ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因引起的高血漿甘油三酯對彈力蛋白酶誘導(dǎo)的LDLR-/-小鼠腹主動脈瘤的影響*

陳　聰，　魚毛毛，　曹旖旎，　王云霞，　王　超，　劉國慶，　祁　榮

(北京大學(xué)心血管研究所，分子心血管學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100191)

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ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因引起的高血漿甘油三酯對彈力蛋白酶誘導(dǎo)的LDLR-/-小鼠腹主動脈瘤的影響*

陳聰，魚毛毛，曹旖旎，王云霞，王超，劉國慶，祁榮△

(北京大學(xué)心血管研究所，分子心血管學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100191)

目的： 研究載脂蛋白CⅢ(ApoCⅢ)轉(zhuǎn)基因引起的高血漿甘油三酯(TG)對腹主動脈瘤發(fā)生發(fā)展的影響。方法：以LDLR-/-和ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠喂飼高脂飼料，分別造成高膽固醇血癥和高膽固醇合并高甘油三酯血癥模型；采用彈力蛋白酶法在2種基因型小鼠上誘導(dǎo)建立腹主動脈瘤模型；以動脈瘤發(fā)生率、動脈瘤直徑、主動脈彈力板降解情況及血管基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)等為指標(biāo)，比較LDLR-/-和ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠分別在普通飼料和高脂飼料喂飼條件下，腹主動脈瘤的發(fā)生和發(fā)展情況；采用TNF-α誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)建立動脈瘤體外微環(huán)境模型，研究來自具有正常含量ApoCⅢ 或高含量ApoCⅢ小鼠 的富含甘油三酯的脂蛋白(TRLs)對彈力蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：高脂飼料加重了LDLR-/-小鼠的腹主動脈瘤程度；高脂飼料喂飼的ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠腹主動脈瘤輕于高脂喂飼的LDLR-/-小鼠；在體外，TRLs具有抑制TNF-α誘導(dǎo)的VSMC彈力蛋白酶降解的作用，且來自高含量ApoCⅢ 小鼠的TRLs對彈力蛋白降解的抑制作用更為顯著。結(jié)論：ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因引起的高血漿甘油三酯能減輕彈力蛋白酶誘導(dǎo)的LDLR-/-小鼠的腹主動脈瘤，該作用可能與ApoCⅢ基因及其導(dǎo)致的高血漿甘油三酯有關(guān)。

腹主動脈瘤； 載脂蛋白CⅢ； 甘油三酯； 富含甘油三酯的脂蛋白； 血管平滑肌細(xì)胞

腹主動脈瘤(abdominalaorticaneurysm，AAA)是一種常見的心血管疾病，并被證明具有一定的遺傳可能性[1-3]。人群基因組調(diào)查結(jié)果顯示，低密度脂蛋白受體(low-densitylipoproteinreceptor，LDLR)突變與AAA具有密切關(guān)系[1,4]。LDLR缺失導(dǎo)致血液中總膽固醇(totalcholesterol，TC)清除障礙從而引起高膽固醇血癥，對AAA具有加重作用[5]。Hobbs等[6]進(jìn)行臨床研究發(fā)現(xiàn)低密度脂蛋白膽固醇(low-densitylipoproteincholesterol，LDL-C)可能通過刺激炎癥反應(yīng)導(dǎo)致基質(zhì)降解，促使AAA的發(fā)生和發(fā)展。

載脂蛋白CⅢ(apolipoproteinCⅢ，ApoCⅢ)高表達(dá)可抑制脂蛋白脂酶的活性及肝臟對富含甘油三酯的脂蛋白(triglyceride-richlipoproteins，TRLs)殘體的攝取，導(dǎo)致高甘油三酯(triglyceride，TG)血癥[7]。已有的研究表明ApoCⅢ 基因突變可減小心血管疾病的發(fā)生風(fēng)險[8]。但ApoCⅢ和血漿甘油三酯水平與心血管疾病的相互關(guān)系還有待進(jìn)一步深入研究[7]。目前還沒有ApoCⅢ基因與AAA相關(guān)性方面的研究報道。而血漿甘油三酯水平與AAA的相關(guān)性研究尚少，且主要為臨床病例分析，其結(jié)果也仍存在一定爭議。1998年，Watt等[9]通過臨床數(shù)據(jù)分析得出高甘油三酯是動脈瘤破裂的重要危險因素；2007年，也有臨床研究顯示AAA患者血漿甘油三酯水平升高[10]。而Golledge等[11]2010年的調(diào)查研究表明血漿甘油三酯水平與AAA的發(fā)生無相關(guān)性。因此，研究并明確ApoCⅢ基因及其引起的高甘油三酯血癥對AAA發(fā)生發(fā)展的影響將對明確AAA的發(fā)病及臨床治療具有重要意義。

