康胰湯治療急性胰腺炎大鼠模型的效果

王綏能　龍育儒　曹小恒　王　菁　趙國棟　梁賢文

(海口市人民醫院普外三科，海南　海口　570208)

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康胰湯治療急性胰腺炎大鼠模型的效果

王綏能龍育儒1曹小恒1王菁1趙國棟梁賢文

(海口市人民醫院普外三科，海南海口570208)

目的觀察康胰湯(KYT)對大鼠急性胰腺炎的治療作用。方法選用SD大鼠，經膽胰管逆行加壓注射4.5%牛磺膽酸鈉復制急性胰腺炎動物模型；化學比色法測血清淀粉酶活性；快速比濁法測血清脂肪酶活性；濕棉球減干棉球重量測腹水量，并觀察大鼠6 h存活情況；顯微鏡觀察胰腺組織病理學改變，并進行胰腺炎組織學評分。結果400 mg生藥/kg和800 mg生藥/kg的康胰湯使大鼠存活率由66.67%分別升至75.00%和91.67%；腹水量由(4.1±0.83)g分別降至(2.7±0.66)g和(2.0±0.37)g；血清淀粉酶由(450.8±81.25)U/dl分別降至(322.1±64.08)U/dl和(203.2±55.47)U/dl；血清脂肪酶由(625.6±105.24)IU分別降至(179.8±47.01)IU和(148.1±31.35)IU；與胰腺炎模型組比較均有顯著差異(P<0.05)。光鏡下可見康胰湯治療組胰腺水腫及炎性反應均明顯減輕。結論康胰湯對大鼠急性胰腺炎具有較好治療作用。

康胰湯；急性胰腺炎

急性胰腺炎(AP)的發生和發展是由各種炎癥介質、氧自由基、胰腺泡細胞內鈣超負荷等多因素共同作用的結果〔1～4〕。目前治療AP的中藥制劑不少〔5～8〕，但臨床療效顯著的不多，而且其確切作用機制也未能完全明確。康胰湯是我院使用多年治療AP的復方中藥方劑，療效非常顯著〔9〕。該方劑主要組成：柴胡、黃岑、白芍、赤芍、郁金、木香、桃仁、金錢草、金銀花、蒲公英、炒萊菔子、大黃和芒硝等，但它的作用機制也一直沒有得到闡述。本研究擬觀察康胰湯治療AP大鼠的療效。

1　材料與方法

1.1實驗動物雄性SD大鼠，體重(265±15)g，購自廣州第一軍醫大學實驗動物中心。自購買之日起飼養于溫度(25.0±3.24)℃、相對濕度為(81.5 ±5.85)%的室內條件下，光照周期光∶暗為1∶1。

1.2藥品與試劑康胰湯方劑的藥材購自海口市人民醫院藥房，常規煎制，并經旋轉蒸發儀(德國Band公司產品)濃縮至1 g生藥/ml備用，灌胃時用生理鹽水配成不同濃度，每只大鼠灌胃5 ml；4.5%牛磺膽酸鈉(Sigma公司產品)；血清淀粉酶和脂肪酶試劑盒購于南京建成生物有限公司。

1.3實驗方法

1.3.1動物分組與模型制備使用雄性SD大鼠制備實驗所需動物模型。將小鼠隨機分為假手術組、模型組(AP組)、維拉帕米1 mg/kg鼠重組、400 mg生藥/kg鼠重康胰湯組和800 mg生藥/kg鼠重康胰湯組，每組12只。康胰湯組動物每天灌胃不同劑量的康胰湯，其他組灌胃等體積生理鹽水，連續1 w。手術前大鼠禁食12 h，自由飲水，1%戊巴比妥鈉(3 ml/kg鼠重) 腹腔注射麻醉，常規消毒，參照Aho等〔10〕的方法復制大鼠AP模型：取上腹部正中切口，逐層切開腹壁進入腹腔，在近肝門處分離出胰膽管，用血管夾夾閉膽管，在十二指腸乳頭對側用4.5號注射器針頭穿透腸壁，刺入胰管，以恒定的速度(0.2 ml/min)緩慢注入牛磺膽酸鈉(按1 kg小鼠注入1.5 ml計算)，注射完后留針3 min，放開血管夾，檢查術野無出血，逐層縫合腹壁各層后。將大鼠置于通風處。假手術組同樣方法開腹，翻動胃和十二指腸后關腹，置于相同環境。

