鐵筷子醇提物對佐劑性關節炎大鼠HIF-1α、VEGF和MMP-3表達的影響

李　夢，錢海兵

(貴陽中醫學院,貴州 貴陽　550002)

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◇研究簡報◇

鐵筷子醇提物對佐劑性關節炎大鼠HIF-1α、VEGF和MMP-3表達的影響

李夢，錢海兵

(貴陽中醫學院,貴州 貴陽550002)

鐵筷子；醇提物；佐劑性關節炎；缺氧誘導因子-1α；血管內皮因子；基質金屬蛋白酶-3

鐵筷子(ChimonanthuspraecoxL. Link.)為臘梅科臘梅屬植物臘梅及山臘梅的干燥根，是苗族人民用于治療類風濕性關節炎(rheumatoid arthritis，RA)的傳統用藥[1]。前期研究表明鐵筷子醇提物可以減輕佐劑性關節炎(AA)大鼠足腫脹，對RA具有一定的治療作用。本研究以佐劑性關節炎大鼠模型為基礎，觀察鐵筷子醇提物對AA大鼠HIF-1α、VEGF以及MMP-3的影響。

1　材料與儀器

1.1實驗動物SPF級SD大鼠，體質量(200±20 g)，由中國人民解放軍第三軍醫大學實驗動物中心提供(動物合格證書編號:2012-0003)。

1.2主要藥品與試劑鐵筷子，采自貴陽市烏當區三江鎮農場，經貴陽中醫學院藥學院生藥教研室鑒定為臘梅科臘梅屬植物臘梅的根。雷公藤多苷片，福建匯天生物藥業有限公司。滅活卡介苗(BCG)，中國衛生部上海生物制品研究所。ELISA試劑盒由海藍基生物科技有限公司提供。免疫組化抗體由Santa Cruz公司提供。

1.3主要儀器石蠟切片機CUT4062，德國萊卡；電動勻漿機S25，德國IKA。

2　方法

2.1鐵筷子醇提物浸膏的制備鐵筷子用體積分數為0.78的乙醇熱回流提取，減壓濃縮，蒸干得浸膏。

2.2完全弗氏佐劑(CFA)及AA大鼠模型的制備高壓滅菌后的石蠟油和羊毛脂加入卡介苗，制備成含卡介苗100 g·L-1的完全弗氏佐劑，于大鼠左足跖皮內注射, 復制成AA大鼠模型。

2.3動物分組及給藥72只健康SD大鼠，♀♂各半,隨機分為空白組、模型組、雷公藤組(31.5 mg·kg-1·d-1)、鐵筷子醇提物高、中、低劑量組(生藥量為7.0、3.5、1.75 g·kg-1·d-1)。

2.4指標的檢測

2.4.1病理學檢測踝關節HE染色，并對病理損傷評分。

2.4.2血清中HIF-1α的測定根據ELISA試劑盒說明書檢測HIF-1α的含量。

2.4.3滑膜組織中VEGF、MMP-3的檢測用免疫組化方法檢測VEGF、MMP-3的蛋白表達，并分析其平均光密度的變化。

3　結果

3.1鐵筷子醇提物對AA大鼠踝關節病理損傷的影響HE染色結果顯示鐵筷子醇提物能改善AA大鼠踝關節病理病變情況。根據病理學評分原則進行評分，如Tab 1所示，鐵筷子醇提物高、中劑量組可明顯降低病理學評分分值(P<0.05)。

GroupDosage/mg·kg-1PathologicaldamagescoreNormalcontrol-1.17±0.98Modelcontrol-11.17±0.75**High-dosage6646.83±0.98#Middle-dosage3327.67±1.51#Low-dosage1669.83±1.17Tripterygiumwilfordiiglycosidestablets31.56.67±0.82#

**P<0.01vsnormal control;#P<0.05vsmodel control

3.2鐵筷子醇提物對AA大鼠血清中HIF-1α濃度的影響如Tab 2所示，鐵筷子醇提物各劑量組可降低HIF-1α的濃度，其中高、中劑量組作用明顯(P<0.05)。

3.3鐵筷子醇提物對AA大鼠滑膜組織VEGF、MMP-3蛋白表達的影響如Tab 2所示，鐵筷子醇提物高、中劑量組可明顯降低VEGF、MMP-3光密度值(P<0.05)。

Tab 2　Effect on concentrations of HIF-1α in serum and optical density value of VEGF,MMP-3 in synovial tissue in AA ±s，n=12)

*P<0.05vsnormal control;#P<0.05vsmodel control

4　討論

近年在對RA發病機制的研究過程中，滑膜血管新生被認為發揮了重要作用。HIF-1α是低氧狀態下血管生成的核心調控因子，主要通過提高VEGF 的表達促進血管生成，從而促進滑膜細胞增殖、活化[2]，VEGF在缺氧條件下能被HIF-1α誘導激活,導致RA血管生成和滑膜炎癥[3]。MMP-3作為金屬蛋白酶家族成員之一，是RA的一種重要致病因素。有學者認為在RA過程中，某些細胞因子會使MMP-3得到釋放，導致軟骨基質的降解，從而破壞RA軟骨和骨骼[4]。本實驗結果顯示，鐵筷子醇提物可以降低HIF-1α水平以及VEGF、MMP-3的表達，因此推測鐵筷子醇提物通過降低細胞因子水平，減輕了細胞因子對滑膜細胞和軟骨細胞的刺激，從而減少滑膜組織中MMP-3的分泌，最終阻止骨質的破壞。

綜上所述，鐵筷子醇提物能改善AA大鼠關節的病理改變，說明其可以抑制關節炎癥，對RA具有一定的療效。且鐵筷子醇提物下調HIF-1α及VEGF、MMP-3的表達可能是其治療RA的相關機制。

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Effects of alcohol extract from root of wintersweet on expression of HIF-1α,VEGF and MMP-3 in adjuvant arthritis rats

LI Meng,QIAN Hai-bing

(GuiyangCollegeofTraditionalChineseMedicine,Guiyang550002,China)

root of wintersweet;alcohol extract;adjuvant arthritis;hypoxia-inducible factor-1α;vascular endothelial growth factor; matrix metalloproteinase-3

2016-03-03,修回稿日期：2016-05-23

貴州省科技廳聯合基金(No 黔科合中藥字[2012]LKZ7030；貴陽市科技計劃項目(No 筑科合同[2011204]22號)；貴州省研究生教育創新基地(No 黔教研合CXJD字[2014]004)

李夢(1991-)，女，碩士生，研究方向：中藥及民族藥藥效物質基礎及作用機制，E-mail：359473448@qq.com；

錢海兵(1977-)，男，博士，教授，研究方向：中藥及民族藥藥效物質基礎及作用機制，通訊作者，E-mail:279753407@qq.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2016.09.027

A

1001-1978(2016)09-1326-02

R-332；R284.1；R322.72；R593.22；R684.3

網絡出版時間：2016-8-23 14:29:00網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20160823.1429.054.html