本研究以LDLR缺陷(LDLR-/-)小鼠和ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因LDLR敲除(ApoCⅢ+LDLR-/-)小鼠為模型，采用高脂飼料分別誘導(dǎo)2種基因型小鼠的高膽固醇血癥和高膽固醇合并高甘油三酯血癥；采用彈力蛋白酶法誘導(dǎo)構(gòu)建小鼠AAA模型，研究比較普通飼料和高脂飼料喂飼下2種基因型小鼠AAA的發(fā)病程度，明確ApoCⅢ基因及其導(dǎo)致的高甘油三酯血癥與AAA發(fā)病的關(guān)系。我們選擇ApoCⅢ+LDLR-/-雙基因型小鼠作為研究對象的原因，一是ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因小鼠隨著拷貝數(shù)的增加，血漿甘油三酯水平有所下降(平均水平約1 000mg/dL左右)，而ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的血漿甘油三酯水平在普通飼料下即可達(dá)到2 000mg/dL以上，血漿甘油三酯水平更高，更有利于研究ApoCⅢ基因及甘油三酯水平對AAA發(fā)病的影響；其二，LDLR-/-背景的加入可以提高小鼠血漿膽固醇水平，可驗(yàn)證高膽固醇對AAA作用的臨床研究結(jié)果。在體外血管平滑肌細(xì)胞(vascularsmoothmusclecells,VSMC)模型上，用TNF-α刺激能夠激活VSMC處于炎癥活化的狀態(tài)[12-13]，表現(xiàn)在炎癥因子IL-6和單核細(xì)胞趨化蛋白1(monocytechemoattractantprotein-1，MCP-1)的過度表達(dá)，基質(zhì)金屬蛋白酶(matrixmetalloproteinases，MMP)-2和MMP-9的蛋白表達(dá)和活性的增加，以及促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)通路蛋白的活化等。本研究用TNF-α刺激VSMC模擬動脈瘤體外微環(huán)境，研究來自具有正常含量或高含量ApoCⅢ 小鼠的TRLs對TNF-α誘導(dǎo)的彈力蛋白降解的影響，以期區(qū)分并闡明ApoCⅢ基因及高甘油三酯對AAA的作用。

材　料　和　方　法

1動物

健康7～8周齡雄性LDLR-/-和ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠，體重20～25g，ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因和LDLR-/-小鼠均購自Jackson實(shí)驗(yàn)室。 ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因和LDLR-/-小鼠雜交、 回交及基因型鑒定，得到雙基因修飾動物模型ApoCⅢ+LDLR-/-。小鼠于北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部SPF級動物房飼養(yǎng)，室溫(25±2)℃，濕度55%±3%，明暗周期12h，每日給予潔凈飲水。

2主要試劑

TC和TG測定試劑盒購于北京中生北控生物科技公司; 豬胰彈力蛋白酶和水合氯醛購自Sigma；OCT包埋劑購自櫻花公司；rabbitanti-elastin單抗購自Abcam；mouseanti-GAPDH多抗以及HRP標(biāo)記的山羊抗兔、鼠IgG均購自SantaCruz。

3主要方法

3.1小鼠基因性鑒定小鼠出生后第 22 天，斷乳并剪取小鼠尾巴，加0.5mL組織裂解液(Tris-HCl，pH7.4;ProteaseK濃度為25g/L)置 55 ℃孵育過夜，常法抽提基因組DNA，參照J(rèn)ackson實(shí)驗(yàn)室提供的鑒定方法，采用PCR技術(shù)確定LDLR-/-和ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的基因型。

3.2彈力蛋白酶法制備小鼠AAA模型小鼠腹腔注射0.5%的水合氯醛進(jìn)行全身麻醉。仰臥固定，下腹部正中切口，逐層切開進(jìn)入腹腔，鈍性分離腎動脈水平以下髂動脈水平以上腹主動脈段約1cm。將浸有1.3U彈力蛋白酶溶液的聚乙烯海綿完全包繞游離的腹主動脈段，浸潤40min后，取出海綿，常規(guī)手術(shù)關(guān)閉腹壁切口。對照假手術(shù)組小鼠采用生理鹽水浸潤的聚乙烯海綿完全包繞游離的腹主動脈段，其它操作同手術(shù)組。

