阿苯達唑對蚯蚓若干生化指標的影響

叢琳，武瑞，李銀生

（1.黑龍江八一農墾大學動物科技學院，大慶163319；2.上海交通大學農業與生物學院，上海200240）

阿苯達唑對蚯蚓若干生化指標的影響

叢琳1，2，武瑞1*，李銀生2

（1.黑龍江八一農墾大學動物科技學院，大慶163319；2.上海交通大學農業與生物學院，上海200240）

采用人工污染土壤的方法進行阿苯達唑的蚯蚓毒性試驗，設計阿苯達唑的暴露濃度為0、50、100、200、400、600 mg·kg-1，暴露實驗進行3、7、14、28 d后，分別檢測蚯蚓體內超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽轉移酶（GST）活性和丙二醛（MDA）含量。結果表明，在供試濃度范圍內，蚯蚓體內各生化指標對污染物暴露指示的敏感性存在差異，敏感性大小為：MDA＞GST＞SOD≈CAT＞POD。400 mg·kg-1和600 mg·kg-1濃度下，阿苯達唑能夠引起蚯蚓機體的氧化應激響應。這些敏感的生化指標可以用作阿苯達唑生態毒理的生物標志物。

阿苯達唑；蚯蚓；抗氧化酶；谷胱甘肽轉移酶；丙二醛；生物標記物

叢琳，武瑞，李銀生.阿苯達唑對蚯蚓若干生化指標的影響［J］.農業環境科學學報，2016，35（7）：1264-1270.

CONG Lin，WU Rui，LI Yin-sheng.Effects of albendazole on biochemical characteristics of earthworms［J］.Journal of Agro-Environment Science，2016，35（7）: 1264-1270.

蚯蚓是大型土壤動物，占土壤動物總量的60%，是陸生生物與土壤生物之間傳遞污染物的橋梁，也是土壤污染毒理診斷的指示生物［1］。目前，污染物對蚯蚓的影響及毒性效應已有報道，如通過蚯蚓急性毒性試驗，可大致確定污染物對蚯蚓的毒性大小［2］；通過蚯蚓慢性毒性試驗，研究污染物對蚯蚓的生殖、生理、代謝、染色體以及基因的影響［3］，研究的熱點有谷胱甘肽轉移酶（GST）、超氧化物歧化酶（SOD）、酸性磷酸酶（AP）［4］、過氧化氫酶（CAT）、乙酰膽堿脂酶（AChE）、羧酸酯酶（CES）［5］、過氧化物酶（POD）、脂質過氧化產物丙二醛（MDA）、活性氧自由基（ROS）［6］、細胞色素P450酶系［7］和彗星試驗［8］等；還可以利用蚯蚓組織細胞超微結構的形態學變化來監測污染物的污染程度［9］，通過研究蚯蚓以及整個土壤動物種群數量和結構的變化反映土壤的污染程度［10］。污染物對蚯蚓的影響與蚯蚓的部位有關，對蚯蚓不同部位的研究包括蚯蚓整體［11］、腸、體壁［12］、前部、中部、后部［13］和內臟［14］等。

獸藥可用來維持動物的健康，然而，過度或不正確的使用，造成藥物以原形或代謝物的形式隨著糞便和尿液排泄到土壤環境中，從而對土壤中的生物產生危害。阿苯達唑（ABZ）是一種驅蟲藥，其驅蟲的機理是抑制延胡索酸還原酶和葡萄糖的轉運，減少三磷酸腺苷（ATP）的合成，從而干擾蟲體的生長和繁殖［15］，可抗旋毛蟲［16］、絳蟲、吸蟲［17］和囊尾蚴［18］等寄生蟲，廣泛應用于畜牧業。ABZ在體內迅速代謝為阿苯達唑亞砜（ABZSO），進而轉化為阿苯達唑砜（ABZSO2），最終轉化為阿苯達唑-2-氨基砜（ABZSO2-NH2）［19］。研究發現，ABZ進入動物體內后，在肌肉、組織和乳汁中［20］均有殘留，豬囊尾蚴病患者口服ABZ后，ABZ大約有11%以原藥的形式隨糞便排出，并且在尿液和糞便中均檢測到ABZSO和ABZSO2［18］殘留。

