(mg/g)。

1.2.2苦蕎黃酮含量的測定黃酮含量采用經典的Al(NO3)3顯色法[3]測定。取一定量的樣品提取液與200 μL 5% NaNO2溶液混勻,避光反應6 min,然后加入200 μL 10% Al(NO3)3溶液再反應6 min,加入2 mL 4% NaOH溶液后再用蒸餾水定容至5 mL,混勻后置于室溫下避光反應15 min,510 nm波長處測定吸光度。以蘆丁標準溶液濃度(μg/mL)為橫坐標、吸光度(A)為縱坐標繪制標準曲線。

1.2.3丙酮/硫酸銨雙水相體系相圖的繪制丙酮/硫酸銨雙水相體系相圖采用濁點滴定法[8]測定。精確稱取定量(NH4)2SO4(ms)于錐形瓶中,加入定量去離子水(mw)配制成一定濃度的鹽溶液,然后緩慢滴入丙酮,并不斷振蕩使其充分混合,觀察溶液的澄清程度,直至試管內液體出現渾濁為止,記錄加入丙酮的質量(mi);再次加入一定量去離子水(mw2),溶液澄清;繼續向試管中加丙酮并不斷混勻,直至再次達到渾濁,如此反復操作。計算每次達到渾濁時,丙酮和(NH4)2SO4在系統總量中的質量分數,并以丙酮質量分數為縱坐標,(NH4)2SO4的質量分數為橫坐標繪制相圖。

1.2.4單因素實驗以1.2.1的提取條件為固定反應條件,在其他條件相同的情況下,采用不同液料比(20、30、40、50、60 g/g)、超聲時間(15、20、25、30、35 min)、超聲溫度(25、30、35、40、45 ℃)、硫酸銨質量濃度(17%、19%、21%、23%、25%)、丙酮質量濃度(19%、23%、27%、31%、35%)進行超聲波輔助丙酮/硫酸銨雙水相體系提取實驗,以苦蕎黃酮得率和分配系數為響應值,逐個考察各提取條件對提取效果的影響。

1.2.5Box-Behnken響應面實驗根據單因素實驗結果,以影響苦蕎黃酮得率的主要因素為變量,以黃酮得率為響應值,采用Box-Behnken實驗設計方法,對超聲波輔助提取苦蕎黃酮工藝參數進行優化。響應面實驗因素及水平如表1。

表1　響應面實驗因素水平表Table 1　Factors and levels used in response surface analysis

1.2.6HPLC分析蘆丁、槲皮素含量HPLC分析樣品的制備:稱取適量樣品,按照響應面所得最優工藝提取苦蕎黃酮后,取上相溶液于40 ℃旋轉蒸發,最后用甲醇溶解并定容至10 mL,-20 ℃冰箱中保存備用。測試前用0.45 μm針頭式過濾器過濾,液相條件參照Gao[12]等人的方法。

色譜條件:Waters Symmetry C18柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),紫外檢測波長:280 nm;柱溫:30 ℃,進樣量:10 μL,流速:0.8 mL/min,流動相A:甲醇,流動相B:超純水(用磷酸調節pH為2.6)。梯度洗脫程序:0 min,15% A;15～25 min,25% A;65 min,75% A;70 min,15% A。

1.2.7苦蕎黃酮對DPPH·清除能力的測定參照Guo等人[3]的方法。準確稱取0.0013 g DPPH,用甲醇定容至25 mL,配制成DPPH溶液。取1 mL稀釋樣品液與1 mL DPPH溶液混合搖勻,室溫避光反應30 min后,于517 nm下測定吸光值。以Trolox為標準品,得標準曲線y=1.6308x-1.9265,R2=0.9993。樣品清除DPPH·的能力以100 g樣品干基中所含Trolox的當量毫摩爾數表示(mmol Trolox eq./g 100 DW)。