3.3實(shí)驗(yàn)分組及造模將LDLR-/-和ApoCⅢ+LDLR-/-2種基因型的小鼠在實(shí)驗(yàn)條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，測量體重，取血測定血漿TC和TG水平，根據(jù)體重、TC和TG水平將每種基因型小鼠平均分為2組，分別設(shè)定為普通飼料組和高脂飼料組。高脂飼料為含20%豬油和0.5%膽固醇的飼料。普通飼料和高脂飼料分別喂飼2周后，采用彈力蛋白酶法制備AAA模型。每種飼料下，分別設(shè)LDLR-/-小鼠的AAA對照組和模型組，ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的AAA對照組和模型組。造模后，小鼠保持原有的高脂或普通飼料喂飼，2周后取血并處死小鼠取材。

3.4血漿TC和TG的測定各組禁食12h，麻醉后眼眶采血，離心分離血漿，采用酶比色法試劑盒檢測小鼠血漿TC和TG，詳細(xì)操作方法參考說明書。

3.5AAA發(fā)病程度的評價取小鼠腹主動脈，以腹主動脈瘤發(fā)生率、腹主動脈直徑、主動脈切片的醛品紅染色病理評分及主動脈切片的MMP-9免疫組化染色等為指標(biāo)評價腹主動脈瘤的嚴(yán)重程度。

3.6MMP-9的免疫組化染色采用免疫組化法檢測血管動脈瘤部位的MMP-9的表達(dá)情況。小鼠動脈瘤血管切片采用3%H2O2封閉內(nèi)源性過氧化酶；10%正常羊血清孵育1h封閉；滴加抗MMP-9的I抗 (1∶100)；切片于4 ℃冰箱中過夜；PBS緩沖液震蕩清洗3次；滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的II抗；DAB染色；蘇木精復(fù)染；常規(guī)封片顯微鏡下觀察，棕染的細(xì)胞為MMP-9陽性細(xì)胞。

3.7體外動脈瘤微環(huán)境的建立參考文獻(xiàn)報道的方法，建立活化的VSMC用以模擬體外動脈瘤微環(huán)境。在培養(yǎng)的原代VSMC(P3～P6)中加入TNF-α100μg/L刺激激活VSMC處于炎癥活化狀態(tài)。

3.8TRLs的提取及孵育細(xì)胞(1)取ApoCⅢ+(ApoCⅢ基因過表達(dá))小鼠和甘油磷酸肌醇錨定高密度脂蛋白結(jié)合蛋白1 (glycosylphosphatidylinositol-anchoredhigh-densitylipoprotein-bindingprotein1，GPIHBP1) 敲除(GPIHBP1-/-，ApoCⅢ基因表達(dá)正常)小鼠的血液，肝素抗凝后分離血漿。(2) 100μL血漿加入超速離心管，上面緩緩加入100μL生理鹽水。(3) 在HitachiP42AT轉(zhuǎn)子中超速離心(42 000r/min，10 ℃)3h。(4) 小心吸取上層TRLs用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn),所有步驟均在無菌操作臺中進(jìn)行，防止細(xì)菌污染。 (5) 大鼠VSMC加入50mg/L(以TG含量定量)的TRLs處理48h。

3.9Westernblot檢測elastin的表達(dá)細(xì)胞孵育時間結(jié)束后提取總蛋白，BCA試劑盒測定總蛋白質(zhì)濃度，將各組蛋白質(zhì)濃度調(diào)到同一水平，置于-70 ℃凍存(低溫冰箱)。制備10%SDS;聚丙烯酰胺凝膠，樣品加熱變性后，每孔加蛋白樣品20μg電泳，半干式電轉(zhuǎn)移儀轉(zhuǎn)膜到PVDF膜;5%脫脂奶粉室溫封閉1h，單克隆I抗elastin(1∶2 000稀釋)，4 ℃過夜，洗膜，按1∶5 000加入過氧化物酶標(biāo)記的II抗2h，洗膜后加入增強(qiáng)型化學(xué)發(fā)光試劑，顯色。

4統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，采用t檢驗(yàn)或單因素方差分析(one-wayANOVA)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)　　果

