艾滋病患者經HAART治療前后免疫狀態比較分析

蔣洪昆　呂程　呂桂樺

(廣西壯族自治區柳州市人民醫院檢驗科，廣西 柳州　545000)

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艾滋病患者經HAART治療前后免疫狀態比較分析

蔣洪昆呂程呂桂樺

(廣西壯族自治區柳州市人民醫院檢驗科，廣西 柳州545000)

目的：檢測艾滋病患者經高效抗逆轉錄病毒治療(Highly active antiretroviral therapy，HAART)前后外周血CD4、CD8、CD3、NK、B細胞的表達情況，比較分析艾滋病患者治療前后免疫狀態。方法：采用流式細胞分析方法檢測艾滋病患者CD4、CD8、CD3、NK、B細胞的表達情況，所得數據采用SPSS13.0統計軟件處理。結果：在艾滋病患者外周血中，CD4+細胞比例、B細胞比例、CD4+/CD8+比值明顯低于正常人(P<0.01)，CD8+細胞比例、CD3+細胞比例明顯高于正常人(P<0.05)，NK細胞比例與正常人無顯著性差異。治療后CD4、 CD8、CD3絕對計數也較治療前明顯升高(P<0.05)，治療前后NK、CD4/CD8變化不明顯，治療后的B細胞百分比明顯低于治療前(P<0.05)。結論：艾滋病患者的免疫力明顯低于正常人，經HAART治療后免疫力有所升高，但仍處于較低的水平。

艾滋病；免疫狀態；HARRT

從艾滋病出現以來，國內外的學者都對艾滋病做了大量的研究，CD4細胞的數量和功能的降低是引起人體免疫功能缺陷的主要原因, 它在維持機體的細胞免疫和體液免疫中具有樞紐作用。CD4淋巴細胞計數作為直接測定免疫功能的方法是提供感染者免疫系統損害最明確的指標[1]。CD8免疫細胞在防御、感染和控制HIV復制方面起著重要的作用，它可以直接通過裂解HIV感染的細胞，也可以通過分泌一些因子來抑制HIV的復制[2]。

HAART全稱Highly active antiretroviral therapy，高效抗逆轉錄病毒治療。現在我們比較艾滋病患者經HAART治療前后的各項免疫指標變化，來監測HAART的治療效果。

1　臨床資料與方法

1.1研究對象

1.1.1住院艾滋病患者

住院的艾滋病患者共123例，男97例，女26例，年齡18-82歲，平均年齡42歲，經過免疫印跡法(Western Blot)確診為HIV感染，HIV抗體陽性，根據美國1993年修訂的HIV感染分類系統及AIDS診斷標準為C3期，平均CD4淋巴細胞計數94·μl-1。

1.1.2門診HIV感染者

HIV感染者69例，男40例，女29例，年齡20-78歲，平均年齡36歲，經過免疫印跡法(Western Blot)確診為HIV感染，HIV抗體陽性，未發病，平均CD4淋巴細胞計數280·μl-1。

1.1.3正常對照

正常健康志愿者共30例，男19例，女11例，年齡24-48歲，平均年齡36歲。

1.2方法

采用配對設計觀察33例艾滋病患者經HAART治療前后各項指標的變化情況。

用EDTA-K2抗凝的真空采血管收集外周血，48 h內完成測定。CD4、CD8絕對計數采用FACSCount 流式細胞儀極其配套試劑。每份標本收集30000個細胞。T淋巴細胞亞群的測定采用FACSCalibur流式細胞儀極其配套試劑進行檢測。

淋巴細胞亞群的測定采用FACSCalibur流式細胞儀極其配套試劑進行檢測。

1.3統計學處理

所有數據均采用SPSS13.0統計軟件處理，陽性細胞率以均數表示，采用t檢驗、方差分析、方差齊性檢驗、相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義

2　結果

2.1艾滋病患者、無癥狀HIV感染者與正常對照組淋巴細胞亞群、T細胞亞群的比較

經t檢驗，艾滋病患者與無癥狀HIV感染者CD4+細胞比例、CD4+/CD8+比值明顯低于正常人(p=0.000)；而他們兩者CD8+細胞比例明顯高于正常人(p=0.000)；艾滋病患者CD3+細胞比例明顯高于正常人(P<0.05)，但無癥狀HIV感染者CD3+細胞與正常對照無顯著性差異(P>0.05)；三者NK細胞比例無顯著性差異(P>0.05)；艾滋病患者B細胞比例明顯低于正常人(P<0.05)，但無癥狀HIV感染者B細胞與正常對照無顯著性差異(P>0.05)。艾滋病患者CD4+細胞比例、CD4/CD8、明顯低于無癥狀HIV感染者(P<0.01)；其CD8+細胞比例明顯高于無癥狀HIV感染者(P<0.01)，而兩者在CD3細胞、NK細胞、B細胞百分比上無明顯差異(P>0.05)，見表1。