目前研究發現，ABZ影響蚯蚓精子的超顯微結構［21］，還顯著影響AP、GST和腺三磷酶（Ca2+-ATPase）的活性［13］。而應用蚯蚓抗氧化系統對ABZ毒性評價的研究相對較少。研究還發現，蚯蚓中部可能是ABZ對蚯蚓GST活性影響較大的部位，選擇蚯蚓中部作為生化指標研究的靶組織可能更有效，且有望成為毒理診斷的新方法。

本實驗以蚯蚓為供試生物，以SOD、POD、CAT、GST活性及MDA含量為指標，通過人工污染土壤的方法，研究ABZ對蚯蚓體內各生化指標的影響，旨在探討適合土壤ABZ污染診斷的生物標記物。

1　材料與方法

1.1供試材料

ABZ原粉（含量98%）由大連容海生物科技有限公司生產。

赤子愛勝蚓（Eisenia foetida）購自一蚯蚓養殖場。選取（500±20）mg、體色鮮艷紅潤、有明顯環帶的健康成年蚯蚓進行試驗。

供試土壤為人工土壤，由10%的苔蘚泥炭細土、20%的高嶺土、69%的工業石英砂和1%的碳酸鈣組成，每個處理土壤干重500 g。

1.2染毒方法

試驗設1個單純人工土壤對照組（0mg·kg-1ABZ）、5個處理組（50、100、200、400、600 mg·kg-1ABZ），染毒濃度以土壤干重計，每個處理3個重復。先將不同濃度的ABZ分別溶于20 mL丙酮中，再將ABZ溶液與500 g土壤充分混合30 min以上，待丙酮自然揮發24 h后，加入100 mL蒸餾水，轉移到長方形帶蓋的塑料盒中（蓋上有孔）；選取健康成年蚯蚓，清腸12 h后，放入塑料盒中，每個塑料盒中放10條蚯蚓，同時在塑料盒表面加入30 g研細的無藥物污染的濕牛糞作為蚯蚓的餌料，于人工氣候箱中培養28 d。箱中為標準試驗條件：溫度為（23±1）℃、濕度為75%±2%、光暗比為12 h/12 h，并定期噴射少量的水以保持土壤的濕度。于試驗的第3、7、14、28 d，從各處理組每個重復中取1條蚯蚓，進行SOD、CAT、POD、MDA和GST的測定。

1.3組織勻漿液的制備

以預冷的0.86%生理鹽水為蚯蚓組織勻漿液，1條蚯蚓清腸12 h，除去頭尾，保留中部25～33節，稱重，加入適量勻漿液，快速將蚯蚓剪碎，玻璃勻漿器勻漿數次，總計加入的勻漿液應為9倍質量體積，制成10%的組織勻漿。將勻漿液裝于1.5 mL離心管，10 000 r·min-1離心10 min，吸取上清，1.5 mL離心管編號供試，貯存于-80℃冰箱。

1.4酶活性的測定

SOD、CAT、SOD、GST和MDA均采用南京建成生物工程研究所生產的測試盒測定，按說明書的方法操作。其他藥品均為市購分析純。每個處理設3個重復，每個重復設3個平行，每個平行重復測定3次。

1.5數據處理

采用SPSS 19.0統計軟件進行單因素方差分析（One-way ANOVA），對組間數據進行差異顯著性分析，顯著水平為0.05。

2　結果與分析

2.1SOD活性的變化

不同濃度的ABZ在不同時間對蚯蚓體內SOD活性的影響如圖1所示。染毒后3 d，600 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），為對照組的31%；其余處理組SOD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。染毒后7 d，濃度為50～200 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為400 mg·kg-1和600 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別為對照組的85%和83%。染毒后14 d，濃度為50 mg·kg-1和100 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為200 mg·kg-1和400 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別為對照組的86%和72%；濃度為600 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），為對照組的63%。染毒后28 d，濃度為50、400、600 mg·kg-1的處理組SOD活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別為對照組的79%、77%和75%；其余處理組SOD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。

