泥鰍肉骨泥對小鼠體內(nèi)抗氧化能力的影響

周 楊，劉海英（江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇無錫214122）

泥鰍肉骨泥對小鼠體內(nèi)抗氧化能力的影響

周 楊，劉海英*
（江南大學(xué)食品學(xué)院，江蘇無錫214122）

研究了泥鰍肉骨泥對小鼠抗氧化指標(biāo)的影響。將小鼠分為空白組、模型組、泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組四組。除空白組外，其余三組均頸背部皮下注射濃度為500 mg/kg·bw的D-半乳糖溶液，制備小鼠氧化衰老模型，空白組注射相同劑量的生理鹽水。將泥鰍制成肉骨泥給小鼠灌胃。以小鼠體重計，給小鼠灌胃100 mg/kg·bw的泥鰍肉骨泥為泥鰍低劑量組，給小鼠灌胃500 mg/kg·bw的泥鰍肉骨泥為泥鰍高劑量組，其余兩組均灌胃同劑量生理鹽水。動物實驗結(jié)束后取血清、肝臟檢測氧化指標(biāo)。結(jié)果顯示，與空白組相比，模型組血清SOD、肝臟CAT活性均顯著降低（p＜0.05），而兩個泥鰍肉骨泥組與空白組差異不顯著。與空白組相比，模型組血清和肝臟MDA含量均顯著增加（p＜0.05），而兩個泥鰍肉骨泥組與空白組差異不顯著。另外，與空白組相比，模型組血糖顯著降低（p＜0.05），兩個泥鰍肉骨泥組與空白組無顯著差異。但是實驗也表明，灌胃泥鰍肉骨泥對小鼠高、低密度脂蛋白影響不大，各組之間并無顯著差異。

泥鰍，肉骨泥，抗氧化，調(diào)節(jié)免疫

泥鰍（Misgurnus anguillicaudatus），是鰍科小型淡水魚類，在我國大部分地區(qū)均有分布。泥鰍肉質(zhì)細膩，營養(yǎng)豐富。同時，傳統(tǒng)中醫(yī)理論認為，泥鰍具有補中益氣、除濕退黃、益腎助陽等藥用價值。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明［1］，泥鰍中富含的亞精胺是精氨酸的前體物質(zhì)，大量攝入有利于預(yù)防心臟病和肝病，能夠抗衰老、增強生殖能力。研究認為泥鰍粘液多糖具有一定生理功能。欽傳光等證明泥鰍多糖具有免疫作用［2］，降低小鼠的肝損傷［3］，泥鰍粘液有抗炎作用［4］。張晨曉等［5］報道了泥鰍多糖可以促進小鼠脾臟淋巴細胞和巨噬細胞的增殖，還可以抑制腫瘤細胞的增殖。此外，有研究表明酶解泥鰍多肽也具備抗氧化等生理功能。游麗君等［6］通過酶解泥鰍制備抗氧化肽，李瑩等［7］通過酶解泥鰍制備了高活性降血壓肽。代偉長等［8］證明酶解泥鰍蛋白對酒精致肝損傷有明顯的保護作用。上述實驗表明，泥鰍是一種食用和藥用價值很高的水產(chǎn)品。但是，現(xiàn)階段我國泥鰍的加工產(chǎn)品品種少，多以調(diào)味休閑軟罐頭食品為主。這些產(chǎn)品成本高，因此市場接受度不高。

肉骨泥是骨泥和肉泥的混合產(chǎn)品，不但具備肉泥口感好、高蛋白、易吸收的特點，還具有骨泥鈣和礦物質(zhì)含量高的優(yōu)點，是新型高附加值食品。本研究以泥鰍具備高營養(yǎng)的特點出發(fā)，將其進一步制備成含骨高鈣的泥鰍肉骨泥，通過動物實驗檢驗其對小鼠血液及肝臟抗氧化指標(biāo)的影響，為泥鰍肉骨泥的應(yīng)用提供可用依據(jù)。

1.1 材料與儀器

泥鰍 購于無錫北橋水產(chǎn)市場；ICR小鼠 蘇州希諾賽生物科技有限公司，SPF級；D-半乳糖 上海國藥集團，分析純；總超氧化物歧化酶（T-SOD）測試盒、過氧化氫酶（CAT）測試盒、蛋白定量測試盒、丙二醛（MDA）測試盒 南京建成生物工程研究所。

