獼猴桃籽油對黃褐斑小鼠的作用及機制研究

羅 禹，方志強，楊 楠，熊鐵一

獼猴桃籽油對黃褐斑小鼠的作用及機制研究

羅 禹1，3，方志強1，2，楊 楠1，2，熊鐵一1，2

（1.四川省生物資源保護與可持續利用實驗室四川 成都610015；2.四川省自然資源科學研究院四川 成都610015；3.四川愛眾生物醫藥科技有限公司四川 成都610041 ）

目的：研究獼猴桃籽油對黃褐斑小鼠模型的黃褐斑的淡化作用，探討其可能的機制。方法：采用肌肉注射黃體酮構造黃褐斑小鼠模型，動物皮膚局部外涂藥物， 連續30天。測定小鼠肝臟和皮膚組織的酪氨酸酶、MDA、NO含量，SOD活性。結果：與模型組相比，獼猴桃籽油各劑量組小鼠的肝臟和皮膚組織酪氨酸酶、MDA、NO含量降低，SOD活力升高。絕大多數大劑量組的差異有統計學意義（P＜0.05）。結論：獼猴桃籽油在小鼠體內有較強的抗氧化活性，具有淡化黃褐斑的功效。

獼猴桃籽油；黃褐斑；黑色素；抗氧化；祛斑

黃褐斑是一種面部出現局限性色素沉著的皮膚病，中醫稱黧黑斑、肝斑，好發于中青年女性。研究者多認為肝、脾、腎功能失調是黃褐斑發生的核心病機［1-2］。氧化與抗氧化失衡是黑色素沉著產生黃褐斑的重要原因，皮膚氧自由基與黑色素的形成及沉著密切相關［3］。

獼猴桃籽中油脂含量達20%以上，獼猴桃籽油是一種多烯酸油，α-亞麻酸和亞油酸含量很高，α-亞麻酸的含量可達60%以上［4］。文獻表明α-亞麻酸、亞油酸、油酸等均有抑制黑色素生成和淡化黃褐斑的作用［5］。α-亞麻酸等多不飽和脂肪酸的護膚品是目前化妝品市場的發展趨勢［6］。國家食品藥品監督管理總局2014年第11號通告將獼猴桃籽油列入《已使用化妝品原料名稱目錄》中。本研究組所開發的奇異密碼牌獼猴桃籽祛斑油已獲國產特殊化妝品行行政許可批件（國妝特字G20152433，祛斑類）。獼猴桃籽油在民間早已作為祛斑產品流傳應用，但對獼猴桃籽油祛斑作用的機制研究目前還未見文獻報道。本研究組建立了黃褐斑小鼠模型，研究獼猴桃籽油對黃褐斑的淡化作用，并探討其可能的機制。

1　實驗材料

1.1試驗藥物：獼猴桃籽油自制，制備方法如下：干燥獼猴桃籽（產自都江堰）粉碎至20目；超臨界二氧化碳萃取，萃取工藝參數為萃取溫度40℃、萃取壓力28MPa、萃取時間240min，分離釜壓力8MPa、溫度30℃；萃取所得植物油靜置18h，減壓抽濾，得成品油［7］。2%氫醌乳膏，廣東人人康藥業有限公司。

1.2動物：昆明種小鼠，四川省中醫藥科學院實驗動物中心提供，SPF級，生產許可證號：SYXK（川）2015-19號。動物使用許可證號SYXK（川）2015-100號。

1.3試劑：黃體酮注射液，20mg/ml，浙江仙琚制藥股份有限公司，使用前用滅菌注射用水稀釋至所需濃度。超氧化物歧化酶（ SOD）、丙二醛（ MDA）、一氧化氮（ NO） 試劑盒，南京建成生物工程公司。小鼠酪氨酸酶試劑盒，武漢基因美生物科技有限公司。

1.4儀器：721型分光光度計，上海精密儀器廠。恒溫水浴鍋，上海躍進醫療器械廠。TGL-18高速離心機，上海安亭。FSH-Ⅱ型高速電動勻漿器（江蘇金壇金城國勝實驗儀器廠）。Mettler Toledo型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

2　實驗方法

2.1實驗模型制備：參照文獻［8-9］的動物模型制作法。小鼠2.5%戊巴比妥鈉麻醉后，以0.4%的黃體酮注射液按0.02g/ kg劑量小鼠后肢肌肉注射，每周6次，連續4周。