圖1　阿苯達唑對蚯蚓體內SOD活性的影響Figure 1 Effect of albendazole on SOD activity of earthworms

2.2CAT活性的變化

不同濃度的ABZ在不同時間對蚯蚓體內CAT活性的影響如圖2所示。染毒后3 d，各處理組CAT活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），說明ABZ對其沒有明顯的誘導或抑制效應。染毒后7 d，濃度為50～200 mg·kg-1的處理組CAT活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為400 mg·kg-1和600 mg· kg-1的處理組CAT活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別為對照組的82%和75%。染毒后14 d，濃度為50～200 mg·kg-1的處理組CAT活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為400 mg·kg-1的處理組CAT活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），為對照組的83%；濃度為600 mg·kg-1的處理組CAT活性與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），為對照組的73%。染毒后28 d，濃度為600 mg·kg-1的處理組CAT活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），為對照組的77%；其余處理組CAT活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。

2.3POD活性的變化

不同濃度的ABZ在不同時間對蚯蚓體內POD活性的影響如圖3所示。染毒后3 d，各處理組POD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），說明ABZ對其沒有明顯的誘導或抑制效應。染毒后7 d，濃度為50～400 mg·kg-1的處理組POD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為600 mg·kg-1的處理組POD活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），為對照組的84%。染毒后14 d，濃度為50～400 mg·kg-1的處理組POD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為600 mg·kg-1的處理組POD活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），為對照組的86%。染毒后28 d，各處理組POD活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。

圖2　阿苯達唑對蚯蚓體內CAT活性的影響Figure 2 Effect of albendazole on CAT activity of earthworms

圖3　阿苯達唑對蚯蚓體內POD活性的影響Figure 3 Effect of albendazole on POD activity of earthworms

2.4GST活性的變化

不同濃度的ABZ在不同時間對蚯蚓體內GST活性的影響如圖4所示。染毒后3 d，各處理組GST活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），說明ABZ對其沒有明顯的誘導或抑制效應。染毒后7 d，濃度為50～200 mg·kg-1的處理組GST活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為400 mg·kg-1和600 mg· kg-1的處理組GST活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別為對照組的83%和79%。染毒后14 d，濃度為50 mg·kg-1和100 mg·kg-1的處理組GST活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為200 mg· kg-1的處理組GST活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），為對照組的82%；濃度為400 mg·kg-1和600 mg·kg-1的處理組GST活性與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），分別為對照組的74%和68%。染毒后28 d，濃度為50～200 mg·kg-1的處理組GST活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為400 mg·kg-1和600 mg·kg-1的處理組GST活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別為對照組的84%和80%。

圖4　阿苯達唑對蚯蚓體內GST活性的影響Figure 4 Effect of albendazole on GST activity of earthworms

2.5MDA含量的變化

不同濃度的ABZ在不同時間對蚯蚓體內MDA活性的影響如圖5所示。染毒后3 d，濃度為50 mg· kg-1和100 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為200 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），比對照組高16%；濃度為400 mg·kg-1和600 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），分別比對照組高30%和38%。染毒后7 d，濃度為50 mg·kg-1和100 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為200 mg·kg-1和400 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別比對照組高16%和13%；濃度為600 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），比對照組高36%。染毒后14 d，濃度為50 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）；濃度為100～400 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比差異顯著（P＜0.05），分別比對照組高16%、13%和17%；濃度為600 mg·kg-1的處理組MDA活性與對照組相比差異極顯著（P＜0.01），比對照組高38%。染毒后28 d，各處理組MDA活性與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05）。

圖5　阿苯達唑對蚯蚓體內MDA含量的影響Figure 5 Effect of albendazole on MDA content of earthworms

3　討論

3.1阿苯達唑對蚯蚓SOD活性的影響

SOD是一種金屬酶，在動植物和微生物體內廣泛存在，可催化超氧陰離子自由基生成過氧化氫（H2O2），并水解為水（H2O）和氧氣（O2），SOD將對氧陰離子自由基的生成和清除處于一種動態平衡中，從而使機體免受超氧陰離子自由基的影響。SOD活性的變化常被用作標志物來指示重金屬［22］和殺菌劑［23］污染。ABZ對蚯蚓SOD活性的影響表現為：中高濃度處理組，隨著暴露時間的延長，其活性呈下降趨勢，可能是ABZ對蚯蚓體內SOD活性有抑制作用，且隨著暴露時間的延長，抑制作用越強，說明ABZ對蚯蚓體內氧化損傷作用越強。王軼等［24］在阿苯噠唑對蚯蚓的生態毒理效應中發現，染毒后21 d，濃度為0.25 mg·kg-1和0.5 mg·kg-1的處理組與對照組相比SOD活性呈上升趨勢，說明低濃度的ABZ對SOD具有誘導作用。