手動絞肉機 常州歐克廚具銷售有限公司；JM-60立式膠體磨 上海帥發(fā)包裝印刷設(shè)備有限公司；勻漿器 德國普魯克公司；DZQ真空包裝機 上海尤溪機械設(shè)備有限公司；滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠。

1.2 實驗方法

1.2.1 泥鰍肉骨泥的制備工藝流程

1.2.2 工藝要點

1.2.2.1 預(yù)處理 鮮活泥鰍購入后用清水沖洗，去頭去內(nèi)臟，切成長2 cm的小段。

1.2.2.2 制備肉骨泥 泥鰍段上蒸鍋蒸制30 min，絞肉機絞碎至5 mm顆粒，之后將顆粒置于膠體磨破碎至100目，真空裝袋，采用高溫高壓滅菌，溫度121℃，滅菌20 min。為了動物實驗方便，故將產(chǎn)品冷凍干燥備用。

1.2.3 動物實驗

1.2.3.1 小鼠氧化模型的制備 實驗用9～11周齡雄性ICR小鼠60只，在溫度為22～27℃，日溫差≤3℃，相對濕度為50%～60%條件下的實驗動物中心暫養(yǎng)一周。一周后稱體重并隨機分為4組：空白組、模型組、泥鰍低劑量組、泥鰍高劑量組。每組15只，分三籠飼養(yǎng)，各組均自由攝食飲水。

除空白組小鼠外其余3組均每日頸背部皮下注射5%D-半乳糖溶液，按小鼠體重注射劑量為500 mg/kg·bw，空白組注射相同劑量的生理鹽水。泥鰍低劑量組每日灌胃100 mg/kg·bw泥鰍肉骨泥，泥鰍高劑量組每日灌胃500 mg/kg·bw泥鰍肉骨泥。泥鰍肉骨泥要配制成懸濁液，在灌胃前均需再次勻漿，空白組和模型組均灌胃相同劑量的生理鹽水。每周對小鼠體重進行稱量。

動物實驗進行42 d后將所有小鼠禁食不禁水12 h，在一個相對封閉空間內(nèi)用棉花沾取乙醚對小鼠進行麻醉，摘眼球取血后用頸椎脫臼法處死小鼠，取肝臟備用。取脾臟進行準(zhǔn)確稱量，以小鼠脾臟濕重/體重量（mg/g）來表示小鼠的脾臟指數(shù)。

1.2.3.2 泥鰍肉骨泥對小鼠生理指標(biāo)的影響 取得血液4℃靜置后，3000 r/min離心15 min分離血清。一部分血清用于檢測SOD和MDA值，用南京建成試劑盒測試，方法依據(jù)試劑盒說明書。另一部分血清用于測定血清中血糖、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量，使用FH-400全自動血液生化分析儀測定。

取新鮮肝臟用生理鹽水稀釋制得10%的勻漿液，3000 r/min離心15 min后取上清液，用于檢測SOD、CAT和MDA值。用南京建成試劑盒測試，方法依據(jù)試劑盒說明書。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析 各數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用SPSS 18.0進行ANOVA單因子方差分析和Ducan’s多重檢驗，p＜0.05表示差異有顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體重及脾臟指數(shù)

2.1.1 各組實驗小鼠體重變化 如表1所示，小鼠實驗前后體重各組之間差異變化并不顯著，增長趨勢差異也不明顯。

2.1.2 泥鰍肉骨泥對小鼠脾臟指數(shù)的影響 由表2可知，與空白對照組相比，模型組小鼠脾臟指數(shù)顯著降低（p＜0.05）。泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組脾臟指數(shù)與空白組差異不顯著（p＞0.05），而與模型組相

比顯著升高（p＜0.05）。

表1 實驗前后各組小鼠體重的變化（±s）Table1 The change of mice body weight（±s）

表1 實驗前后各組小鼠體重的變化（±s）Table1 The change of mice body weight（±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw） 實驗前體重（g） 實驗后體重（g） 體重增長量（g）空白組 0 38.85±1.52 44.93±1.93 6.07±2.22模型組 0 38.95±2.38 43.42±2.59 4.47±3.06泥鰍低劑量組 100 39.01±2.11 43.98±3.05 4.97±2.55泥鰍高劑量組 500 38.31±1.85 43.93±1.93 5.63±2.00