2.2動物分組及實驗方法：參照文獻［9］方法。隨機選取健康小鼠10只為空白對照組。取造模成功的小鼠50只，背部中央皮膚脫毛（裸露面積約2cm×2cm，每周脫毛一次），隨機分為模型組、2%氫醌陽性對照組（0.4g/只）、獼猴桃籽油大、中、小3個劑量組（0.4、0.2、0.1g/只，劑量大小根據預實驗而定），每組10只。獼猴桃籽油3個劑量實驗組分別在小鼠造模當日皮膚局部涂抹， 每日2次， 每周6次， 連續涂抹30d。正常組和模型組于相應時間給予蒸餾水局部涂抹；3%氫醌陽性藥對照組于造模當日開始局部涂抹，時間和療程同獼猴桃籽油實驗組。

2.3觀察指標及檢測：末次涂抹1h后，背部脫毛，處死各組小鼠，取肝臟、背部脫毛處全層皮膚組織各0.5g于冰浴加生理鹽水制成10%組織勻漿，勻漿液以3000r/min室溫下離心10min，取上清液按酪氨酸酶、SOD、MDA、NO試劑盒說明書方法和操作要求進行測定和計算活性或含量。

3　結果

獼猴桃籽油對小鼠皮膚和肝臟組織酪氨酸酶、MDA、SOD和NO的影響分別見表1～4。空白組和模型對照組各指標有顯著差別，說明本試驗建模成功。在涂抹獼猴桃籽油后，與模型組相比，大、中、小三個劑量組的小鼠皮膚和肝臟組織的酪氨酸酶、MDA和NO含量均有一定程度的降低，SOD活性有一定程度的升高。其中皮膚組織三個劑量組和肝臟組織的大劑量組的酪氨酸酶含量與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。皮膚組織和肝臟組織的大劑量組的MDA含量與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。肝臟組織的大劑量組的SOD活性與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。皮膚組織和肝臟組織的大劑量組的NO含量與模型組相比具有顯著性差異（P＜0.05）。

表1　獼猴桃籽油對小鼠皮膚和肝臟組織酪氨酸酶含量的影響 （μg/100mg）

表2　獼猴桃籽油對小鼠皮膚和肝臟組織MDA含量的影響（nmol/mg.pro）

表3　獼猴桃籽油對小鼠皮膚和肝臟組織SOD活性的影響（U/mg.port）

4　討論

黑色素的合成必須有3種物質參與［10］：①酪氨酸為制造黑色素的主要原料；②酪氨酸酶是酪氨酸轉變為黑色素的主要限速酶；③酪氨酸在酪氨酸酶的作用下產生黑色素，此過程為氧化過程［11］。氧自由基與皮膚黑色素的形成及色素沉著密切相關。MDA 可導致蛋白質分子發生交聯，形成熒光發色團即色素。SOD能有效清除自由基［12］，還有抑制酪氨酸酶的活性，降低色素沉著的作用［13］。NO作為一種極為重要的信號分子與黑素細胞功能調節中有重要作用，NO供體可以促進黑色素合成以及增強酪氨酸酶的活性，是黑色素合成的強效激活因子［14］。也有研究提示對黃褐斑的作用可能還有通過不依賴抗氧化能力的其他機制來實現［15］。

對照藥品氫醌治療色素性疾病的藥理作用是阻斷酪氨酸酶催化酪氨酸轉變成二羥基苯丙酸的過程，從而控制黑色素的生物合成。通過我們的研究可以看出，獼猴桃籽油同樣可以降低黃褐斑小鼠模型酪氨酸酶、MDA和NO含量，提升SOD含量，從而達到抑制黑色素生成的作用。人體健康的膚色是黑色素合成與代謝平衡的結果。當黑色素生成受到抑制，但是黑色素的降解與破壞依然進行，其結果就是皮膚色斑變淡或消失，從而達到祛斑效果。

表4　獼猴桃籽油對小鼠皮膚和肝臟組織NO含量的影響（μmol/L）

［1］葉世龍.黃褐斑病因病機研究［J］.中華中醫藥雜志，2014，12（29）:3806-3808.

［2］康金森，王雪飛，劉發，等.紅玉祛斑膠囊對黃褐斑模型小鼠的影響［J］.2013，29（4）:134-136.

［3］王揮，馮菲，李忠海，等［J］.湘西香醋體內抗氧化及其淡化黃褐斑作用的研究［J］.2014，3（14）:30-33.