表1　艾滋病患者、無癥狀HIV感染者與正常對照組比較

注：與正常對照相比，*P<0.05，**P<0.01；與無癥狀HIV感染者相比，△△P<0.01。

2.2艾滋病患者經HAART治療前后各項指標的比較

33例艾滋病患者經HAART治療3個月后，得到的數值進行配對檢驗。治療后CD4絕對計數明顯高于治療前(P=0.021)，治療后CD8絕對計數也較治療前明顯升高(P=0.000)；治療前后CD4/CD8變化不明顯(P=0.710)，治療后CD3絕對計數明顯高于治療前(P=0.000)，治療前后NK細胞變化不大(P=0.116)，B細胞則變化較大，治療后的百分比明顯低于治療前(P=0.025)，治療后CD8+CD3+百分比明顯高于治療前(P=0.001)，見表2。

表2　艾滋病患者經HAART治療前后各項指標的比較

注：與治療前相比，*P<0.05。

3　討論

艾滋病是獲得性免疫缺陷綜合征(Acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)的簡稱，1981年才被人們認識的一種新的性傳播疾病。是由人類免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus，HIV)引起的人體細胞免疫功能缺陷，導致一系列條件致病微生物感染和腫瘤發生的致命性綜合征。AIDS的發病機制尚未完全闡明，但病毒和宿主因素相互作用的復雜過程是其主要原因。AIDS的最主要的特征之一是CD4 T細胞的逐漸丟失。人體內CD4 T淋巴細胞是HIV的主要受體，在HIV直接和間接作用下，細胞大量被破壞和功能受損，導致細胞免疫缺陷。同時其他免疫細胞均不同程度受損，促進并發各種嚴重的機會性感染和腫瘤發生，導致死亡。當CD4細胞低于200個·μl-1時，逐漸出現臨床癥狀[3]。

我們對艾滋病患者、無癥狀HIV感染者、正常人做兩兩比較，CD4、CD4/CD8大大低于正常水平，而CD8則由于機體對HIV的免疫反應而升高，這說明艾滋病患者的免疫功能極其低下，國內有報道稱艾滋病患者NK細胞明顯低于健康對照組，而它與HIV感染組則無明顯差異[4]，國外也提出NK細胞在人感染HIV后數量降低[5]，并且與疾病進展相關[6,7]，我們的實驗得出艾滋病患者、HIV感染者、正常人三者NK細胞在總淋巴細胞中的百分比無明顯差異，這是由于報道的是NK細胞絕對計數而我們試驗測出的是它占總淋巴細胞的百分比，這會受到T細胞和B細胞的影響，從表1我們可以看出NK的百分比從艾滋病患者到無癥狀HIV感染者再到正常人是有上升趨勢的。無癥狀的HIV感染的免疫功能較艾滋病患者高，但仍遠遠低于正常人的水平。

對艾滋病的治療目前國內通常使用包括蛋白酶抑制劑在內的兩種或多種藥物的聯合療法被稱為高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)，可以延長病人的壽命，使病死率降低[8]。艾滋病治療的原則是早診斷、早治療。采用抗病毒、抗機會性感染、抗腫瘤及全身支持治療的綜合療法。自1990年國內治療艾滋病以來，尚無統一的治療方案和評價指標。目前比較常用方法是強效抗逆轉錄病毒治療(HAART)，通過抑制 HIV復制，重建機體免疫系統，降低AIDS的發病率和死亡率[9]。本試驗標本來源龍潭醫院所用的HAART治療方法為2個核苷類逆轉錄酶抑制劑+1個非核苷類逆轉錄酶抑制劑，核苷類逆轉錄酶抑制劑包括齊多夫定、司他夫定、拉米夫定、去羥基苷、阿吧卡韋；非核苷類逆轉錄酶抑制劑為奈韋拉平、依非韋倫；常用齊多夫定+拉米夫定+依非韋倫(奈韋拉平)，蛋白酶抑制劑因為其副作用很大，會引起脂肪異常，在臨床上不常用。

CD4 T淋巴細胞計數是艾滋病診斷、疾病分期、制定抗病毒治療和預防機會性感染方案的實驗室標準指標，CD4 T淋巴細胞計數也是與病毒載量相配合預測疾病進程的可靠指標，這兩個實驗可以相互獨立預測艾滋病臨床過程和生存期。檢測 CD4細胞數的標準方法是流式細胞儀。本試驗臨床上以CD4細胞絕對計數均<200個·μl-1并結合臨床表現為用藥標準，給予HAART治療。并以監測CD4 T淋巴細胞上升程度為觀察治療的效果的指標。

我們選取了33例患者，并觀察他們經HAART治療后免疫狀況的改變情況，治療后CD4、CD8、CD3的絕對計數較治療前都有很大升高，這個結果與其它一些作者的報道一致[10]，CD4、CD8、CD3細胞數量的回升表面了機體免疫功能的恢復，說明高效抗逆轉錄病毒治療(HAART)是治療艾滋病有效的治療方案[11,12]，能夠有效抑制HIV的復制，重建機體的免疫系統[13]。

1葉景榮,孫偉東,趙月娟,等 2006年北京市人類免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者免疫狀況分析[J]. 疾病監測, 2007, 20(9): 591-593.