表2 實驗前后小鼠脾臟指數(shù)的變化（±s）Table2 The change of mice spleen index（±s）

表2 實驗前后小鼠脾臟指數(shù)的變化（±s）Table2 The change of mice spleen index（±s）

注：字母不同表示處理間有顯著性差異（p＜0.05）；表3～表8同。

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）脾臟指數(shù)（mg/g）空白組 0 4.13±0.93a模型組 0 3.19±0.28b泥鰍低劑量組 100 4.46±1.68a泥鰍高劑量組 500 4.81±1.41a

2.2 小鼠血清生化指標(biāo)

2.2.1 泥鰍肉骨泥對小鼠血清血糖含量的影響 由表3可知，與空白對照組相比，模型組小鼠血清血糖含量顯著降低（p＜0.05），顯示出低血糖癥狀。泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組變化不顯著（p＞0.05）。與模型組相比，泥鰍高劑量組血清血糖含量顯著升高（p＜0.05），泥鰍低劑量組變化不顯著（p＞0.05）。

表3 實驗后小鼠血清血糖含量的變化（±s）Table3 The change of GLU content in mice plasma（±s）

表3 實驗后小鼠血清血糖含量的變化（±s）Table3 The change of GLU content in mice plasma（±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）血糖含量（mmol/L）空白組 0 3.36±0.91a模型組 0 1.90±0.46b泥鰍低劑量組 100 2.71±1.39ab泥鰍高劑量組 500 3.27±1.37a

2.2.2 泥鰍肉骨泥對小鼠血清高密度脂蛋白和低密度脂蛋白的影響 由表4可知，經(jīng)過模型制作及泥鰍肉骨泥飼喂，各組小鼠血清中高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量變化并不顯著（p＞0.05），即D-半乳糖模型對小鼠血清中高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量無顯著影響。

表4 實驗后小鼠血清高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量的變化（±s）Table4 The change of HDL and LDL content in mice plasma （±s）

表4 實驗后小鼠血清高密度脂蛋白及低密度脂蛋白含量的變化（±s）Table4 The change of HDL and LDL content in mice plasma （±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）高密度脂蛋白（mmol/L）低密度脂蛋白（mmol/L）空白組 0 4.07±0.58 0.66±0.19模型組 0 4.24±0.96 0.76±0.26泥鰍低劑量組 100 3.88±0.95 0.73±0.43泥鰍高劑量組 500 4.55±0.74 0.75±0.24

2.3 小鼠抗氧化指標(biāo)

2.3.1 泥鰍肉骨泥對小鼠血清SOD的影響 由表5知，實驗42 d后，與空白對照組相比，模型組小鼠血清SOD活性顯著降低（p＜0.05），泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組SOD活性與空白組相比不顯著（p＞0.05）。而與模型組相比，泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組小鼠血清SOD活性顯著升高（p＜0.05）。

表5 實驗后小鼠血清SOD活性的變化（±s）Table5 The change of SOD activities in mice plasma（±s）

表5 實驗后小鼠血清SOD活性的變化（±s）Table5 The change of SOD activities in mice plasma（±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）SOD活性（U/mL）空白組 0 205.73±20.15a模型組 0 173.81±15.12b泥鰍低劑量組 100 191.59±14.26a泥鰍高劑量組 500 199.08±19.68a

2.3.2 泥鰍肉骨泥對小鼠血清MDA的影響 由表6所示，與空白對照組相比，模型組小鼠血清MDA含量顯著增加（p＜0.05）。而與空白對照組相比，泥鰍高劑量組和低劑量組小鼠血清MDA含量無顯著區(qū)別（p＞0.05）。

表6 實驗后小鼠血清MDA含量的變化（±s）Table6 The change of MDA content in mice plasma（±s）

表6 實驗后小鼠血清MDA含量的變化（±s）Table6 The change of MDA content in mice plasma（±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）MDA含量（nmol/mL）空白組 0 16.68±1.57b模型組 0 18.69±1.93a泥鰍低劑量組 100 17.64±1.46ab泥鰍高劑量組 500 16.56±1.44b

2.3.3 泥鰍肉骨泥對小鼠肝臟SOD和CAT的影響 由表7可知，小鼠肝臟SOD數(shù)據(jù)各組之間變化并不顯著。相反，與空白對照組相比，模型組小鼠肝臟CAT活性顯著降低（p＜0.05），而泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組CAT活性變化不顯著（p＞0.05）。

表7 實驗后小鼠肝臟SOD和CAT活性的變化（±s）Table7 The change of SOD and CAT activities in mice liver（±s）