1小鼠基因型鑒定結(jié)果

1.1LDLR 基因敲除小鼠PCR擴(kuò)增出170bp條帶為野生型特異性片段，350bp條帶為LDLR等位基因特異性片段。 只有170bp條帶為野生型小鼠，只有350bp小鼠為純合子LDLR敲除小鼠，同時具有170bp和350bp條帶為雜合子LDLR敲除小鼠，見圖1A。本實(shí)驗(yàn)選用PCR結(jié)果只有350bp條帶的小鼠，即純合子LDLR敲除小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因小鼠PCR擴(kuò)增出173bp大小的條帶為ApoCⅢ特征條帶，出現(xiàn)173bp條帶表示為ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因小鼠，無173bp大小的條帶為非轉(zhuǎn)入ApoCⅢ基因小鼠，見圖1B。本實(shí)驗(yàn)選用PCR結(jié)果中有173bp條帶小鼠和同時在LDLR基因型鑒定中只有350bp條帶的小鼠，即ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

2血脂水平

普通飼料喂飼時，2種基因型小鼠的TC和TG水平較喂飼前沒有明顯的變化。高脂飼料喂飼4周后，LDLR-/-小鼠TC水平增加了2倍(P<0.01)，TG水平增加了1倍(P<0.01)；ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的TC水平增加了1.36倍(P<0.01)，TG水平增加了0.4倍。2種基因型小鼠血脂水平比較，ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的TC水平是LDLR-/-小鼠的2倍(P<0.01)，TG水平是其20倍左右(P<0.01)，見圖2。

3腹主動脈瘤發(fā)生率及腹主動脈直徑變化

在2種不同飼料喂飼下，2種基因型小鼠的對照組(假手術(shù)組)動脈瘤的發(fā)生率均為零；模型組的腹主動脈與對照組相比明顯擴(kuò)大。普通飼料喂飼下造模，2種基因型小鼠的動脈瘤發(fā)病率均為80%；高脂飼料喂飼下造模，2種基因型小鼠動脈瘤發(fā)生率均達(dá)100%。LDLR-/-小鼠高脂喂飼后，動脈瘤直徑的擴(kuò)張顯著增加(P<0.05)；而ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠在普通和高脂飼料喂飼下，動脈瘤直徑?jīng)]有明顯變化；高脂喂飼的ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的動脈瘤直徑比高脂喂飼的LDLR-/-小鼠的動脈瘤直徑顯著減小(P<0.05)，見圖3。

Figure1.MultiplexPCR-basedgenotypingofmice.A: LDLRgenotyping. -/-:homozygous; +/-:heterozygous;WT:wild-type.B: ApoCⅢgenotyping.

圖1小鼠基因型鑒定PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳分析

Figure2.PlasmaTCandTGlevelsinLDLR-/-andApoCⅢ+LDLR-/-miceafterhigh-fatdiet(HFD)for4weeks.Mean±SD. n=9～14.**P<0.01 vs LDLR-/-；##P<0.01 vs 0week.

圖22種基因型小鼠高脂飲食4周的血脂變化

4醛品紅染色病理評分

動脈壁彈力蛋白的醛品紅染色結(jié)果顯示，LDLR-/-和ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的對照組小鼠動脈壁完整，未發(fā)生彈力蛋白降解情況；模型組小鼠的動脈壁彈力蛋白發(fā)生不同程度的降解。采用ImageJ對染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析，結(jié)果表明高脂喂飼下，LDLR-/-小鼠血管彈力蛋白的降解程度較普通飼料喂飼時顯著增加；ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠血管彈力蛋白的降解程度在高脂與普通飼料喂飼下沒有顯著差異,見圖4。

5動脈切片的MMP-9的表達(dá)情況

免疫組化染色結(jié)果顯示，高脂喂飼后，LDLR-/-小鼠動脈瘤血管中MMP-9的表達(dá)較普通喂飼的LDLR-/-小鼠的表達(dá)水平高，而ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠動脈瘤血管中MMP-9的表達(dá)水平均比同樣喂飼條件下的LDLR-/-小鼠的MMP-9表達(dá)低,見圖5。