1.2.8苦蕎黃酮對ABTS+·清除能力的測定參照Sogi等人[13]的方法并加以改動。7 mmol/L ABTS溶液與2.45 mmol/L K2S2O8等體積混勻后在室溫下避光放置12 h得ABTS+·溶液,在734 nm下用甲醇將ABTS+·溶液的吸光值調至0.700(±0.002)得ABTS+·工作液。取200 μL稀釋提取液與3.0 mL ABTS+·工作液迅速混勻后于734 nm處測定吸光度值。以Trolox為標準品,得標準曲線:y=0.32887x-0.9362,R2=0.9998。樣品的ABTS+·清除能力以100 g樣品干基中所含Trolox的當量毫摩爾數表示(mmol Trolox eq./100 g DW)。

1.2.9數據分析采用Design-Expert 7.0進行響應面實驗設計和分析。其他數據均采用Excel 2007和Spass 18.0分析軟件進行比較分析。所有實驗均重復3次。

2　結果與分析

2.1雙水相體系的選擇

小分子有機物、無機鹽形成雙水相是鹽溶液與有機溶劑爭奪水分子形成締合水合物的結果。苦蕎黃酮在小分子有機試劑/無機鹽雙水相體系中的分配情況如表2所示。如表可知,苦蕎黃酮被富集于雙水相體系的上相,其在15種雙水相體系均有較大的收率,而不同體系上相黃酮的得率則有較大差別,其中以丙酮/硫酸銨體系提取效果最佳,得率高達19.58 mg/g。在15種不同的體系中,固定無機鹽種類,對于有機試劑在雙水相體系中萃取黃酮的能力由表可知,丙酮具有最強的萃取效果,其次為異丙醇,乙酸乙酯最弱;而無機鹽在體系中的黃酮萃取能力依次為(NH4)2SO4>K2HPO4>Na2CO3。綜合考慮,選擇丙酮/硫酸銨雙水相體系,以苦蕎黃酮在體系上相的得率作為主要指標進一步研究。

表2　雙水相體系的選擇Table 2　The selection of aqueous two-phase system

2.2丙酮/硫酸銨雙水相相圖分析

雙水相形成的條件和定量關系可用相圖來表示,它是研究雙水相萃取的基礎。丙酮/硫酸銨雙水相體系測得的相圖如圖1所示,結果與Bensch等人[14]的研究結果一致。如圖所示,雙節線將相圖劃分為上下兩相,下方為單相區,不分相;上方為兩相區,在兩相區內,上相富含丙酮,下相富含(NH4)2SO4。由圖1可知,加入丙酮的量越大,恰好分相時,所需鹽的量就越小;反之,體系中(NH4)2SO4的質量分數越高,恰好分相時所需的丙酮體積分數就越低。同時從該圖也可看出,當(NH4)2SO4的質量分數為一定值時,丙酮質量分數必須高于上圖所對應的最低值才能保證分相。如,當(NH4)2SO4的質量分數為16%時,丙酮在整個體系中的質量分數必須達到15%以上才能形成穩定的雙水相體系。因此,雙水相萃取的實驗點應從曲線上方的區域選取,但丙酮質量分數和(NH4)2SO4質量分數需相互協調。

圖1　丙酮/硫酸銨雙水相體系相圖Fig.1　The binodal curve of the acetone/(NH4)2SO4 ATPS

2.3苦蕎黃酮提取單因素實驗

2.3.1料液比對黃酮提取的影響由圖2可知,苦蕎黃酮得率隨液料比的增大而呈現先上升后下降的趨勢,在液料比為40 g/g處有明顯的峰值,而分配系數則隨液料比的增大而增大。這是因為雙水相體系存在黃酮提取和雙水相萃取兩個過程,當上相尚未飽和,增加苦蕎粉的量,得率相應增加;當苦蕎黃酮濃度超過該雙水相萃取能力時,上相所能容納苦蕎黃酮達到飽和,多余的苦蕎黃酮轉移至下相,導致得率降低;而下相黃酮含量持續增加,則分配系數持續下降。因此,確定液料比以40 g/g為宜。

圖2　液料比對黃酮得率和分配系數的影響Fig.2　Effect of solid-liquid ratio on the yield and partition coefficients of flavonoids