1.3.2觀察指標記錄各組大鼠6 h存活情況，并計算存活率；存活大鼠于術后6 h剖腹，用準備好的干棉球置于腹腔內將腹水吸干并稱重，隨后烤干稱重，計算腹水量；肉眼觀察各組動物胰腺組織大體標本的病理改變，同時切取胰腺組織，常規行甲醛固定、石蠟包埋制片及HE染色，在顯微鏡下觀察胰腺病理損害程度，按Schmidt方法評分〔11〕，并記錄結果。

1.3.3血清標本收集術后6 h，每組大鼠經下腔靜脈穿刺抽取血液約10 ml，并抽取血液標本置于4℃的離心機中，3 500 r/min離心15 min，分離上層血清，置于-20℃冰箱中待測。

1.3.4血清淀粉酶及血清脂肪酶檢測血清淀粉酶測定采用碘-淀粉比色法；血清脂肪酶測定采用快速比濁法，全部按照試劑盒說明書進行。

1.4統計學處理采用SPSS19.0軟件行單因素分析。

2　結　果

2.1大鼠存活情況假手術組大鼠術后6 h全部存活，AP組存活率為66.67%(8/12 只)，高劑量康胰湯治療組為91.67%(11/12只)，低劑量康胰湯治療組75.00%(9/12只)，維拉帕米組為83.33%(10/12只)。

2.2各組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶、腹水量的比較AP組大鼠血清淀粉酶、脂肪酶活性及腹水量明顯高于假手術組，康胰湯組及維拉帕米組均低于AP組(P<0.05)。見表1。

2.3胰腺標本組織學觀察

2.3.1胰腺病理形態學觀察 大體標本：除假手術組外，其余各組大鼠均可見胰腺組織水腫，表面顏色稍暗，并可見數量不等的散在出血點；腹腔內均有少量腹水，并有少數大鼠呈淡紅色血性腹水；部分大鼠胰腺表面及大網膜可見輕重一不的皂化斑。部分AP組還可見胰腺片狀壞死，并與胃、結腸等粘連，小腸壁充血水腫。顯微鏡下表現：假手術組大鼠胰腺組織腺泡及

表1　康胰湯對大鼠血清淀粉酶、脂肪酶及腹水量的影響

與假手術組比較:1)P<0.01；與維拉帕米組比較:2)P<0.05；與AP組比較:3)P<0.05；下表同

小葉結構完整，間質未見明顯異常改變，未見細胞腫脹、壞死，亦未見出血壞死及炎癥細胞浸潤；而AP組大鼠胰腺組織可見大范圍凝固性壞死，細胞腫脹明顯，結構較為模糊，不易辨認，可見部分細胞溶解壞死，間質亦有水腫，小血管壁可見壞死，伴有出血，小葉及小葉間隔亦有累及，另外，腺泡間隔內還可見到大量的中性粒細胞浸潤；維拉帕米組大鼠胰腺間質可見較多中性粒細胞浸潤，小葉內腺泡細胞存在局灶性壞死，并可見明顯出血；低劑量康胰湯組大鼠胰腺顯微鏡下表現與維拉帕米組相似；高劑量康胰湯組主要表現：胰腺間質有少許充血、水腫，伴有輕度中性粒細胞等炎性細胞浸潤，僅部分大鼠胰腺小葉內腺泡細胞有散在出血點，未見明顯壞死灶。

2.3.2胰腺組織學評分比較AP組大鼠胰腺組織炎性細胞浸潤、細胞水腫、出血及腺泡壞死評分明顯高于假手術組(P<0.01)；AP組大鼠相關指標評分均明顯高于各用藥組(P<0.05)，其中維拉帕米組及低劑量康胰湯組大鼠胰腺組織細水腫、腺泡壞死程度較高劑量康胰湯組重(P<0.05)，而高劑量康胰湯組胰腺出血評分與維拉帕米組相似，但較低劑量康胰湯組低(P<0.05)；高劑量康胰湯組大鼠胰腺組織炎性細胞浸潤程度較維拉帕米組輕(P<0.05)，且在一定范圍內，隨著康胰湯劑量的增加，大鼠胰腺組織學評分降低。見表2。

表2　各組大鼠胰腺組織學評分比較±s，n=8，分)