2LiebeRman J, Shankar P, Manjunath N, et al. Dressed to kill a review of why antiviral CD8 T lymphocytes fail to prevent progressive immunodeficiency in HN-I infection[J]. Blood, 2001, 98(6): 1667-1677.

3孫傳正. CD4、CD8細胞與艾滋病治療免疫評價及實踐[J]. 中國中醫基礎醫學雜志, 2005, 11(8): 633-644.

4劉瑛,尚紅,張子寧,等. 自然殺傷細胞表面抗原在無癥狀人免疫缺陷病毒感染者/艾滋病患者中的表達[J]. 中華檢驗醫學雜志, 2003. 26(6): 365-367.

5Hu PF, Hultin LE, Hultin P, et al. Natural killer cell innunodeficiency in HIV disease is manifest by profoundly decreased numbers of CD16+CD56+cells and expansion of a population of CD16dimCD56-cells with low lytic activity[J]. J Acquir Immune Defic Syndr Hum Retrovirol, 1995, 10(3): 331-340.

6Sondergaare SR, Ullum H, SkinhoJ P, et al. Epinephrine-induced mobilization of natural killer(NK) cells and NK-like T cells in HIV-infected patients[J]. Cell Immunology, 1999, 197(2): 91-98.

7Ullum H, Cozzi Lepri A, Aladdin H, et al. Natural immunity and HIV disease progression[J]. AIDS, 1999, 13(5): 557-563.

8孫蕾,李倩如,楊璇,等. HAART對人類免疫缺陷病毒感染者淋巴細胞亞群的影響[J]. 現代免疫學, 2007, 27(4): 306-309.

9張景祥,徐振源,吳有煒,等. 細胞與艾滋病治療免疫評價的研究[J]. 疾病控制雜志, 2007, 8(4): 339-341.

10阮桂仁,邱志峰,李太生,等. 高效抗逆轉錄病毒治療12個月后艾滋病患者的免疫重建觀察[J]. 中華內科雜志, 2006, 45(7): 569-572.

11Panel on clinical practices of HIV infection. Guidelines for the use of antiretroviral agents in HIV-infected adults and adolescents[S]. Washington D.C: Government Printing Office, 2005.

12Severe P, Leger P, Charle M, et al. Antiretroviral therapy in a thousand patients with AIDS in Haiti[J]. N Engl J Med, 2005, 353(22): 2325-2334.

13Li TS, Tuviana R, Katlama C, et al. Long-lasting recovery in CD4+ T-cell function and viral-load reduction after highly active antiretroviral therapy in advanced HIV-1 disease[J]. Lancet, 1998, 351(6): 1682-1686.

Comparation of immune status in patients with AIDS before and after the treatment with HAART

Jiang Hong-kun, Lv Cheng, Lv Gui-hua

(Department of Clinic Laboratory, Liuzhou People’s Hospital,Guangxi Liuzhou 545000)

Objective： To investigate the changes of CD4, CD8, CD3, NK, B lymphocytes in peripheral blood of patients with AIDS, and compare the immune status in patients with AIDS before and after the treatment with highly active antiretroviral therapy (HARRT). Methods: CD4, CD8, CD3, NK, B lymphocytes in blood were detected using flow cytometry in patients with AIDS. All of the numerical data is analyzed with SPSS13.0 statistics software. Results: The percentage of CD4+, B cell and CD4+/CD8+in patients with AIDS was lower than that of healthy adults (P<0.01). The percentage of CD8+and CD3+cell was higher than that of healthy adults (P<0.05). NK cell was approached that of healthy adults. After three months treated with HAART, we collected the results and handled it with paired-samples t test. CD4, CD8, CD3 count in patients treated with HAART was significant increased than those in untreated (P<0.05), but the changes on NK, CD4/CD8 were not significantly，the percentage of B after therapy was lower than that of before (P<0.05). Conclusion: Patients with AIDS have lower immune activity than that of healthy population. After HAART therapy，the immune activity had reversed but still lower than healthy population.

AIDS; Immune Status; HARRT

蔣洪昆，女，主管技師，主要從事臨床免疫生化檢驗，Email：JHK_MAO@163.com。

2016-3-25)