p-mTOR在胃癌組織中的表達及臨床意義

汪星星，韓麗紅，閆斌，于躍利

1.包頭醫學院研究生院，內蒙古包頭014060；2.包頭醫學院第一附屬醫院普外二科，內蒙古包頭014010

*基礎醫學研究*

p-mTOR在胃癌組織中的表達及臨床意義

汪星星1，韓麗紅1，閆斌2，于躍利2

1.包頭醫學院研究生院，內蒙古包頭014060；2.包頭醫學院第一附屬醫院普外二科，內蒙古包頭014010

目的 探討p-mTOR的表達水平與胃癌發生的關系。方法 選擇2014年3月—2016年2月于包頭市腫瘤醫院經手術根治切除的胃癌標本，采用免疫組織化學法檢測60例胃癌組織及40例癌旁胃組織中p-mTOR蛋白水平的表達情況。結果 pmTOR蛋白在胃癌組織中的表達水平高于癌旁組織，差異有統計學意義。結論p-mTOR在胃癌組織中過度表達可能是胃癌發生的機制之一。

胃癌；磷酸化雷帕霉素靶蛋白(mTOR)；免疫組織化學法

胃癌作為我國一種較為常見的惡性腫瘤，此病發病率乃處于各種腫瘤病癥之首。該病早期并無明顯癥狀表現，當抽選明顯臨床癥狀時，則多數皆為晚期，因此，胃癌具有極高的致死率。哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（mTOR蛋白）作為一個于近些年發現的信號傳導樞紐，乃是蛋白質翻譯、核糖體合成及細胞內參當中一種十分重要的生物學行為[1]，mTOR可通過其促進腫瘤細胞增殖、細胞周期轉化和增加腫瘤新生血管的形成，在體內惡性腫瘤的形成過程和腫瘤細胞耐藥性的形成關系密切[2]。本研究采用免疫組化的方法觀察2014年3月—2016年2月包頭市腫瘤醫院60例胃癌患者癌組織及癌旁組織(腫瘤邊緣5 cm處）中p-mTOR的表達情況并分析其與胃癌之間的聯系。

1 材料與方法

1.1 材料

觀察組為2014年3月—2016年2月于包頭市腫瘤醫院經手術根治切除的胃癌石蠟標本60例（術前未接受化療、放療或內分泌治療，無合并其他惡性腫瘤和遺傳病史），對照組為癌旁組織(腫瘤邊緣5 cm處)40例。標本均4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋，4 μm連續切片，蘇木精—伊紅染色，所有患者診斷均經病理學證實。

1.2 方法

p-mTOR的檢測采用免疫組化法：一抗p-mTOR (s2448)購于Bioworld Technology,貨號為BS4706,抗體來源為兔,多克隆抗體,適用于人、小鼠、大鼠。一抗稀釋度分別為1:100。二抗:HRP標記抗兔二抗，0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液pH7.4，0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖液pH6.0，DAB顯色液(GK346810)，按說明書操作。p-mTOR以胞質中出現棕黃色顆粒為陽性判斷標準，以0.01 mol/LPBS作為陰性判斷標準。參照Naoki標準，陽性細胞數0%為(-)，0%～20%為(±)，20%～80%為(+)，＞80%為(++)；(-)和(±)為陰性，(+)和(++)為陽性。

1.3 統計方法

采用SPSS18.0統計分析軟件。組間陽性率比較采用χ2檢驗，計數資料采取百分比表示，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

從本次實驗采用免疫組化法對胃癌組織及胃正常組織進行染色后所提供的染色圖片上可以看出，兩者的染色結果存在較為明顯的差異。在胃癌中，p-mTOR的染色陽性部分主要集中于胃癌細胞的細胞胞漿部分，成棕色、彌漫性的分布于細胞胞漿當中，在對照組的胃正常組織中，染色的陽性部分主要集中于細胞胞漿，呈棕色，但比較胃癌細胞染色不同的是胃正常的染色為顆粒狀，大小不等，分布較散在（如圖1）。

本次實驗中的60例胃癌組織中，根據本次實驗中所提到的mTOR因子染色評分標準的評分方法，最后得出p-mTOR在觀察組胃癌60例患者中的陽性表達的例數為22例，對照組胃正常組織40例患者中p-mTOR陽性表達的例數為4例，根據SPSS軟件四格表資料的χ2檢驗計算，結果顯示差異有統計學意義（根據四格表資料的χ2檢驗結果示：χ2＝5.557，P＝0.005）。詳見表1。