6TRLs對TNF-α誘導(dǎo)的VSMC彈力蛋白表達(dá)的影響

采用100μg/LTNF-α刺激48h后，VSMC的彈力蛋白表達(dá)明顯下降，提示TNF-α誘導(dǎo)VSMC模擬動脈瘤發(fā)生微環(huán)境的體外細(xì)胞模型建立成功。分別加入ApoCⅢ+和GPIHBP1-/-小鼠來源的TRLs(含50mg/LTG)和100μg/LTNF-α共同孵育48h后，VSMC彈力蛋白表達(dá)均比單純TNF-α(未加TRLs)孵育的明顯上調(diào)，且ApoCⅢ+來源的TRLs(ApoCⅢ高含量) 孵育后，彈力蛋白表達(dá)上調(diào)顯著高于GPIHBP1-/-來源的TRLs(ApoCⅢ正常含量)，見圖6。

討　　論

從以上結(jié)果可知，與普通飼料喂飼相比，高脂飼料喂飼4周后LDLR-/-小鼠血漿總TC水平增加了2倍，TG水平增加了1倍；LDLR-/-小鼠的動脈瘤發(fā)生率，動脈瘤直徑擴(kuò)張程度，動脈彈力蛋白的降解程度及動脈瘤血管中MMP-9的表達(dá)均顯著增加，說明高脂飲食通過增加LDLR-/-小鼠的血脂水平，尤其是增加了血漿TC水平加重了AAA。這一結(jié)果驗(yàn)證了前人的研究結(jié)果，即高膽固醇與AAA發(fā)生風(fēng)險呈正相關(guān)[6]。

Figure3.AAAmorphologyinthemicefedwithchowdiet(A)andhigh-fatdiet(HFD;B),andincidence(C)andrelativemaximalabdominalaorticdiameter(D)oftheLDLR-/-andApoCⅢ+LDLR-/-mice.Mean±SD. n=5～7.*P<0.05 vs LDLR-/-micefedwithchowdiet;#P<0.05 vs LDLR-/-micefedwithHFD.

圖32種基因型小鼠由彈力蛋白酶誘導(dǎo)的動脈瘤形態(tài)

高脂飼料喂飼下，ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的動脈瘤直徑比LDLR-/-小鼠的顯著減小，說明ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因?qū)DLR-/-小鼠的AAA發(fā)病程度具有減輕作用。我們知道ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因主要是引起TRLs代謝障礙，導(dǎo)致高TG血癥。因此，ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因引起的高TG水平對AAA的抑制作用值得探討。已有的研究結(jié)果和我們的結(jié)果均表明高血漿TC是加重AAA的危險因素，但目前為止高TG血癥對AAA的影響仍存在爭議且缺乏基礎(chǔ)研究的支持。

我們對小鼠的血脂水平進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，高脂飼料下，ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠血漿TC水平是LDLR-/-小鼠的2倍；其血漿TG水平是LDLR-/-的20倍；2種基因型小鼠相比，TG水平的差異遠(yuǎn)大于TC。因此，我們推測血漿高TG水平是減輕ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠AAA的因素之一。

對ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的血脂進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，高脂喂飼后，ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠TC水平比普通飼料喂飼時增加了1.36倍。雖然高膽固醇對AAA具有加重作用，但由于ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠即便在普通飼料喂飼下，TG水平已高達(dá)2 000mg/dL。因此，在高脂和普通飼料下，ApoCⅢ+LDLR-/-小鼠的動脈瘤直徑?jīng)]有顯著差異，進(jìn)一步說明高TG水平對AAA有抑制作用。

Figure4.Aldehydefuchsinstainingandquantificationoftheelastindegradation.Mean±SD. n=5～7.*P<0.05 vs LDLR-/-micefedwithchowdiet.

圖4腹主動脈的醛品紅染色及彈力蛋白酶降解分?jǐn)?shù)

Figure5.MMP-9expressionintheabdominalaortaoftheAAAmice.

圖5AAA小鼠腹主動脈瘤部位MMP-9的表達(dá)

