直接水解紫外光譜法測定豬肉中色氨酸的含量

2016-10-12 07:53:13張松吳迪

黑龍江生態工程職業學院學報 2016年5期

張　松　吳　迪

(貴州師范大學 a.貴州省山地環境重點實驗室;b.分析測試中心，貴州貴陽 550001)

張松a，b吳迪a，b

(貴州師范大學 a.貴州省山地環境重點實驗室;b.分析測試中心，貴州貴陽 550001)

通過直接水解，采用對二甲氨基苯甲醛顯色的紫外光譜法測定豬肉中色氨酸的含量，建立了一種檢出限低、精密度高、回收率高的分析方法。線性范圍為0.02—14.0μg/mL，檢出限為9.2ng，回收率為98.8%—103.5%。該方法簡單快速，靈敏度高，適用于樣品數目較多的定量分析。

直接水解；豬肉；色氨酸

色氨酸Tryptophan，(L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸)，在動物體內直接參與血漿蛋白質的更新，可促使核黃素發揮作用，有助于煙酸及血紅素的合成，能顯著增加懷孕動物胎仔體內抗體，對泌乳期的乳牛和母豬有促進泌乳作用。當畜禽缺乏色氨酸時，生長停滯，體重下降，脂肪積累降低，種公畜睪丸萎縮。色氨酸是一種重要的營養劑，是人類必需的氨基酸之一。它在人體內不能合成，必須由食物供給。色氨酸含量不足時，影響免疫球蛋白的合成，降低免疫功能，還會導致胰島素分泌降低，所以色氨酸測定是評價食品營養的重要依據[1]。

目前，色氨酸的測定方法主要有比色法、熒光強度測定法、反相高效液相色譜法、氣相色譜法和氨基酸分析法[2]。在氨基酸分析時，樣品前處理如果采用鹽酸水解法會使色氨酸全部被破壞掉；如果采用堿水解法即用淀粉為保護劑，氫氧化鈉溶液作堿水解處理，這種方法回收率低，數據精密度差。本文采用直接水解紫外光譜法測定豬肉中的色氨酸，方法簡單，易操作，數據重復性好，做了回收率、精密度試驗，測定結果與其他方法比對，結果滿意。

1　材料與方法

1.1樣品采集

新鮮豬肉(里脊肉)，主要采集大三元豬肉3個樣品、江口蘿卜豬肉6個樣品、特種野豬肉6個樣品。

1.2實驗試劑

硫酸溶液(21.2mol/L)：將576mL 98%的濃硫酸慢慢倒入300mL水中，冷卻后定容至1L；對二甲氨基苯甲醛—硫酸溶液(10mg/mL)：稱取2.5g對二甲氨基苯甲醛，用21.2mol/L硫酸溶液溶解定容至250mL；0.2%亞硝酸鈉溶液；10% KOH溶液；色氨酸標準儲備液(0.1mg/mL)：準確稱取0.010 0g L-色氨酸對照品，用少量10% KOH溶液溶解，用水定容至100mL。

1.3實驗儀器

瓦里安CRAY 100紫外分光光度計；DFD-700恒溫水浴箱。

1.4標準曲線的繪制及反應機理

分別向6支10mL試管中準確加入色氨酸儲備液(0.1mg/mL)0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL(相當于加入色氨酸0，20，40，60，80，100μg)；再分別加水1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0mL，加入10% KOH 1.0mL，冷水浴，加入5.0mL對二甲氨基苯甲醛—硫酸溶液，搖勻，室溫放置30min，加入0.2mL 0.2%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置20min。在590nm處以10mm比色皿測定吸光度，空白調零，以色氨酸濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。

在酸性條件下，色氨酸與對二甲氨基苯甲醛發生縮合反應：

希夫堿對二甲氨基苯甲醛縮色氨酸為藍色，在590nm有最大吸收，吸光度與色氨酸濃度成正比。

1.5豬肉樣品的檢測

取新鮮豬肉(里脊肉)，碎肉機粉碎，取0.25g(準確稱量0.000 1g)于50mL比塞管中，加入25mL 10%KOH，37.5℃水解18h，冷卻，用水定容到50mL，中速定量濾紙過濾,取續濾液2.0mL，加冷水浴，加入對二甲氨基苯甲醛硫酸溶液5.0mL，搖勻，室溫放置30min，加入0.2mL 0.2%亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置20min，于590nm處測定吸光度。