EZH2在乳腺癌中的表達及與患者臨床病例特征關系

沙聰 楊峻峰 胡偉 周東智

江蘇南通瑞慈醫院普外科 南通 226000

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EZH2在乳腺癌中的表達及與患者臨床病例特征關系

沙聰 楊峻峰 胡偉 周東智

江蘇南通瑞慈醫院普外科 南通 226000

目的 探討組蛋白甲基轉移酶EZH2在人乳腺癌組織中的表達及與患者臨床病例特征和預后的關系。方法 選取2011-01-2015-02間南通瑞慈醫院普外科手術治療的乳腺癌患者88例和同期手術切除的良性乳腺病變24例患者為研究對象。采用免疫組織化學法檢測乳腺癌組織和良性病變組織中EZH2蛋白的表達水平，并分析其與患者臨床病理學特征及生存期關系。結果 EZH2主要表達于腫瘤細胞核呈棕黃色顆粒。乳腺癌組織中EZH2陽性表達率為56.8%(50/88)，良性病變中表達率為20.8%(5/24)，兩者差異有統計學意義(P<0.05)。乳腺癌患者EZH2陽性表達與腫瘤大小(P<0.05)和淋巴結轉移(P<0.05)有關。Kaplan-Meier生存分析顯示，EZH2陽性和陰性乳腺癌患者3 a無疾病進展生存率分別68.5%和84.1%，陰性患者高于陽性患者(P<0.05)。結論 EZH2在乳腺癌中表達高于乳腺良性病變組織，且陽性表達乳腺癌患者預后較差。

EZH2；乳腺癌；免疫組化；臨床病理特征；生存期

EZH2基因定位于人7染色體3帶5區，為多梳蛋白復合體PcG (Polycomb group)家族重要成員之一[1]。分子生物學研究顯示，EZH2蛋白是組蛋白甲基化重要的工具酶，能夠催化H3K27(組蛋白H3賴氨酸27位)甲基化，促進多個癌基因的表達[2]。EZH2在肺癌[3]、結直腸癌[4]和胃癌等多種實體腫瘤組織中呈現高表達并與患者預后存在一定的關系。我們通過免疫組織化學方法檢測乳腺癌組織和乳腺良性病變組織中EZH2的表達，探討其在乳腺癌發生中的作用及與患者預后和臨床病理參數的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011-01—2015-02間我科手術治療的乳腺癌患者88例和同期手術切除的良性病變24例作為研究對象。入選標準：標本經病理學確診為乳腺癌或良性乳腺病變者。術前未接受過新輔助放化療及生物治療。有完整的術后隨訪時間及生存時間數據。組織標本獲取經家屬簽署知情同意書。排除標準：術前接受過放化療或生物治療者。合并其他惡性腫瘤者。術后無隨訪數據者。乳腺癌患者中位年齡51歲(26～79歲)，良性乳腺病變患者中位年齡38歲(22～76歲)，本組患者全部為女性。

1.2 EZH2蛋白表達檢測方法 將組織標本切成5um左右的石蠟切片，然后對切片進行脫蠟水化，置于二甲苯中浸泡10 min，無水乙醇浸泡5 min，然后將切片置于3% H2O2中，避光孵育15 min，進行滅活內源性過氧化物酶。然后進行組織抗原修復，將切片放入加有0.01% mol/L枸櫞酸鈉的水浴鍋中至95 ℃，15 min。用100 μl 含10%的正常血清將滴在組織處，孵育1 h進行封閉。加入一抗，4℃ 孵育過夜。然后加入二抗，室溫孵育1 h。然后對切片進行顯色。封片，干燥后顯微鏡先觀察拍照，觀察表達水平。

1.3 陽性結果判定[5]每張切片選取5個視野，計數每個視野中細胞總數及EZH2陽性的細胞數。染色強強度：不著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分。陽性細胞所占的百分比：無著色為0分，陽性細胞上<25%為1分，陽性 25%～50%為2分，陽性細胞上>50%為3分，兩種積分相乘，>3分為陽性。

1.4 隨訪 患者通過定期住院、門診復查或電話方式進行隨訪，將手術結束日期作為隨訪開始時間。隨訪結束時間為2015年2月。隨訪期間記錄患者疾病進展或死亡事件發生的時間。

1.5 統計學方法 所有統計分析采用SPSS17.0軟件完成，計量資料采用表示，組間比較采用t檢驗，計數資料采用率表示，組間比較采用χ2檢驗或者Fisher精確檢驗。生存分析采用Kaplan-Meier風險比例模型Log-rank 檢驗。P<0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 EZH2在乳腺癌及良性乳腺組織中的表達 EZH2蛋白主要表達于細胞核，呈現棕黃色顆粒(圖1)。乳腺癌組織中EZH2陽性表達率為56.8%(50/88)，良性病變中表達率為20.8%(5/24)，兩者比較P<0.05。

(A:陰性；B:弱陽性；C：中度表達；D：強陽性)