2.3.2超聲時間對黃酮提取的影響由圖3可知,苦蕎黃酮得率隨超聲時間的延長呈先升高而后降低的趨勢,分配系數呈先略有降低后升高再降低的趨勢。在超聲時間為25 min時,黃酮得率達到最大值,而分配系數則在30 min時達到最大值。這說明延長提取時間可使目標產物提取更徹底,但超聲時間過長卻可能對樣品中的黃酮結構產生破壞作用,不利于黃酮的提取。因此,確定超聲提取時間以25 min為宜。

圖3　超聲時間對黃酮得率和分配系數的影響Fig.3　Effect of ultrasonic time on the yield and partition coefficients of flavonoids

2.3.3超聲溫度對黃酮提取的影響由圖4可知,在超聲提取溫度25～35 ℃的范圍內,隨著提取溫度的升高,苦蕎黃酮得率和分配系數也逐漸提高,但超過35 ℃后,繼續升高溫度黃酮得率和分配系數不再提高反而降低。分析其原因可能為,超聲溫度低,黃酮不能完全溶出,而溫度升高,提取液黏度減小,擴散系數增加,促使傳質速度加快,萃取更完全,但是隨著溫度繼續升高,硫酸銨在水中的溶解度增大,上相鹽向下相富集,上相溶液極性改變,不利于黃酮溶出,進而導致黃酮得率和分配系數降低[15]。因此,確定超聲波提取溫度以35 ℃為宜。

圖4　超聲提取溫度對黃酮得率和分配系數的影響Fig.4　Effect of ultrasonic temperature on the yield and partition coefficients of flavonoids

2.3.4硫酸銨質量濃度對黃酮提取的影響由圖5可知,在硫酸銨質量濃度在17%～21%的范圍內,隨著硫酸銨質量濃度的增大,苦蕎黃酮得率和分配系數也隨之逐漸提高,但是超過21%后,繼續增加硫酸銨質量黃酮得率和分配系數不再提高反而降低。這可能是因為隨著硫酸銨質量濃度的增大,下相締合水的能力增強,上相中的水減小,上相中的丙酮濃度間接增加,苦蕎黃酮更易增溶到上相中,但由于上相體積變小,增溶苦蕎黃酮的量有限,黃酮向下相遷移,故黃酮得率和分配系數均呈現先增大后減小的趨勢[6]。因此,確定硫酸銨質量分數以21%為宜。

圖5　硫酸銨質量濃度對黃酮得率和分配系數的影響Fig.5　Effect of mass concentration of(NH4)2SO4on the yield and partition coefficients of flavonoids

圖6　丙酮質量濃度對黃酮提取量的影響Fig.6　Effect of acetone mass concentration on the yield and partition coefficients of flavonoids

2.3.5丙酮質量濃度對黃酮提取的影響由圖6可知,苦蕎黃酮得率隨丙酮質量濃度增大而提高,而分配系數則呈現先增大后略微降低的趨勢。這可能是由于隨著丙酮質量濃度的增加,黃酮更易增溶至上相,且丙酮爭奪水分子能力增強,下相中更多的水分被競爭吸附至上相,使上相體積顯著增加,黃酮得率和分配系數上升,但隨著丙酮質量濃度繼續增加,體系變的不穩定,下相有少量晶體析出,黃酮得率不再顯著上升,分配系數略微下降[6]。因此,考慮成本問題,選擇丙酮質量分數以31%為宜。

2.4響應面分析法對苦蕎黃酮提取工藝的優化

2.4.1響應面實驗設計及結果在單因素實驗基礎上,以對超聲波輔助雙水相提取黃酮得率影響顯著的3個因素—液料比、超聲溫度和硫酸銨質量濃度為自變量,黃酮得率Y為響應值,按Box-Behnken模型進行三因素三水平響應面實驗,實驗設計及結果如表3所示。

表3　Box-Behnken實驗設計及結果Table 3　Experimental design and result for response surface analysis

