高效液相色譜法對PHEMA液體栓塞材料中單體殘留的超痕量分析

朱肖杰，朱小敏，馬麗霞，王傳棟，夏毅然，孟建文

(山東省藥學科學院，山東省醫用高分子材料重點實驗室，濟南 250101)

1 引 言

介入栓塞術是介入治療中的一項重要技術，它是將栓塞材料有控制的注入到病變器官的供血血管內或病變血管內，使之發生閉塞，中斷血供，以達到控制出血，控制血管性病變，治療腫瘤，消除病變器官功能的目的。PHEMA液體栓塞材料是一種新型的血管內非粘附性液體栓塞材料，由聚合物和顯影劑溶于乙醇水溶液配制而成，其栓塞原理與Onyx栓塞材料類似[1-2]，但卻避免了二甲亞礬的毒性[3]。

PHEMA液體栓塞材料屬于三類植入醫療器械，用于病變部位的血管栓塞，對材料的安全性要求較高，其參與聚合的主要單體為甲基丙烯酸-β-羥乙酯，對殘留單體的控制是保證材料安全性的關鍵環節，因此，建立共聚物中殘留單體的檢測方法是非常必要的。目前的文獻報道中，對丙烯酸類[4-6]和甲基丙烯酸甲酯[7-8]含量的檢測多采用氣相色譜法，因丙烯酸和甲基丙烯酸類沸點多在150℃以下，而甲基丙烯酸-β-羥乙酯沸點為205～208℃，不適合氣相色譜法。高效液相色譜法對超痕量甲基丙烯酸-β-羥乙酯單體進行定量分析，國內外未見公開報道。本研究主要建立了高效液相色譜法對殘留單體甲基丙烯酸-β-羥乙酯的檢測方法，并對線性方程進行了驗證。

2 實驗部分

2.1 主要原料及試劑

自制聚合物PHEMA；乙腈，天津賽孚瑞科技有限公司；甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準品，上海士鋒生物科技有限公司。

2.2 實驗儀器

Waters515型高效液相色譜儀，配Waters 2489紫外/可見檢測器；DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器，鞏義市予華儀器有限公司；電子天平，d=0.1 mg，賽多利斯科學儀器有限公司；101FXB-2型電熱鼓風干燥箱，上海樹立儀器儀表有限公司。

2.3 色譜條件

色譜柱：AichromBond-1 C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)；流動相：乙腈-水(30∶70)；流速：1.0 ml/min；檢測波長：220 nm；進樣量：20 μL

2.4 試驗方法

2.4.1甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準儲備液 準確稱取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準品0.0100 g于250 ml燒杯中，加入150 ml去離子水攪拌溶解，之后用1 000 ml容量瓶定容，得0.01 g/L的儲備液，備用。

2.4.2供試品溶液的制備 取聚合物PHEMA 0.2 g，分別加入20 ml去離子水，于37℃水浴中恒溫浸提，浸提時間為24 h，連續浸提三次，取浸提液過濾并檢測，取三次數值之和做為單體的殘留量。

2.4.3測定方法 取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準溶液及供試品溶液20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，外標法計算含量。

3 結果與討論

3.1 標準曲線測定

取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準儲備液，用去離子水稀釋并分別配制0.1、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mg/L的HEMA標準溶液，在2.3項色譜條件下進行分析，以標準溶液的濃度為橫坐標(x)，峰面積為縱坐標(y)作線性回歸分析[9]，得線性回歸曲線見圖1，線性回歸方程為：y=41622x+6877，R2=0.9992，由此可見，單體甲基丙烯酸-β-羥乙酯在質量濃度為0.1～4.0 mg/L的范圍內線性良好。

圖1 峰面積對單體濃度的關系

3.2 檢測限測定

取甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準儲備液，依次稀釋并測定，以3倍信噪比的計算方法得檢測下限為0.01 mg/L。

3.3 精密度試驗

取2.0 mg/L濃度的甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準溶液，按照2.3項下的色譜條件連續進樣5次，測得峰面積RSD為1.07%，精密度良好。

3.4 回收率試驗

已知含量分別為0.41、1.56、3.07 mg/L 的供試品，各取3份，并分別加入相當于最終濃度的0.5、2.0、4.0 mg/L的甲基丙烯酸-β-羥乙酯標準液，將9份樣品按照2.3項下的色譜條件進樣分析，得平均加標回收率(%)和RSD(%)見表1，計算得加標回收率為99.5%～102.0%，RSD≤2%。

表1 殘留單體的加標回收率

3.5 樣品中甲基丙烯酸-β-羥乙酯殘留量的測定

按照2.4方法對PHEMA聚合物進行處理并浸提，浸提液過濾并按2.3色譜條件進行分析，按照外標法以峰面積對單體濃度計算，三個批次的樣品測得的峰面積和單體濃度見表2。由表2可以看出，三個批次浸提液測得的殘留單體之和分別為0.4443、0.4589、0.4413 mg/L，計算得聚合物中的單體含量為4.443×10-3%，4.589×10-3%，4.413×10-3%。圖2為1號樣品第一次浸提液的液相色譜圖。

表2 樣品單體殘留量

圖2 樣品浸提液的色譜圖

4 結論

本研究建立了一種對PHEMA液體栓塞材料中單體殘留的超痕量分析方法，檢測下限可達0.01 mg/L，精密度相對標準偏差為1.07%，回收率在99.5%～102.0%之間，回收率相對標準偏差RSD≤2%，單體濃度在0.1～4.0 mg/L的范圍內，與峰面積成良好的線性關系。本方法具有檢測限低，操作簡單，靈敏度高等特點。