為進(jìn)一步探究ApoCⅢ基因本身對AAA的作用，我們在體外分別用具有正常含量和高含量的ApoCⅢ的TRL孵育血管平滑肌細(xì)胞，結(jié)果表明，TRLs可以顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的VSMC彈力蛋白酶表達(dá)量的減少，在體外進(jìn)一步證明高TG對腹主動脈瘤有減輕作用；同時，高含量ApoCⅢ的TRL對彈力蛋白酶的保護(hù)作用較正常表達(dá)ApoCⅢ基因的TRL更顯著，說明在體外，ApoCⅢ本身對AAA具有減輕作用。綜上所述， ApoCⅢ基因及其引起的高血漿TG對彈力蛋白酶誘導(dǎo)的LDLR-/-小鼠AAA的發(fā)生發(fā)展可能均起有抑制作用。雖然此前許多研究表明ApoCⅢ和高血漿甘油三酯是心血管疾病的危險因素，但沒有直接證據(jù)證明ApoCⅢ和高TG在AAA中的作用。有臨床數(shù)據(jù)研究表明[14]，當(dāng)血漿甘油三酯水平達(dá)到足夠高時(超過2.3mmol/L)反而可以降低中風(fēng)的嚴(yán)重程度，這也提示我們高甘油三酯在體內(nèi)對某些疾病可能發(fā)揮保護(hù)作用，雖然其機(jī)制還未明確。此外，我們雖然在體外證實(shí)ApoCⅢ基因本身具有獨(dú)立于TG之外的減少彈力蛋白酶降解的作用，發(fā)揮對AAA的抑制作用，但在體內(nèi)，我們還不能區(qū)分ApoCⅢ基因本身和高血漿TG對AAA的抑制作用。

因此，本實(shí)驗(yàn)得出的ApoCⅢ轉(zhuǎn)基因引起的高血漿甘油三酯對LDLR-/-小鼠AAA的減輕作用及其保護(hù)彈力蛋白在動脈瘤炎癥環(huán)境下不被降解的具體機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。

Figure6.TheeffectsofTRLsontheproteinexpressionofelastinintheVSMCactivatedbyTNF-α.Mean±SD. n=3.*P<0.05 vsblank；#P<0.05,##P<0.01 vsTNF-α；&P<0.05 vsTRLsfromthemicewithhighcontentofApoCⅢ (C3+).

圖6TRLs對TNF-α誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞彈力蛋白表達(dá)的影響

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(責(zé)任編輯： 陳妙玲， 羅森)

Effects of high plasma triglyceride caused by ApoCⅢ transgene on abdominal aortic aneurysm induced by elastase in LDLR-/-mice

CHEN Cong, YU Mao-mao, CAO Yi-ni, WANG Yun-xia, WANG Chao, LIU Guo-qing, QI Rong

(InstituteofCardiovascularSciences,KeyLaboratoryofMolecularCardiovascularSciences,MinistryofEducation,PekingUniversity,Beijing100191,China.E-mail:Ronaqi@bjmu.edu.cn)

AIM: To investigate the effects of high plasma triglyceride (TG) caused by apolipoprotein C Ⅲ (ApoCⅢ) transgene on the occurrence and development of abdominal aortic aneurysm (AAA). METHODS: The animal models of hypercholesterolemia and hypercholesterolemia combined with hypertriglyceridemia were established by feeding high-fat diet toLDLR-/-andApoCⅢ+LDLR-/-mice, respectively. AAA was induced in these mice by pancreatic elastase. By evaluating the incidence of AAA, relative maximal abdominal aortic diameter, disruption of the elastic lamellar structure and expression of matrix metalloproteinases (MMPs) in the aorta walls of the AAA, the occurrence and development of AAA were compared inLDLR-/-andApoCⅢ+LDLR-/-mice fed with either chow diet or high-fat diet. In addition, aninvitroTNF-α-induced aneurysmal microenvironment model on vascular smooth muscle cells (VSMC) was used to study the impact of triglyceride-rich lipoproteins (TRLs) from mice with normal or high contents ofApoCⅢ on elastin protein expression. RESULTS: Feeding the high-fat diet aggravated the severity of AAA in theLDLR-/-mice.ApoCⅢ+LDLR-/-mice fed with high-fat diet had less severe AAA thanLDLR-/-mice fed with high-fat diet. TRLs inhibited degradation of VSMC elastin protein induced by TNF-α, andinvitroTRLs from the mice with high content ofApoCⅢ, compared to those with normal content ofApoCⅢ, had better inhibitory effect on the degradation of elastin. CONCLUSION: High plasma TG caused byApoCⅢ transgene alleviates AAA of theLDLR-/-mice induced by elastase and high-fat diet. The effect is probably attributed to the hypertriglyceridemia caused byApoCⅢ transgene.

Abdominalaorticaneurysm;ApolipoproteinCⅢ;Triglyceride;Triglyceride-richlipoprotein;Vascularsmoothmusclecells

1000- 4718(2016)04- 0584- 07

2015- 11- 16

2015- 12- 30

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81360054)

Tel： 010-82805164； E-mail: ronaqi@bjmu.edu.cn

R543.5; R730.23

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.04.002

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