3.2阿苯達唑對蚯蚓CAT活性的影響

CAT是一種抗氧化酶，在微生物、植物和動物體內均有存在，可清除體內的H2O2，避免其與O-2·發生反應生成有害物質OH-［25］，造成機體損傷。該酶在抗氧化防御系統中是一種關鍵酶，廣泛應用于醫藥、造紙、環保、食品和紡織等行業［26］。ABZ對蚯蚓CAT活性的影響表現為：低濃度處理組（50～200 mg·kg-1），在暴露時間內與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），說明ABZ對其沒有明顯的誘導或抑制效應。高濃度組（400 mg·kg-1和600 mg·kg-1）在染毒7 d時表現出顯著的抑制效應，隨著暴露時間的延長，染毒14 d時高濃度組（600 mg·kg-1）表現出極顯著的抑制效應，在染毒28 d時抑制效應減弱，可能是機體內產生了大量的H2O2，超出其自動調節能力，機體內的CAT不足以清除大量的H2O2，使CAT活性下降，破壞機體的生物膜結構［27］。羅艷蕊等［11］發現，離子液體溴化1-辛基-3-甲基咪唑暴露42 d后蚯蚓體內CAT活性被顯著抑制。王娟［28］發現，吡蟲啉可抑制CAT活性，且濃度越大，CAT被抑制程度越高。

3.3阿苯達唑對蚯蚓POD活性的影響

POD是一種抗氧化酶，可以清除生物體內過量的H2O2，但其清除H2O2的方式與CAT不同。POD是以H2O2為電子受體，通過催化其他物質氧化分解的同時使H2O2接受電子轉化為H2O。雖然POD和CAT在清除H2O2的方式上有所不同，但研究發現兩者在清除體內過量H2O2上有良好的協同作用［29］。對蚯蚓POD的研究發現，蚯蚓暴露于莠去津環境時，可引起POD活力的上升［30］。ABZ對蚯蚓POD活性的影響表現為：濃度為50～400 mg·kg-1的處理組，在暴露時間內POD活力與對照組相比沒有顯著差異（P＞0.05），說明ABZ對其沒有明顯的誘導或抑制效應。與之相反，濃度為600 mg·kg-1的處理組，在染毒7 d和14 d時，POD活力受到抑制，與對照組相比差異顯著（P＜0.05）；在染毒28 d時，ABZ處理組又恢復至對照水平。造成該現象的原因可能是低劑量的ABZ產生的H2O2被體內的POD和CAT及時、有效地清除，而高劑量的ABZ產生的H2O2，超出了機體的自動調節能力，機體內的POD不足以清除大量的H2O2，使POD活性下降。本研究發現，阿苯達唑對CAT和POD均有抑制作用，與POD相比，其對CAT的抑制作用更強。