表1 p-mTOR表達情況

圖1 p-mTOR在胃正常組織及胃癌組織中的表達

3 討論

調控細胞生長代謝相應信號傳導途徑出現功能紊亂狀況，其也是造成發生腫瘤的重要因素，mTOR信號通路密切相關于多種惡性腫瘤的的發生及發展，當mTOR受到其通路方面的胰島素受體、PTEN基因及上游生長因子受體等多方面的刺激影響下，能夠對細胞凋亡具有抑制作用，且還會促進細胞在運行周期方面的加快，對于腫瘤血管相應形成具有促進作用，同時還促進腫瘤侵襲轉移。另外，對于mTOR信號通路而言，其對于那些從正常細胞惡性轉化為腫瘤細胞，均有所參與，而在具體的腫瘤細胞當中，其內部存有與編碼mTOR信號通路存在關聯的蛋白，其可實現基因突變，此些蛋白在表達方面如若出現異常，則會造成mTOR通路出現過度性的激活狀況。mTOR對于cyclinD1表達具有上調作用，進而對細胞周期給予調控，自G1轉變為S期，而對于mTOR抑制劑，其可利用對細胞增殖所具有的相應抑制作用，通過對細胞凋亡實施誘導，從而將抵抗腫瘤的作用予以充分發揮。

活化的mTOR/4EBP1信號通路與多種惡性腫瘤的發生發展有密切關系，目前已發現肺癌、腎癌、乳腺癌和白血病等多種腫瘤中存在mTOR信號通路的過度激活。mTOR在肝癌、胰腺癌、胃癌等[3]消化系腫瘤中亦存在高表達和活化，已成為胃癌治療的新靶點。

Yu等[4]用1 072例胃癌患者的胃癌組織及配對的非腫瘤胃組織構建組織微陣列塊，并用免疫組織化學和免疫印跡法發現總mTOR和p-mTOR過表達，兩者的過表達顯著相關。另有研究[5]用免疫組化法檢測210例患者胃腺癌組織中p-mTOR的表達，發現胃癌細胞胞漿中pmTOR陽性率為88%，與胃癌發生呈線性相關。Li等[6]研究發現33例胃癌患者的胃癌細胞中，mTOR的陽性率為51.5%。應用免疫組化法檢測286例患者的胃癌組織中發現4EBP1和p-4EBP1的表達率分別為68.5%（196/286）和49.7%（142/286）與胃癌呈線性相關。

韓國學者An等[7]采用組織微陣列免疫組化方法研究290例pT2b期胃癌患者磷酸化mTOR的表達（p-mTOR），胃癌組織中p-mTOR以及淋巴結轉移之間存在明確的相關性，p-mTOR的表達與胃癌患者的預后密切相關。研究表明[8-9]聯合使用卡培他濱及mTOR抑制劑依維莫司對復發的胃癌患者具有腫瘤細胞毒作用及適度的臨床效果。

mTOR信號通路密切相關于多種惡性腫瘤的的發生及發展，當mTOR受到其通路方面的胰島素受體、PTEN基因及上游生長因子受體等多方面的刺激影響下，能夠對細胞凋亡具有抑制作用，且還會促進細胞在運行周期方面的加快，對于腫瘤血管相應形成具有促進作用，同時還促進腫瘤侵襲轉移。另外，對于mTOR信號通路而言，其對于那些從正常細胞惡性轉化為腫瘤細胞，均有所參與，而在具體的腫瘤細胞當中，其內部存有與編碼mTOR信號通路存在關聯的蛋白，其可實現基因突變，此些蛋白在表達方面如若出現異常，則會造成mTOR通路出現過度性的激活狀況。

伴隨mTOR信號通路在整個抗癌研究的廣泛應用，其通過抑制靶向，或將此信號相應傳導通路當中的某位點給予下調，則會對腫瘤相應發生及發展作用造成影響。本次研究依據臨床實際，采用免疫組化對mTOR在胃癌組織、癌旁胃組織中相應表達差異予以研究，從而為對胃癌發生分子機制更加深入的認識，提供更加豐富、充實的理論支撐，從而為胃癌臨床干預及早期診斷的有效開展，提供新的且更為有效的分子標記物。mTOR表達水平變化可為胃癌的診斷、靶向治療及預后判斷提供依據。

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[1]季冬梅,李進.靶向PI3K/Akt/mTOR通路在胃癌中的研究進展[J].腫瘤,2014(2):191-196.