2.4.2響應面實驗結果分析及回歸方程根據表3實驗結果,利用Design Expert 8.0.6軟件進行分析,得回歸方程為:Y=18.38+0.78X1+0.62X2+0.71X3+0.26X1X2+0.20X1X3+0.22X2X3-1.39X12+0.55X22-0.80X32。

從表4可以看出,模型在α=0.01水平上回歸顯著,且失擬項的p=0.5122>0.1,失擬不顯著,因此模型選擇正確。Box-Behnken 實驗設計方差分析中的p值和構建模型中變量的系數可以反映變量對響應指標的影響程度,p值越小,系數越大,相應變量對響應指標的影響越大。由表4可知,各因素對苦蕎黃酮提取率的影響都達到極顯著水平(p<0.01),且對黃酮提取率的影響從大到小依次為:料液比>硫酸銨質量濃度>超聲溫度。

表4　回歸方程方差分析表Table 4　Variance analysis of regression equation

注:**為差異極顯著(p<0.01),*為差異顯著(p<0.05)。

表5　模型的可信度分析Table 5　Confidence analysis of the regression equation model

由表5可知,相關系數的平方R2=0.9905,表明方程擬合較好。綜上說明回歸方程給超聲波輔助雙水相提取苦蕎黃酮提供了一個合適的模型。

2.4.3各因素交互作用對黃酮得率的響應面分析三維響應面圖可直觀地反映自變量的交互作用對響應值的影響。用 Design-Expert 8.0.6 軟件對實驗結果進行響應曲面的分析,得出兩個因素的交互作用對苦蕎黃酮得率的響應曲面圖,結果如圖7所示。

由圖 7a、7c可以看到,超聲波提取溫度分別與液料比和硫酸銨質量濃度有著顯著的交互作用,但液料比與硫酸銨質量分數的交互作用不顯著(圖7b)。這一結果與表3的結果相一致。因此,得出預測分析,確定響應面的最優條件為:液料比 46.65 g/g,超聲溫度 44.75 ℃,硫酸銨質量濃度22.86%,預測苦蕎黃酮得率為19.98 mg/g。在此優化條件下進行三次平行驗證實驗,實驗結果表明,黃酮得率穩定在(20.01±0.26)mg/g,與預測值接近,表明響應面分析方法的模型擇合適,可以用來確定最佳萃取實驗條件。

2.5兩種不同提取方法的比較

實驗室對苦蕎黃酮類化合物的提取常采用乙醇為提取劑。因此,將本法與常規乙醇超聲輔助提取法進行比較研究,本法與超聲輔助乙醇提取法的提取分離條件均為其工藝最優條件,其中超聲輔助乙醇提取分離條件[16]為:液料比30 mL/g,乙醇濃度80%,提取溫度60 ℃,超聲時間30 min。比較結果如表6所示。

由表6可知,本法所提苦蕎黃酮得率為20.01±0.26 mg/g,高于徐春明等人采用微波輔助乙醇/硫酸銨雙水相提取苦蕎麩皮黃酮的得率(16.17 mg/g)[8],與80%乙醇所提黃酮的得率(19.93±0.30 mg/g)沒有顯著差異,但與80%乙醇提取法相比,雙水相提取所得黃酮粗提物的純度(62.35%)顯著高于80%乙醇所提粗提物(38.12%),純度提高近38.86%。分析其黃酮組成由表可知,雙水相體系提取蘆丁含量為1423.44±6.77 mg/100 g DW,與80%乙醇提取法所得蘆丁含量(1544.71±2.65 mg/100 g DW)沒有顯著差異,但其槲皮素含量(146.18±4.19 mg/100 g DW)與80%乙醇提取所得槲皮素含量(11.99±1.24 mg/100 g DW)差異顯著,分析其原因可能為雙水相體系中含有較多的水,從而在提取過程中導致部分蘆丁降解,槲皮素含量增加[17],這也可能是雙水相黃酮提取物較80%乙醇黃酮提取物抗氧化活性強的原因。

表6　兩種提取方法的比較Table 6　Comparison of two different extraction methods

圖7　各因素對苦蕎黃酮得率影響的響應面圖Fig.7　Response surface for the effects of cross-interactions among factors on extraction rate of polysaccharides