3.4阿苯達唑對蚯蚓GST活性的影響

蚯蚓體內含有很多解毒酶，例如GST、P450（細胞色素）、GSSG（氧化型谷胱甘肽）、GSH-Px（谷胱甘肽過氧化物酶）和GSH（還原型谷胱甘肽）等。GST在解毒過程中起著非常重要的作用，它可催化GSH與污染物中親電物質結合，從而減少這些污染物與細胞內生物大分子結合，還可清除脂類過氧化物，從而減少其對機體的損傷；另外其在抗氧化過程中也起著重要作用，可對活性氧簇（ROS）進行解毒。有關GST活性的變化對污染物暴露的指示作用在水體環境中的研究較多，如朱麗娜［31］發現，五氯酚（PentachioroPhenol，PCP）暴露3 h對雄性花背蟾蜍肝臟中GST活性的影響主要為誘導效應。ABZ對蚯蚓GST活性的影響表現為：染毒7 d時高濃度組（400 mg·kg-1和600 mg· kg-1）表現出顯著的抑制效應，隨著暴露時間的延長，染毒14 d時高濃度組（400 mg·kg-1和600 mg·kg-1）表現出極顯著的抑制效應，可能是ABZ對其產生毒性作用。Gao等［32］發現，染毒時間越長，蚯蚓體內ABZ濃度越高，其對GST活性的抑制作用越強，在染毒14 d時200～600 mg·kg-1的GST活性降到對照組的85%～73%。

3.5阿苯達唑對蚯蚓MDA含量的影響

機體通過酶系統與非酶系統產生ROS，后者可作用于生物膜中的多不飽和脂肪酸，引起脂質發生過氧化反應，生成脂質過氧化物MDA，因此測定MDA的含量可以反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映細胞的損傷程度［33］。MDA會引起核酸、蛋白質等生物大分子的交聯聚合，并且具有細胞毒性［34］。ABZ對蚯蚓MDA含量的影響表現為：在染毒3 d時，高濃度組（200～600 mg·kg-1）表現出顯著的誘導效應，尤其是400 mg·kg-1和600 mg·kg-1處理組表現出極顯著的誘導效應；隨著暴露時間的延長，在染毒7 d和14 d時，濃度為600 mg·kg-1的處理組，持續表現出極顯著的誘導效應；在染毒28 d時，ABZ處理組又恢復至對照水平。造成該現象的原因可能是高劑量的ABZ對蚯蚓造成過氧化損傷，暴露時間越長，其對蚯蚓的損傷程度越嚴重，而土壤的老化程度也越明顯，使ABZ的生物利用度降低，所以在染毒28 d時MDA的含量恢復至對照水平。黃沛力等［16］發現，受染大鼠用藥組（ABZ）血清中MDA含量升高，但與未用藥組相比沒有顯著性差異（P＞0.05）。

本研究結果顯示，蚯蚓體內的生化指標對不同暴露濃度的ABZ均有響應，但不同的生化指標對ABZ響應的毒性閾值是不同的，如SOD和CAT在600 mg·kg-1劑量下暴露14 d后表現出極顯著的抑制效應；而POD在600 mg·kg-1劑量下暴露14 d后表現出顯著的抑制效應；GST在400 mg·kg-1和600 mg·kg-1劑量下暴露14 d后表現出極顯著的抑制效應；MDA在400 mg·kg-1和600 mg·kg-1劑量下暴露3 d后表現出極顯著的誘導效應。由此可看出，MDA響應最為敏感，其次為GST，POD的響應最弱。

本研究結果表明，土壤中的ABZ可能對蚯蚓產生氧化損傷。這種損傷是否影響蚯蚓的生存、生長發育甚至種群數量與結構等，需要進一步研究。鑒于蚯蚓的重要生態功能，ABZ的這種毒性對土壤環境具有一定的潛在風險。

4　結論

（1）蚯蚓暴露于阿苯達唑污染土壤時，所研究的5種生化指標均對其產生了不同程度的響應，但是不同的生化指標對毒性效應響應的閾值不同，其敏感性大小為MDA＞GST＞SOD≈CAT＞POD。

（2）本研究結果可為阿苯達唑的土壤生態毒理診斷提供參考。

［1］Johnston A S，Hodson M E，Thorbek P，et al.An energy budget agentbased model of earthworm populations and its application to study the effects of pesticides［J］.Ecol Modell，2014，280（8）：5-17.

［2］胡秀卿，吳珉，蒼濤，等.毒死蜱和甲氰菊酯對蚯蚓毒性與安全評價研究［J］.農藥科學與管理，2004，25（4）：10-11. HU Xiu-qing，WU Min，CANG Tao，et al.Study on toxicity and safety evaluation of chlorpyrifos and fenpropathrin to earthworm［J］.Pesticide Science and Administration，2004，25（4）：10-11.