表7 實驗后小鼠肝臟SOD和CAT活性的變化（±s）Table7 The change of SOD and CAT activities in mice liver（±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）SOD活性（U/mgprot）CAT活性（U/mgprot）空白組 0 378.52±59.53 19.61±3.68a模型組 0 340.49±39.51 16.35±2.05b泥鰍低劑量組 100 360.48±32.26 17.34±3.24ab泥鰍高劑量組 500 348.68±40.44 18.11±3.56ab

2.3.4 泥鰍肉骨泥對小鼠肝臟MDA的影響 由表8可知，與空白對照組相比，模型組小鼠肝臟MDA含量顯著增加（p＜0.05），而泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量

組MDA含量差異均不顯著（p＞0.05）。與模型組相比，泥鰍低劑量組和泥鰍高劑量組MDA含量顯著減少（p＜0.05）。

表8 實驗后小鼠肝臟MDA含量的變化（±s）Table8 The change of MDA content in mice liver（±s）

表8 實驗后小鼠肝臟MDA含量的變化（±s）Table8 The change of MDA content in mice liver（±s）

組別 泥鰍肉骨泥灌胃劑量（mg/kg bw）MDA含量（nmol/mgprot）空白組 0 1.04±0.20b模型組 0 1.32±0.34a泥鰍低劑量組 100 1.05±0.28b泥鰍高劑量組 500 1.07±0.11b

3 討論

3.1 小鼠體重和脾臟指數(shù)

由于所用ICR小鼠實驗前為9～11周齡，正常此周齡雄性小鼠體重基本趨于穩(wěn)定，增長幅度并不大，因此實驗結(jié)束后小鼠體重增長不大，各組之間增長趨勢并不顯著。脾臟作為機體重要的免疫器官控制抗體和免疫細胞的生成，是免疫系統(tǒng)的重要組成部分［9］，脾臟指數(shù)的大小直觀反映了機體的免疫能力。本實驗中，長期注射D-半乳糖使實驗組小鼠產(chǎn)生氧化應(yīng)激，較長時間的應(yīng)激造成了機體的氧化損傷，使機體免疫力下降，因此模型組小鼠脾臟指數(shù)顯著低于空白組。但灌胃泥鰍肉骨泥的實驗組，脾臟指數(shù)恢復(fù)正常。證明泥鰍肉骨泥產(chǎn)品對小鼠氧化損傷起到一定的緩解作用，能夠增強免疫力。

泥鰍中含有泥鰍多糖及多肽等多種活性成分，多糖類物質(zhì)對免疫系統(tǒng)有重要的調(diào)節(jié)作用，能夠激活巨噬細胞，提高機體對抗病毒的能力。欽傳光等［10］給昆明小鼠連續(xù)灌胃泥鰍多糖30 d，采用常規(guī)方法檢測小鼠各項免疫指標(biāo)，結(jié)果證明小鼠脾臟淋巴細胞增殖能力顯著增強，腹腔巨噬細胞和抗體生成細胞能力均顯著增強，從而證明泥鰍多糖具有免疫調(diào)節(jié)作用。而本研究證明泥鰍全骨泥也具備較強的增強免疫力能力。

3.2 小鼠血清生化指標(biāo)

血糖作為機體提供能量的主要成分，在機體受到一定應(yīng)激刺激時，會消耗更多的能量來抵御外界的應(yīng)激，這就會造成血清中血糖含量的降低［11］。實驗中，模型組血糖含量顯著降低，說明機體為了抵抗D-半乳糖的應(yīng)激消耗了部分能量，而灌胃了泥鰍肉骨泥的小鼠，樣品中的有效成分抵抗了D-半乳糖的應(yīng)激作用，減少了對能量的需求，使得機體并未有較多的能量消耗。實驗顯示泥鰍低劑量組和高劑量組小鼠血糖均顯示出一定的恢復(fù)。

3.3 小鼠抗氧化指標(biāo)

利用D-半乳糖制作動物的衰老模型的科學(xué)性在較早便得到了證實［12］，近來這種造模技術(shù)也越來越成熟，運用的越來越廣泛［13-15］。模型組小鼠體內(nèi)會產(chǎn)生大量的自由基，這種自由基的堆積使得機體脂質(zhì)過氧化水平升高，導(dǎo)致其直接產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量增加，對機體造成損傷。超氧化物歧化酶［16］（SOD）是一種重要的自由基清除酶，可以催化超氧化物陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)，從而生成過氧化氫，細胞中存在的過氧化氫酶［17］（CAT）又會分解過氧化氫，防止自由基對細胞的毒害。