2.2 EZH2表達與乳腺癌患者臨床病理特征關系 乳腺癌患者EZH2陽性表達與腫瘤大小(P<0.05)和淋巴結轉移(P<0.05)有關，而與患者年齡(P>0.05)、月經狀態(P>0.05)、組織類型(P>0.05)及臨床分期無關(P>0.05)，見表1。

表1 EGFR蛋白表達與乳腺癌臨床病理特征之間的相關性

2.3 EGFR蛋白與患者預后 Kaplan-Meier生存分析顯示，EZH2陽性和陰性乳腺癌患者3 a無疾病進展生存率分別為68.5%和84.1%，陰性患者高于陽性患者(P<0.05)，圖2。

圖2 2組患者生存曲線

3 討論

乳腺癌(breast cancer)是女性發病率最高的惡性腫瘤，并且隨著年齡的增加發病率呈現上升趨勢[6]。近年來由于我國婦女普遍生育年齡較晚，且生育數量較少，同時由于不恰當的應用激素等，乳腺癌的發病年齡呈現年輕化趨勢。來自美國的流行病學研究顯示，乳腺癌在女性實體腫瘤中發病率為第一位，病死率為第二位，乳腺癌占到女性所有實體腫瘤的23%左右[7]。

乳腺癌的發病確切機制不詳，近年來的研究顯示[8]，乳腺癌組織中存在多個癌基因的激活過度表達與抑癌基因的失活有關。這種癌基因與抑癌基因的表達平衡紊亂可能在乳腺癌的發生發展中發揮了重要作用。

EZH2是由Hobert等采用酵母雙雜交系統方法發現的一個新基因，是一個典型的癌基因。該基因編碼的蛋白能夠與其他蛋白構成多梳蛋白復合體PcG。該復合體具有組蛋白修飾活性，能夠使組蛋白H3K27和或H3K9發生甲基化，進而沉默基因組中多個抑癌基因的表達，導致腫瘤的發生[9-10]。汪小霞等人[5]研究發現，EZH2在乳腺癌組織中的陽性表達率為59.0%，高于乳腺良性腫瘤組織。本組乳腺癌組織中EZH2的陽性表達率為56.8%，與汪小霞等人的報道基本一致，提示EZH2在乳腺癌的發生發展中起到重要作用。姚凡[11]及其同事采用免疫組織化學法檢測了105例乳腺癌中EZH2蛋白表達情況,并進一步探討其與乳腺癌臨床病理因素及預后的關系。結果認為EZH2蛋白在乳腺癌組織中表達明顯高于乳腺良性疾病,其表達與淋巴結轉移、病理組織學分級、ER表達及乳腺癌預后相關(P<0.05)。本組中我們對EZH2對患者預后的影響做了分析，陽性患者3 a無疾病進展生存率顯著低于陰性組，與姚凡等人的研究結論相似。因此，我們認為EZH2基因的過度表達在乳腺癌的發生發展中起到重要作用，上可通過檢測EZH2的表達水平對患者預后進行預測。

[1] Bauge C, Bazille C, Girard N, et al. Histone methylases as novel drug targets: developing inhibitors of EZH2[J]. Future Med Chem, 2014,6(17):1 943-1 965.

[2] Chou RH, Chiu L, Yu YL, et al. The potential roles of EZH2 in regenerative medicine[J]. Cell Transplant, 2015,24(3):313-317.

[3] Poirier JT, Gardner EE, Connis N, et al. DNA methylation in small cell lung cancer defines distinct disease subtypes and correlates with high expression of EZH2[J]. Oncogene, 2015,34(48):5 869-5 878.

[4] Liu YL, Gao X, Jiang Y, et al. Expression and clinicopathological significance of EED, SUZ12 and EZH2 mRNA in colorectal cancer[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2015,141(4):661-669.

[5] 汪小霞, 孟剛, 李麗, 等. 乳腺癌中EZH2和p53蛋白表達及其臨床意義[J]. 臨床與實驗病理學雜志, 2015,31(3):273-276.

[6] DeSantis C, Siegel R, Bandi P, et al. Breast cancer statistics, 2011[J]. CA Cancer J Clin, 2011,61(6):409-418.

[7] DeSantis C, Ma J, Bryan L, et al. Breast cancer statistics, 2013[J]. CA Cancer J Clin, 2014,64(1):52-62.

[8] Drukker CA, Schmidt MK, van Dalen T, et al. Gene expression classifiers in the prognosis of breast cancer [J]. Nederlands tijdschrift voor geneeskunde, 2014,158:7 001.

[9] Curry E, Green I, Chapman-Rothe N, et al. Dual EZH2 and EHMT2 histone methyltransferase inhibition increases biological efficacy in breast cancer cells[J]. Clin Epigenetics, 2015,7(1):84.

[10]Lee SR, Roh YG, Kim SK, et al. Activation of EZH2 and SUZ12 Regulated by E2F1 Predicts the Disease Progression and Aggressive Characteristics of Bladder Cancer[J]. Clinical cancer research, 2015,21(23):5 391-5 403.

[11]姚凡, 劉崇, 房月, 等. EZH2在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J]. 中國微生態學雜志, 2013,25(2):143-146.

(收稿 2016-03-10)

楊峻峰，電話：051385969908

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