［3］邱江平.蚯蚓及其在環境保護上的應用Ⅱ.蚯蚓生態毒理學［J］.上海農學院學報，1999，17（4）：301-308. QIU Jiang-ping.Earthworms and their application in environment protectionⅡ.Ecotoxicology of earthworms［J］.Journal of Shanghai Agricultual College，1999，17（4）：301-308.

［4］王輝，謝鑫源.Cd、Cu和Pb復合污染對蚯蚓抗氧化酶活性的影響［J］.環境科學，2014，35（7）：2748-2754. WANG Hui，XIE Xin-yuan.Effects of combined pollution of Cd，Cu and Pb on antioxidant enzyme activities of earthworm in soils［J］.Environmental Science，2014，35（7）：2748-2454.

［5］Velki M，Hackenberger B K，Loncˇaric′Z，et al.Application of microcosmic system for assessment of insecticide effects on biomarker responses in ecologically different earthworm species［J］.Ecotoxicol Environ Saf，2014，104：110-119.

［6］Zhang Q，Zhang B，Wang C.Ecotoxicological effects on the earthworm Eisenia fetida following exposure to soil contaminated with imidacloprid［J］.Environ Sci Pollut Res Int，2014，21（21）：12345-12353.

［7］Zhang W，Song Y F，Gong P，et al.Earthworm cytochrome P450 determination and application as a biomarker for diagnosing PAH exposure［J］.JEnviron Monit，2006，8（9）：963-967.

［8］Bustos-Obregon E，Goicochea R I.Pesticide soil contamination mainly affects earthworm malere productive parameters［J］.Asian J Androl，2002，4（3）：195-199.

［9］甘雅玲，郭中偉.溴氰菊脂對蚯蚓超微結構影響的研究［J］.電子顯微學報，2002，21（5）：513-514. GAN Ya-ling，GUO Zhong-wei.Study on the effect of deltamethrin on ultrastructure of earthworm［J］.Journal of Chinese Electron Microscopy Society，2002，21（5）：513-514.

［10］孫鐵珩，宋玉芳.土壤污染的生態毒理診斷［J］.環境科學學報，2002，22（6）：689-695. SUN Tie-heng，SONG Yu-fang.Eco-toxicological diagnosis of soil pollution［J］.ActaScientiae Circumstantiae，2002，22（6）：689-695.

［11］羅艷蕊，李效宇，運迷霞，等.［C8mim］Br對蚯蚓抗氧化系統的亞慢性毒性效應［J］.農業環境科學學報，2009，28（2）：343-347. LUO Yan-rui，LI Xiao-yu，YUN Mi-xia，et al.Subchronic toxicity effect of［C8mim］Br on the antioxidant system of earthworm［J］.Journal of Agro-Environment Science，2009，28（2）：343-347.

［12］Gao Y，Sun X，Sun Z，et al.Toxic effects of enrofloxacin on growth rate and catalase activity in Eisenia fetida［J］.Environ Toxicol Pharmacol，2008，26（2）：177-180.

［13］高玉紅，孫振鈞，孫新勝，等.阿苯噠唑對蚯蚓（Eisenia fetida）酸性磷酸酶、谷胱甘肽硫轉移酶及腺三磷酶活性的影響［J］.生態學報，2007，27（9）：3916-3922. GAO Yu-hong，SUN Zhen-jun，SUN Xin-sheng，et al.Effect of albendazole on acid phosphatase，glutathione S-transferase and adenosine triphosphatease activities of earthworms［J］.ActaEcologicaSinica，2007，27（9）：3916-3922.

［14］楊曉霞，張薇，曹秀鳳，等.亞致死劑量銅對蚯蚓P450酶和抗氧化酶活性的長期影響［J］.環境科學學報，2012，32（3）：745-750. YANG Xiao-xia，ZHANG Wei，CAO Xiu-feng，et al.Long-term effect of copper with sublethal dose on cytochrome P450 and antioxidant enzyme activities of earthworms［J］.Acta Scientiae Circumstantiae，2012，32（3）：745-750.

［15］Gr?nvold J，Svendsen T S，Kraglund H O，et al.Effect of the antiparasitic drugs fenbendazole and ivermectin on the soil nematode Pristionchus maupasi［J］.Vet Parasitol，2004，124（1/2）：91-99.