SOD、CAT和MDA均與機體的抗氧化反應(yīng)有關(guān)，它們的活性及含量的高低與機體抗氧化能力有著密不可分的關(guān)系。SOD和CAT活性的降低代表著機體受到了氧化損傷導(dǎo)致抗氧化能力降低，使得脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA含量增加。

本實驗中，模型組小鼠的血清SOD及肝臟CAT均顯示出明顯的降低趨勢，這說明D-半乳糖對它們的機體造成了一定的氧化損傷，破壞了其氧化酶系統(tǒng)的穩(wěn)定性。灌胃泥鰍組與模型組相比，SOD及CAT活性有了一定的升高，證明泥鰍的有效成分對這種氧化損傷起到一定緩解作用。模型組血清及肝臟中MDA含量均顯著高于空白組，說明模型組小鼠脂質(zhì)過氧化水平升高。而灌胃泥鰍組MDA含量又明顯降低甚至恢復(fù)到正常水平，證明泥鰍肉骨泥對小鼠的氧化損傷起到一定緩解作用。

此前有研究認為泥鰍中含有的有效成分泥鰍多糖是一種游離性的中性多糖，在抗氧化、清除機體自由基方面有顯著的作用［18-19］。李迎軍等［20］通過給小鼠灌胃白酒造成急性酒精性肝損傷模型，模型組小鼠連續(xù)給藥泥鰍粉3周，檢測小鼠血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活性明顯降低，肝組織中丙二醛含量顯著減少，谷胱甘肽過氧化物酶水平顯著提高，證明泥鰍粉具有抗酒精性肝組織損傷，抗氧化及保肝護肝作用。而泥鰍全骨泥也具備較強的抗氧化功能，為本研究首次證明。

4 結(jié)論

本實驗初步證明了泥鰍肉骨泥產(chǎn)品對衰老小鼠的血清和肝臟中的抗氧化性均具備一定增強效應(yīng)，并可以提高脾臟指數(shù)，提高免疫力。同時，食用泥鰍肉骨泥可以恢復(fù)水牢小鼠的血糖水平，明顯提高血清和肝臟中的抗氧化酶水平，降低脂質(zhì)氧化水平。本研究可為泥鰍肉骨泥產(chǎn)品的開發(fā)及泥鰍的功能性研究提供有用的依據(jù)。

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The Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste on antioxidant ability in mice

ZHOU Yang，LIU Hai-ying*
（School of Food Science and Engineering，Jiangnan University，Wuxi 214122，China）

The effects of Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste on antioxidant parameters in mice were investigated in this study.Mice were randomly divided into four groups：control group，model group，low-dose and high-dose misgurnus anguillicaudatus meat bone paste groups.The 500 mg/kg·bw D-galactose were injected subcutaneously into the naps of mice to induce aging model except the control group.Mice in the control group were injected with the same dose of physiological saline.Misgurnus anguillicaudatus were made into meat bone paste.The mice of low-dose and high-dose groups were given by gavage with Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste solutions of 100 mg/kg·bw and 500 mg/kg·bw respectively.Meanwhile，mice in control and model groups were given by gavage with the same dose of physiological saline.Plasma and liver samples were used for determination of antioxidant parameters.In the model group，the activities of plasma superoxide dismutase（SOD）and liver catalase（CAT）were significantly decreased compared with the control group（p＜0.05），and there were no significant differences among the control group，low-dose and highdose groups.In the model group，the content of malondialdehyde（MDA）in plasma and liver were significantly increased compared with the control group（p＜0.05），while there were no significant differences among the control group，low-dose and high-dose groups.Plasma glucose concentrations in the model group were significantly lower than in the control group（p＜0.05），and there were no significant differences among the control group，low-dose and high-dose groups.While this experiment also indicated that giving Misgurnus anguillicaudatus meat bone paste had little effect in high and low density lipoprotein in mice，no significant differences were found among the four groups.

Misgurnus anguillicaudatus；meat bone paste；antioxidant；immune regulation

TS254.9

A

1002-0306（2016）08-0347-05

10.13386/j.issn1002-0306.2016.08.065

2015-09-29

周楊（1991-），女，碩士研究生，研究方向：食品科學(xué)，E-mail：zhouy_email@163.com。

*通訊作者：劉海英（1973-），男，博士，副教授，研究方向：水產(chǎn)品加工及貯藏工程，E-mail：liuhaiying@jiangnan.edu.cn。

蘇北科技專項資金（BN2014054）。