3　討　論

在正常情況下胰液中的胰酶無活性，只有在十二指腸內被激活后方有消化功能。在各種致病因素的作用下，各種胰酶提前在胰管或腺泡內被激活，這些具有活性的胰酶在局部對胰腺及其周圍組織產生自身消化，各種蛋白酶、脂肪酶都可導致細胞壞死，磷脂酶A可產生有細胞毒性的溶血性卵磷脂，可溶解破壞細胞膜和線粒體膜的脂蛋白結構，致細胞死亡；彈力蛋白酶可破壞血管壁和胰腺導管，使胰腺出血和壞死；脂肪酶將脂肪分解成脂肪酸后，與鈣離子結合形成脂肪酸鈣，使血鈣下降。胰液中各種酶被激活后的共同結果是胰腺和周圍組織廣泛充血、水腫，甚至出血壞死，并在腹腔和腹膜后滲出大量液體。大量胰酶及有毒物質被腹膜吸收后入血后，可導致心、腦、肝、肺、腎等器官損害，引起多器官功能障礙綜合征。胰腺小葉內動脈及其分支之間無吻合存在，屬于終末動脈，故胰腺組織對缺血非常敏感，急性胰腺炎時血流動力學發生改變，加重胰腺的血液循環障礙，可使水腫性胰腺炎向出血壞死性胰腺炎轉化。

AP患者病變輕重不等，輕者病變多局限在體尾部，胰腺腫脹變硬，充血，被膜緊張，其下可有積液，腹膜內脂肪組織特別是大網膜可見散在的皂化斑，腹水為淡黃色，預后較好；重者病變以胰腺實質出血、壞死為特征，胰腺腫脹呈暗紫色，腹腔內為血性混濁滲液，可導致全身炎癥反應綜合征及多器官功能損害，引起嚴重腹膜炎、循環呼吸衰竭、休克等。AP有死亡率高、致殘率高、住院費用高等特點。西醫治療以禁飲食、胃腸減壓、鎮痛解痙、抑制胃酸及胰液的分泌為主，存在感染征象時則需給予廣譜高效抗生素抗感染治療，同時補足血容量，維持水電解質、酸堿平衡，保持內環境穩定，并予足量的腸外營養支持，及時監測病情變化發展。內科保守治療效果不佳時，行急診手術治療。

在中醫范疇中，AP屬“脾膽痛”、“脾心痛”、“胃脘痛”、“結胸痛”，其主要病機是氣機升降失調、肝脾失和、肝失條達、脾失運化、脾胃濕熱、氣滯濕阻，蘊積于中焦而致病，根據“六腑以通為用，不通則痛”的理論，治療以舒肝解郁、健脾燥濕、清熱解毒、活血化瘀、瀉實通下為主。目前已經知道，大黃可以抑制胰液的分泌，減輕胰液中胰蛋白酶、胰淀粉酶、彈性蛋白酶對胰腺組織的損傷，并可抑制多種炎癥細胞因子及氧自由基的釋放。康胰湯可緩解腸道麻痹，促進胃腸道蠕動，加快腸道功能恢復，促進排氣排便，以減輕腹痛腹脹等癥狀，并降低腸黏膜的通透性，增加其屏障作用，防止腸內細菌異位入血，減少毒素吸收，同時減輕腹內壓，促進靜脈回流，并可使膈肌上抬得以緩解，減輕了對肺的擠壓，可明顯改善呼吸、循環系統癥狀。AP時胰腺分泌的各種胰酶提前在胰管或腺泡內激活，對胰腺及其周圍組織產生自身消化，是引起胰腺炎加重的一個重要因素，中藥康胰湯可抑制胰腺對各種胰酶的分泌，促進胰液的排泄，減少胰液滯留引起的自身消化損傷。Gong等〔12〕報道，中藥對胰腺組織的再生具有促進作用，聯合生長抑素能提高轉化生長因子和表皮生長因子的基因表達，增加DNA合成和蛋白含量，促進胰腺的修復和再生。本研究結果顯示，康胰湯可減輕胰腺組織水腫、出血壞死，減少腹腔及腹膜后滲液，降低血清淀粉酶及脂肪酶膿度，明顯降低實驗大鼠的死亡率。

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11Schmidt J，Lewandrowski K，Castillo CF.Histopathologic correlates of serum amylase activity in acute experimental pancreatitis〔J〕.Dig Dis Sci，1992；37(9)：1426-31.

12Gong Z，Yuan Y，Lou K，etal.Mechanisms of Chinese herb emodin and somatostatin analogs on pancreatitic regeneration in acute pancreatitis in rats〔J〕.Pancreas，2002；25：154-60.

〔2016-07-30修回〕

(編輯曲莉)

海南省自然科學基金項目(No：808244)

趙國棟(1978-)，男，副主任醫師，主要從事消化道腫瘤的外科治療研究。

王綏能(1964-)，男，副主任醫師，主要從事消化道腫瘤的外科治療研究。

R57

A

1005-9202(2016)15-3640-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.013

1海南省熱帶藥用植物化學重點實驗室