兩種方法所得黃酮提取物的抗氧化活性如表6所示,由表可知,超聲輔助雙水相提取所得黃酮提取物DPPH·清除能力(10.17±0.23 mmol Trolox eq./100 g DW)和ABTS+·清除能力(84.81±0.34 mmol Trolox eq./100 g DW)均顯著高于80%乙醇所得黃酮提取物。因此,與常規超聲輔助乙醇提取法相比,超聲輔助雙水相提取法所得黃酮粗提物有較高的純度和抗氧化活性。

3　結論

采用超聲波輔助丙酮/硫酸銨雙水相體系提取苦蕎籽黃酮,確定最佳工藝參數為:液料比46.65 g/g,硫酸銨質量濃度22.86%,超聲溫度 44.75 ℃,超聲時間25 min,在此提取條件下黃酮提取率可達20.01 mg/g,與80%乙醇所提黃酮得率(19.93 mg/g)沒有顯著性差異。但雙水相體系所得黃酮提取物純度高達62.35%,遠高于80%乙醇所得黃酮提取物純度(38.12%),這是由于在雙水相萃取過程中,黃酮類物質往上相富集,而糖、蛋白質等雜質往下相富集,進而顯著提高了黃酮粗提物的純度。

因此,超聲輔助雙水相提取法可有效縮短提取時間、減小有機試劑使用量、提高提取物純度,與其他常用固液分離方法相比,雙水相提取法可省去1～2個純化步驟,使整個分離過程更經濟快速,在抗氧化等活性物質的提取純化領域具有良好的應用前景。

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Ultrasonic-assisted aqueous two-phase extraction of flavonoids from tartary buckwheat seed

SHEN Mei-rong1,LI Yun-Long2,YU Yue-li1,WANG Min1,*,KOU Li-ping1,*

(1.College of Food Science and Engineering,Northwest A & F University,Yangling 712100,China;2.Shanxi Academy of Agricultural Science,Taiyuan 030031,China)

The flavonoids of tartary buckwheat seed were extracted in the aqueous two-phase system by ultrasonic cooperation to improve the efficiency of separation and purification. Fifteen different organic solvent/inorganic salt systerms were adapted to extract the flavonoids from tartary buckwheat,and the effects of solid-liquid ratio,ultrasonic time,ultrasonic temperature,mass concentration of ammonium sulfate and acetone on the partitioning behavior of flavonoids were discussed in detail,while the extraction conditions were optimized by response surface methodology(RSM). The results indicated that the acetone/(NH4)2SO4aqueous two-phase system had the best extraction effect. The optimum extraction conditions were as follows:liquid-solid ratio 46.65 g/g,ultrasonic temperature 44.75 ℃,mass concentration of ammonium sulfate 22.86%,the yield of the flavonoid was 20.01±0.26 mg/g at the optimum conditions. Compared with 80% ethanol extraction,there was no significant difference between flavonoid yield and rutin content,but the purity of flavonoids reached 62.35% with an increase of 38.86%,while the DPPH· and ABTS+· scavenging capacity was increased 22.52% and 43.82%,respectively. Therefore,the technique provide a more economical and quick method to extract flavonoids of tartary buckwheat seed,improve the research progress effectively.

tartary buckwheat seed;flavonoids;aqueous two-phase extraction

2016-01-29

沈美榮(1989-)，女，碩士，研究方向：食品營養與化學，E-mail：shenmrong0202@163.com。

王敏(1967-)，女，博士，教授，研究方向：食品營養與化學，E-mail：wangmin20050606@163.com。

寇莉萍(1972-)，女，博士，副教授，研究方向：果品蔬菜的儲藏與加工，E-mail：kouliping@nwsuaf.edu.cn。

蕎麥保健機理及其食品加工利用關鍵技術研究;國家現代農業產業技術體系(CARS-08-D-2-2)。

TS255.1

B

1002-0306(2016)15-0243-07

10.13386/j.issn1002-0306.2016.15.039