［16］黃沛力，李浴峰，陳怡，等.氧自由基與阿苯達唑對旋毛蟲幼蟲作用關系初探［J］.中國人獸共患病雜志，2002，18（2）：76-78. HUANG Pei-li，LI Yu-feng，CHEN Yi，et al.Studies on relationship between oxygen free radical and albenedazle acting on the larve of T. spiralis［J］.Chinese Journal of Zoonoses，2002，18（2）：76-78.

［17］許正敏，李智山，溫茂興，等.中藥合劑和阿苯達唑對犬鉤蚴的作用效果觀察［J］.中國病原生物學雜志，2012，7（5）：357-359. XU Zheng-min，LI Zhi-shan，WEN Mao-xing，et al.Observation of the effects of a traditional Chinese medicinal mixture and albendazole on canine hookworm larvae［J］.Journal of Pathogen Biology，2012，7（5）：357-359.

［18］趙冠宏，許熾標.阿苯噠唑在豬囊尾蚴病患者體內吸收和排泄的初步研究［J］.中國航天醫藥雜志，2002，4（3）：4-5. ZHAO Guan-hong，XU Chi-biao.Preliminary studies on absorption and excretion of albendazole in patients with cysticercosis cellulosae［J］. Medical Journal of Casc，2002，4（3）：4-5.

［19］Mirfazaelian A，Dadashzadeh S，Rouini M R.A high performance liquid chromatography method for simultaneous determination of albendazole metabolites in human serum［J］.J Pharm Biomed Anal，2002，30（4）：1249-1254.

［20］李慧萍，畢文巖，郭恒，等.牛肉中阿苯達唑及其代謝產物殘留的檢測［J］.中國奶牛，2011（8）：62-64. LI Hui-ping，BI Wen-yan，GUO Heng，et al.Detection of beef albendazole and its metabolites［J］.ChinaDairy Cattle，2011（8）：62-64.

［21］高玉紅，賈鎏輝，吳占軍，等.獸藥阿苯達唑對蚯蚓精子發生的顯微和超顯微結構的影響［J］.環境科學學報，2012，32（10）：2607-2611. GAO Yu-hong，JIA Liu-hui，WU Zhan-jun，et al.Effect of albendazole on microstructure and ultrastructure during spermiogenesis in earthworms［J］.Acta Scientiae Circumstantiae，2012，32（10）：2607-2611.

［22］Yang X，Song Y，Ackland M L，et al.Biochemical responses of earthworm Eisenia fetida exposed to cadmium-contaminated soil with long duration［J］.Bull Environ Contam Toxicol，2012，89（6）：1148-1153.

［23］Cao X，Yang C，Liu J，et al.DNA damage and effects on antioxidative enzymes in earthworm（Eisenia fetida）induced by flumorph［J］.Appl Biochem Biotechnol，2014，172（4）：2276-2285.

［24］王軼，唐云，徐凌凌，等.阿苯噠唑對蚯蚓的生態毒理效應［J］.應用生態學報，2009，20（9）：2298-2300. WANG Yi，TANG Yun，XU Ling-ling，et al.Ecotoxicolgical effects of albendazole on Eisenia fetida［J］.Chinese Journal of Applied Ecology，2009，20（9）：2298-2300.

［25］毛玉霞，鄭洪，郭祥群，等.過氧化氫酶熒光分析法及其在海洋水生生物酶活力測定中的應用［J］.高等學校化學學報，2002，10（23）：1864-1867. MAO Yu-Xia，ZHENG Hong，GUO Xiang-Qun，et al.Fluorescence analysis of catalase and its application in the determination of enzyme activity in marine aquatic life［J］.Chemical Research in Chinese Universities，2002，10（23）：1864-1867.

［26］Zamocky M，Furtmüller P G，Obinger C.Evolution of catalases from bacteria to humans［J］.Antioxid Redox Signal，2008，10（9）：1527-1548.