[2]孫丹鳳,張燕捷,田筱青,等.哺乳動物雷帕霉素靶蛋白信號通路及其下游蛋白在胃癌組織中的活化及臨床意義[J].中華消化雜志,2013,33(3):166-170.

[3]Nemunaitis J,Hochster HS,Lustgarten S,et al.A phase I trial of oral ridaforolimus (AP23573;MK-8669)in combination with bevacizumab for patients with advanced cancers[J].Clin Oncol(R Coll Radiol),2013,25(6):336-342.

[4]Yu G,Wang J,Chen Y,et al.Overexperssion of phosphorylated mammalian target of rapamycin perdicts lymph node metastsis and prognosis of chinese patients with gastric cancer[J].Clin Cancer Res,2009,15(5):1821-1829.

[5]Feng W,Brown RE,Trung CD,et al.Morphoproteomic profile of mTOR,Ras/Raf/kinase/ERK,and NF-kappaB pathways in human gastric adenocarcinoma[J].Ann Clin Lab Sci,2008,38 (3):195-209.

[6]Li M,Sun H,Song L,et al.Immunohistochemical expression of mTOR negatively correlates with PTEN expression in gastric carcinoma[J].Oncol Lett,2012,4(6):1213-1218.

[7]An JY,Kim KM,Choi MG,et al.Prognostic role of p-mTOR expression in cancer tissues and metastatic lymph nodes in pT2b gastric cancer[J].Int J Cancer,2010,126(12):2904-2913.

[8]Lim T,Lee J,Lee DJ,et al.Phase I trial of capecitabine plus everolimus (RAD001)in patients with previously treated metastatic gastric cancer[J].Cancer Chemother Pharmacol, 2011,68(1):255-262.

[9]孫丹鳳,張燕捷,田筱青,等.哺乳動物雷帕霉素靶蛋白信號通路及其下游蛋白在胃癌組織中的活化及臨床意義[J].中華消化雜志,2013,33(3):166-170.

Expression and Significance of p-mTOR in the Tissue of Gastric Carcinoma

WANG Xing-xing1，HAN Li-hong1，YAN Bin2，YU Yue-li2
1.Baotou Medical College,Baotou，Inner Mongolia,014060 China；2.First Affiliated Hospital of Baotou Medical College Second Department of General Surgery,Baotou，Inner Mongolia,014010 China

Objective To investigate relationship between the expression levels of p-mTOR and gastric carcinoma Methods Choose in March 2014 to February 2016 in baotou tumor hospital after the surgery,radical resection of gastric cancer specimens.Immuneohistochemistry was used to determine the expression levels of p-mTOR in 60 cancerous tissues and 40 paracancerous tissues.Results The expression level of p-mTOR was markedly higher in the gastric carcinoma tissues than in the paracancerous tissues.Conclusions Overexpression of p-mTOR in gastric cancer may be one of the important mechanisms of gastric cancer.

Gastric carcinoma;mTOR;Immuneohistochemistry

R735.2

A doi 10.11966/j.issn.2095-994X.2016.02.01.06

2015-12-09；

2016-02-01

包頭市科技計劃項目（Wsjj1015073),內蒙古自治區高等學校科學研究項目（NJZY16204),包頭醫學院博士啟動基金項目（BSJJ201605)。

汪星星 （1988.9-），漢族，男，江西上饒人，在讀碩士研究生，主要從事普外科疾病的診斷與治療工作，E-mial:vhanlihong@163.com。

于躍利（1964.9-），漢族，男，內蒙古包頭人，碩士，主任醫師，教授，研究生導師，主要從事普外科疾病的相關工作，聯系電話13384720188，E-mial:ybacm@163.com。

汪星星，韓麗紅，閆斌，等.p-mTOR在胃癌組織中的表達及臨床意義[J].世界復合醫學，2016,2（1）：24-26.