［4］李加興，吳越，陳選.多烯酸植物油及其保健功效研究進展［J］.食品科學，2014，21（35）:350-354.

［5］張汝芝，朱文元.皮膚脫色劑的研究進展［J］.臨床皮膚科雜志，2006，35（4）:264-266.

［6］吳俏槿，杜冰，蔡尤林，等.α-亞麻酸的生理功能及開發研究進展［J］.食品工業科技，2016，10:386-390.

［7］熊鐵一，羅禹.獼猴桃籽油的提取、成分和增強免疫功能的研究［J］.中國醫藥指南，2014，12（20）:96-98.

［8］過偉峰，徐立，項曉人，等.建立小鼠黃褐斑的實驗動物模型的初步研究［J］.中國中醫基礎醫學雜志，2001，7（2）: 49-51.

［9］馮小菁，吳秋麗，付雷，等.祛斑養顏霜治療黃褐斑的實驗研究［J］.中國中醫藥科技，2010，17（4）:298-299.

［10］Taylor SC.Skin of color: biology，structure，function，and implications for dermatologic disease［J］.J Am Acad Dermatol，2002，46（S）:41-62.

［11］王白強.皮膚黑素成因分析與美白祛斑功效評價體系的研究［J］.化學工程與裝備，2008，2:14-18.

［12］汪磊，溫成榮，王玉娥，等.油菜花粉酶解肽抗輻射損傷的研究［J］.營養學報，2010，32（1）:72-74.

［13］張其亮，文海泉，肖嶸.川芎嗪及兒茶素治療色素沉著機理初探［J］.中華醫學美容雜志，1995，1（1）:17-19.

［14］程基焱，鐘桂書，韓藝，等.人參二醇組皂苷及人參皂苷Rb1對體外培養黑色素細胞的影響［J］.時珍國醫國藥，2006，17（10）: 1916-1917.

［15］呂高虹，許惠琴，沈培亮，等.消癥丸對小鼠黃褐斑模型的作用及機制［J］.中國實驗方劑學雜志，2014，22（20）:157-160.

編輯/張惠娟

版權轉讓聲明

凡向本刊所投稿件，全體作者需在收到編輯部發出的稿件回執時簽署《論文投送介紹信》，將該論文的復制權、發行權、印刷版和電子版的世界范圍內轉讓給本刊。本刊已加入《中國學術期刊綜合評價數據庫》，被《中國期刊網》和《中國學術期刊（光盤版）》全文收錄。凡被本刊錄用的稿件將同時通過因特網進行網絡出版或提供信息服務，稿件一經刊用，將一次性支付作者著作權使用報酬（包括印刷版、光盤版和網絡版各種使用方式的報酬），并贈送當期雜志兩冊。

本刊編輯部

Study on the effect and mechanism of kiwi fruit seed oil treating on the chloasma mice

LUO Yu1，3，FANG Zhi-qiang1，2，YANG Nan1，2， XIONG Tie-yi1，2
（1.Sichuan Province Laboratory for Natural Resources Protection and Sustainable Utilization， Chengdu 610015， Sichuan，China；2.Sichuan Nature Resources Science Academy， Chengdu 610015， Sichuan，China； 3.Sichuan AiZhong Bio-pharmaceutical Technology Co.， Ltd. Chengdu 610041， Sichuan，China）

ObjectiveTo study the mechanism of chloasma treated with kiwi seed oil.MethodsMice model of chloasma were established by injecting progesterone into muscle. The kiwi seed oil were smeared on the depilated skin of the mice for 30 days and the variation of the tyrosine oxidase，MDA，NO and SOD in the liver and skin were measured.ResultsCompared with the model group，tyrosine oxidase，MDA and NO in the liver and skin of three dose groups have reduce and activity of SOD have increased. The variation of most of the large dose groups have statistical signification.ConclusionThe kiwi seed oil have the antioxidant activity in the mice body and then dissolve the chloasma.

kiwi seed oil；chloasma；melanin；antioxidant；removing spot

R758.4+2

A

1008-6455（2016）09-0078-03

2016-05-27

2016-08-25

四川省科技支撐項目（2013GZXO161-6）；樂山市重點科技計劃項目（13SXP121）

熊鐵一，男，研究員，所長；E-mail:xiongtieyi@163.com

羅禹，男，博士，主要研究方向為天然產物化學成分及其藥理