［27］徐鏡波，袁曉凡，郎佩珍.過氧化氫酶活性及活性抑制的紫外分光光度測定［J］.環境化學，1997，16（1）：73-76. XU Jing-bo，YUAN Xiao-fan，LANG Pei-zhen.Determination of catalase activity and activity inhibition by UV Spectrophotometry［J］.Environmental Chemistry，1997，16（1）：73-76.

［28］王娟.吡蟲啉對蚯蚓抗氧化酶系的影響及DNA損傷［D］.泰安：山東農業大學，2013. WANG Juan.Oxidative stress and DNA damage induced by imidacloprid exposure in earthworm［D］.Taian：Shandong Agricultural University，2013.

［29］張薇，宋玉芳，孫鐵珩，等.土壤低劑量熒蒽脅迫下蚯蚓的抗氧化防御反應［J］.土壤學報，2007，44（6）：1050-1054. ZHANG Wei，SONG Yu-fang，SUN Tie-heng，et al.The antioxidant defense reaction of earthworm soil low dose fluoranthene stress［J］.Acta PedologicaSinica，2007，44（6）：1050-1054.

［30］Song Y，Zhu L S，Wang J，et al.DNA damage and effects on antioxidative enzymes in earthworm（Eisenia fetida）induced by atrazine［J］.Soil Biology and Biochemistry，2009，41（5）：905-909.

［31］朱麗娜.五氯酚對花背蟾蜍遺傳毒性及GST、LDH酶活性作用的研究［D］.蘭州：蘭州大學，2007. ZHU Li-na.The genotoxic effects of pentachlorophenol on Bufo raddei and the activity changes of GST and LDH［D］.Lanzhou：Lanzhou University，2007.

［32］Gao Y H，Sun Z J，Liu Y Q，et al.Effect of albendazole anthelmintics on the enzyme activities of different tissue regions in Eisenia fetida［J］. Euro Pean Journal of Soil Biology，2007，43：S246-S251.

［33］Duryee M J，Klassen L W，Schaffert C S，et al.Malondialdehyde-acetaldehyde adduct is the dominant epitope after MDA modification of proteins in atherosclerosis［J］.Free Radical Biology and Medicine，2010，49（10）：1480-1486.

［34］Mooradian A D，Reinacher D，Li J P，et al.Malondialdehyde modification of proteins in vitro is enhanced in the presence of acetaldehyde［J］. Nutrition，2001，17（7/8）：619-622.

Effects of albendazole on biochemical characteristics of earthworms

CONG Lin1，2，WU Rui1*，LI Yin-sheng2
（1.College of Animal Science and Technology，Heilongjiang Bayi Agricultural University，Daqing 163319，China；2.College of Agriculture and Biology，Shanghai Jiao Tong University，Shanghai 200240，China）

The toxicity of albendazole（ABZ）was investigated using earthworms and artificial soils contaminated with varying concentrations（0，50，100，200，400 and 600 mg·kg-1）of ABZ.The toxicity to the earthworms was assessed by measuring malondialdehyde（MDA）content and glutathione-S-transferase（GST），superoxide dismutase（SOD），peroxidase（POD）and catalase（CAT）activities of earthworms after exposure to ABZ for 3，7，14 and 28 days.The MDA content was positively correlated with ABZ concentrations；Such correlation was significant at ABZ concentration of 400 mg·kg-1after 3 days and 600 mg·kg-1after 3，7 and 14 days.The activities of SOD，CAT，POD and GST were negatively correlated with ABZ concentrations.The SOD and CAT activities were significantly inhibited by ABZ at 600 mg·kg-1after 14 days，while POD activity was significantly suppressed by 600 mg·kg-1after 7 days，and GST activity by 400 to 600 mg·kg-1after 14 days. These sensitive biochemical indexes may be used as ecotoxicological biomarker of albendazole.

albendazole；earthworm；antioxidant enzyme；glutathione-S-transferase；malondialdehyde；biomarker

X820.3

A

1672-2043（2016）07-1264-07

10.11654/jaes.2016.07.006

2015-12-31

國家自然科學基金項目（31172360）

叢琳（1990—），女，碩士生，從事臨床獸醫學與新獸藥研發。E-mail：151072960@qq.com

武瑞E-mail：19393603@qq.com